山葡萄几丁质酶基因VCH3的克隆及植物表达载体的构建

利用RT—PCR方法克隆了山葡萄几丁质酶基因VCH3的全长cDNA片段,并将该基因构建到双元载体pBI121质粒35S启动子下游,形成重组质粒pBIVCH3。通过冻融法将该重组质粒转化到根癌农杆菌LBA4404中,获得了植物表达载体。     

毛葡萄茎尖的离体培养与植株再生

为了建立毛葡萄茎尖离体培养及植株再生体系,给野生毛葡萄种质资源的超低温保存和无毒苗木培育提供参考,以花溪4和农院-11毛葡萄组培苗的茎尖为材料,研究植物生长调节剂及浓度配比对毛葡萄茎尖离体培养与植株再生的影响.结果表明:毛葡萄茎尖离体培养与增殖培养的适宜培养基为MS+ BA 1.5 mg/L+ IBA 0.02 mg/L,离体培养成活率达93.8％以上,增殖率和增殖系数分别为88.6％和5.8;茎尖生根培养的适宜培养基为1/2MS +IBA 0.05～0.15 mg/L +IAA0.2 mg/L,生根成苗率为100％,建立了毛葡萄茎尖组织培养和植株再生的技术体系.     

葡萄核心种质的构建

【目的】在已建立的葡萄初级核心种质的基础上,利用SSR分子标记技术构建葡萄核心种质。【方法】利用M策略（Core Finder和Power Core）、遗传距离法（least distance stepwise sampling,LDSS和genetic distance optimization,GDOPT）和Core Hunter法构建核心种质, 并对He、Ho和 I值等遗传多样性指数和方差差异百分率（VD%）、均值差异百分率（MD%）、极差符合率（CR%）和变异系数变化率（VR%）等表型指标进行统计检验,同时采用SSR和SRAP分子标记的主坐标分析对其进行确认。【结果】M策略构建的核心种质能保留初级核心种质全部的等位基因,遗传距离法抽取的核心种质对原始种质具有较好的代表性。为使所构建的核心种质具有最大的遗传距离和最大的遗传多样性,对M策略、遗传距离法和Core Hunter法构建的核心种质进行了合并,48份葡萄核心种质以最少的种质材料保留了初级核心种质96.21%的等位基因,以5.53%的取样比例代表了原始整体种质92.90%的遗传多样性。【结论】经分子和表型检验,所构建的核心种质具有较好的代表性和遗传多样性。同时本研究所采用的方法对其它作物核心种质的构建具有重要的参考价值。     

葡萄miR169及其靶基因的生物信息学分析

[目的]明确葡萄miR169(vvi-miR169)基因家族在葡萄生长发育及逆境胁迫响应中的重要作用,为其在葡萄分子育种和抗逆新品种选育中的应用提供参考依据.[方法]利用miRNA、Phytozome、NCBI等数据库及ClustalX 2.1、MEGA 6.0、RNAfold WebServer、psRNATarget等在线软件对vvi-miR169基因家族的序列分布、定位特征、二级结构、发育进化树和靶基因调控功能进行生物信息学分析.[结果]在miRBase中搜索到25条vvi-miR169基因同源序列,分别分布在6条染色体上,其中以位于Chr11上的序列最多,共有17条,位于Chr01、Chr04和Chr14上各有2条,而在Chr08和Chr17上各有1条.vvi-miR169基因家族成熟序列的碱基保守性很高,其前体序列均可形成稳定的二级茎环结构,且位于同一条染色体上的miR169基因序列显示出相对更近的亲缘关系.vvi-miR169基因家族共预测到21个靶基因,绝大部分miRNA都有多个靶基因,且不同miRNA具有相同的靶基因,其中有22个miRNA靶基因均含有GSVIVT01015120001(NF-YA转录因子).[结论]vvi-miR169基因家族序列保守性较高,家族特征明显,且具有相似的调控功能;NF-YA转录因子是vvi-miR169基因家族最主要的靶基因,也是葡萄生长发育过程中抗逆境胁迫的主要调控元件.     

贵州葡萄属3个野生种浆果品质分析

从外观品质和内在品质两个方面评价了原产于贵州的6份野生葡萄浆果品质。结果表明,贵州野生葡萄果粒小、糖酸比低、出汁率低、丹宁含量高。果实品质存在种间差异,其中刺葡萄的果穗和果粒较大,毛葡萄的可溶性固形物含量(15.97%)高于对照水晶,而腺枝葡萄的单宁含量高达1 178.17 mg.L-1,为对照的2.63倍。同种不同单株间果实品质差异大小因种而异,外观品质中差异最明显的是腺枝葡萄的两个单株,刺葡萄的两个单株品质差异也较明显,而毛葡萄的两个单株品质差异较小。刺葡萄菜园刺2006年和2007年的果实品质明显不同。     

欧亚种葡萄塑膜大棚栽培催芽试验

采用两因素试验设计法,使用3种化学药剂对塑膜大棚栽培的4个欧亚种葡萄(Vitia vinifera L.)品种在深度休眠期进行了催芽试验.结果表明,石灰氯(CaCN2)和芽灵处理后,维多利亚、粉红亚都蜜、红高和香妃4个品种的果实提前1～4d成熟,GA3处理的品种延迟1～2 d成熟;各品种的萌芽率都有不同程度地降低,但与对照比较,差异不显著.处理后果实单粒重有所提高,有机酸含量有下降趋势,二者在品种、药剂两因素中皆存在极显著差异;果实的可溶性固形物含量和固酸比明显提高,品种间、药剂间、品种与药剂两因素互作间皆存在显著或极显著差异.石灰氮处理可使维多利亚、粉红亚都蜜、红高3个品种果实的成熟期提早3～4d,植株最终萌芽率下降轻微,果实单粒重、可溶性固形物含量和固酸比明显提高,是塑膜大棚栽培的欧亚种葡萄催芽破眠的安全理想药剂.     

欧洲葡萄栽培和酿酒在中国的传播

欧洲葡萄(Vitis vinifera L．)栽培和酿酒引入中国西部的时间是在西汉以前,引入中部地区的时间是在西汉。引入的路线是从中亚到汉代西域,再至都城长安,然后逐渐向东部地区传播,先至河南、山西,之后扩散至河北、山东以及其他地区。中国古代人民培育出许多著名的葡萄品种,采用了独特的葡萄栽培方式。自然发酵的葡萄酒基本上是在西域地区生产,广大的中东部地区很少采用这种技术。自然发酵在东部广泛应用的时期是元代,中国现代葡萄栽培和酿酒技术始于1892年。目前,欧洲葡萄栽培和酿酒已成为我国新疆、山东、河北等地农业和轻工业中的重要组成部分。     

中国野生毛葡萄芪合酶基因表达及对葡萄抗白粉病的影响

[目的]克隆中国野生毛葡萄(Vitis quinquangularis)'丹凤-2'芪合酶(stilbene synthase)基因(STS)并研究其功能,为提高欧洲葡萄(V.vinifera)的白粉病抗性及品质提供依据.[方法]利用同源克隆法获得中国野生毛葡萄'丹凤-2'芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21,构建植...     

四倍体葡萄诱导技术的研究

 以秋水仙素为诱变剂，利用茎段浸泡和秋水仙素培养基两种方法对二倍体京秀和红地球2个品种的葡萄(Vitis. vinifera)组培苗进行诱导，并采用流式分析仪对诱变植株的细胞DNA含量进行鉴定。结果表明，茎段浸泡秋水仙素法诱导四倍体葡萄的效果优于秋水仙素培养基法。在低浓度秋水仙素（2000 mg•L-1或低于2000 mg•L-1）溶液中浸泡时间短于48 h的所有处理，仅在继代2~5次后获得了纯合四倍体植株；在秋水仙素浓度2000 mg•L-1对茎段浸泡3 ~4 d或3000 mg•L-1 和4000 mg•L-1对茎段浸泡2~4 d，在茎段扦插的当代就获得了纯合四倍体植株，诱变四倍体植株的适宜条件为在秋水仙素3000 mg• L-1 茎段浸泡3~4 d，纯合四倍体植株获得的比率为16.7~23.3%。     

Evaluation of fungicides to control Petri disease pathogens in the grapevine propagation process

The efficacy of fourteen selected fungicides against Phaeomoniella chlamydospora and Phaeoacremonium aleophilum was evaluated in vitro by mycelial growth and conidial germination assays. Azoxystrobin, carbendazim and tebuconazole were the most effective fungicides against P. chlamydospora, while carbendazim and didecyldimethylammonium chloride were the most effective against P. aleophilum. An assay was also conducted with cubiet, hydroxyquinoline sulphate and didecyldimethylammonium chloride to determine their potential to prevent infections caused by these pathogens during the hydration stage in grapevine propagation. The results of this experiment demonstrated that P. chlamydospora and P. aleophilum were able to infect healthy cuttings during the hydration stage and showed that didecyldimethylammonium chloride was consistently the best treatment as a disinfectant soak for grapevine cuttings. Additionally, semi-commercial trials were conducted in two grapevine nurseries to evaluate the effectiveness of several strategies with carbendazim, flusilazole and hydroxyquinoline sulphate at different nursery stages. Soaking planting material in carbendazim during the hydration stage was the most effective treatment since neither P. chlamydospora nor P. aleophilum were isolated from planting material in either nursery.