基于毒性相关基因序列的稻瘟病菌群体遗传多样性分析

 选用16对毒性相关基因特异性引物对四川和重庆9个县(市)分离到的200个稻瘟病菌单孢菌株进行PCR扩增,并采用最长距离法进行聚类分析,结果显示各引物均能扩增出其目的条带,多态位点百分率(P)高达93.75%,扩增频率差异较大;200个菌株可归为70个不同的单元型,其中单元型SCH13为优势单元型;在0.86遗传相似水平上,200个菌株可划分为27个遗传宗谱,包括1个优势宗谱,3个亚优势宗谱,14个次要宗谱,9个小宗谱,层次丰富;在群体平均水平上,病菌群体具有丰富的遗传多样性(H=0.324 4,I=0.484 2),且群体间差异较大;9个种群在遗传距离为0.05水平上可分为4个类群,种群遗传谱系与地理区域分布呈一定相关性。同时,该地区的群体存在一定的遗传分化(HT=0.320 0),群体内多样性大于群体间多样性(Hs=0.179 6,Dst=0.140 4),总遗传变异的56.13%存在于群体内(Gst=0.438 7),群体间基因流动性较小(Nm=0.639 6)。本研究揭示了四川和重庆部分区域稻瘟病菌群体遗传结构、遗传多样性及其与地理分布之间的关系,为抗病育种和品种布局奠定了基础。     

Chromosomal and Plasmid Diversity of Agrobacterium Strains Isolated from Ficus benjamina Tumors

Agrobacteria were previously isolated from tumors developing on branches and aerial and hypogeous roots of weeping fig plants in Italy and in The Netherlands. A representative group of 48 strains was analyzed by PCR–RFLP of 16S and 16S + IGS ribosomal regions, PCR–RFLP of six Ti plasmid (pTi) regions and characterized for plasmid content. Two groups of agrobacteria were separated by cluster analysis of PCR–RFLP profiles of rrs gene: seventeen strains were similar to the new species Agrobacterium larrymoorei, while the remaining strains were included within the agrobacterium biovar 1 group. Sixteen different plasmid profiles from one to five plasmids were observed. In addition, 21 ribotypes and 20 pTi structures were arranged in many different combinations, showing that fig agrobacteria were characterized by a wide heterogeneity. A general lack of correlation between strain ribotypes and plasmid content was observed.     

马铃薯金线虫和白线虫DNA特异扩增产物的克隆与鉴定

通过采用Fullaondo（1999）研究的特异引物检测方法,对来自英国和比利时的两个马铃薯金线虫（Globodera rostochiensis）种群和英国的一个马铃薯白线虫（G.pallida）种群的DNA进行扩增,其产物以大肠杆菌（Eschetichia coli）为受体菌,经过连接、转化和克隆纯化,筛选获得阳性克隆.经PCR鉴定和测序,英国和比利时的马铃薯金线虫种群的特异性谱带分别是357bp和350bp,而英国的马铃薯白线虫的谱带是782bp,与Fullaondo等人研究报道结果基本相符,从而鉴别出来自不同地理种群的马铃薯金线虫和白线虫.     

The Comet assay for detection of DNA damage in canine sperm

Sperm DNA integrity is a fundamental prerequisite in fertilization and embryo development. Among DNA integrity tests, the Comet assay is an accurate and sensitive test for the detection of sperm oxidative damage. The aim of this work was to evaluate sperm oxidative damage using the Comet assay and to study the correlation between Comet and routine assays for the evaluation of semen quality. Dogs were divided in two groups: group A (n = 6), comprising dogs with abnormal spermiogram, that is astheno‐, terato‐ or oligoasthenoteratozoospermic (OAT); and group B (n = 8), comprising normospermic dogs. The distribution of sperm oxidative damage was significantly different between the two groups (p = .001): group A—median: 31.55%, interquartile range (IQR): 30.18–38.01; group B—median: 0.90%, IQR: 0.65–1.96. The correlation between oxidative damage and abnormal morphology was high (r = .846; p < .001). There was a negative correlation between progressive motility and oxidative damage (r = ?.792; p = .001). Basal and oxidative DNA damage of spermatozoa are increased in dogs with non‐normospermic semen. In conclusion, and considering the elevated correlation with classical tests of sperm quality, the Comet assay has ample potential for clinical and research purposes in dogs.     

"自杀性"DNA疫苗研究进展

DNA疫苗作为第三代全新的疫苗,具有传统疫苗和其他基因工程苗不可比拟的优点.但由于其安全性方面存在着一些尚待解决的问题,使得实际应用受到限制."自杀性"DNA疫苗是基于常规的DNA疫苗和自主复制型RNA疫苗而发展起来的一种新型疫苗.由于其制备原理和过程与常规DNA疫苗相类似,所以它具备常规DNA疫苗在制作、运输储存以及免疫等各方面的优点.同时由于它以甲病毒复制子为基础能诱导转染细胞自主凋亡,故比常规DNA疫苗更为安全有效.文章针对"自杀性"DNA疫苗载体的构建、作用机理、优点以及国内外研究情况作一介绍.     

新扬州鸡IGF-1基因多态性与早期生长速度关系的研究

以150只非同胞新扬州鸡为材料，采用PCR—RFLP法检测了该基因5’调控区DNA序列多态性，并运用线性模型统计方法分析了多态性与初生重和12周龄体重的关系。结果显示：新扬州鸡IGF-1基因5、调控区自然存在两种不同DNA序列，经。PstⅠ酶切后出现3种基因型(“-／-”、“-／ ”、“ ／ ”)，基因型分布符合哈代一温伯格定律。各基因型个体的初生重、12周龄体重的最小二乘均数存在“-／-”＞“ ／-”＞“ ／ ”的趋势，且“-／-”型个体的12周龄体重显著高于“ ／ ”型个体(P＜0．05)。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒双基因多组合DNA疫苗的构建

本实验根据PRRSV结构蛋白的特性和IFNγ及IL-2这两种细胞因子的特性,构建表达PRRSVGP4-GP5、GP5-M、GP5-N、GP5-IFNγ、GP5-IL-2、N-IFNγ、N-IL-2的重组质粒。这些重组质粒在真核细胞中得到了表达。用这些真核表达质粒可以免疫小猪,通过检测其对猪体免疫应答的诱导能力和接种后动物对PRRSV的抵抗力来对基因疫苗的效能进行研究,以期筛选到有效的基因疫苗并为今后进一步的研究提供思路和理论基础。     

镉对草莓幼苗根尖氧化系统和基因组DNA损伤的影响

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术和生理生化方法检测镉胁迫对草莓幼苗根尖氧化系统和DNA多态性的影响。结果表明,用5、10和15 mg · L-1镉（CdCl2 · 2.5H2O）处理6 d后,草莓幼苗根伸长及根系中可溶性蛋白质含量均受到抑制,根尖活性氧爆发（超氧阴离子产生速率升高和过氧化氢含量增加）,超氧化物歧化酶、过氧化物酶和过氧化氢酶活性下降,DNA增色效应减少。选用8条寡核苷酸引物（10 bp）对草莓幼苗根尖细胞中基因组DNA进行RAPD扩增,对照组图谱中可分辨出88条RAPD谱带,其分子量为150 ~ 3 500 bp,处理组与对照组RAPD图谱之间存在明显差异,且与镉浓度之间存在剂量效应关系。镉影响草莓幼苗根尖细胞中基因组模板的稳定性,活性氧爆发和DNA交联是根尖DNA损伤的主要原因,利用RAPD技术获得的DNA多态性变化可作为检测草莓根尖DNA损伤的指标。     

猕猴桃基因组DNA文库的构建

采用改良CTAB法提取美味猕猴桃(Actinidiadeliciosacv.Bruno)基因组DNA,经CsCl密度梯度离心纯化后用Sau3AI部分酶切,通过透析袋电泳的方法分级回收,剔除14kb以下的片段,回收长为14～23kb的酶切片段。部分酶切片段经dATP和dGTP部分补平后与LambdaFIXII载体连接,连接产物用GigapackⅢPackagingExtract进行包装,最后得到含有1.05×106pfu的基因组文库,扩增后文库滴度为2.5×109pfu/mL。利用6对根据植物基因保守区或猕猴桃基因序列设计的专一引物对基因组文库和基因组DNA进行PCR扩增,均得到与预计长度相符的目的基因片段。RR     

广东省香菇栽培菌株RAPD多态性分析

对广东省5个香菇(Lentinula edodes)栽培菌株或其衍生菌株进行RAPD分析。结果表明,不同菌株间存在着丰富的遗传多样性。RAPD扩增指纹能有效分辨不同菌株的基因型,可为香菇的商业菌株质量监测提供快速有效的技术手段,为规范食用菌菌种生产管理提供科学依据。