RNA可视化原位杂交技术对感染细胞中猪瘟病毒RNA定位与分布

【目的】为研究CSFV RNA在体外感染细胞中的分布及定位,建立了一种准确、敏感的RNA可视化原位杂交技术。【方法】本研究通过比对GenBank公布的CSFV、BVDV和BDV全序列,避开BVDV和BDV的同源区,设计了CSFV RNA及内参基因β-actin的特异探针。以CSFV中等致病力毒株（HeBHH1/95）为参考毒株,在PK15细胞中培养病毒,加入RNA可视化原位杂交特异探针和相应试剂,采用荧光共聚焦显微镜进行成像观察。通过综合分析观测结果、荧光强度、重复性等因素,采用正交试验优化了对原位杂交过程中具有重要影响的蛋白酶K浓度和甲醛固定时间,建立了CSFV RNA可视化原位杂交技术,并与FAT方法比较该技术灵敏度;用我国目前流行的CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3基因亚型及BVDV、PPV、PRV和PCV-2病毒进行特异性试验。最终,以CSFV强致病力毒株（SM）接种PK15细胞,病毒感染后0.5、1、3、6、8、10、14、18、24、36、48、72、96h(hours post inoculation,hpi)取样,每个时间点2个重复,采用CSFV RNA可视化原位杂交技术进行检测。为佐证病毒蛋白在细胞中的定位及分布,同时采用FAT方法对SM株E2蛋白在PK15细胞中的表达情况进行动态研究。【结果】采用该技术在荧光共聚焦显微镜下可观察到CSFV RNA在细胞中的定位;当蛋白酶K浓度为1:1 000、甲醛固定时间为30min时为最优反应条件;灵敏度试验表明该技术对病毒的检测极限为10-8/200μL,比FAT高3.5个数量级;特异性试验结果显示该探针能与CSFV 1.1、2.1、2.2、2.3亚型结合,与BVDV、PPV、PCV-2、PRV无交叉反应。采用该技术对CSFV RNA感染后在靶细胞中的定位与分布研究结果显示:0.5hpi在胞核和胞浆均能检测到RNA,0.5-6hpi RNA主要分布于胞核内并在核内富集;10hpi胞浆内RNA逐渐增多,胞核内RNA逐渐减少,24hpi RNA主要集中在胞浆内细胞核周围;36hpi核外RNA大量聚集增多,72hpi达到峰值;96hpi RNA总量有所下降。而FAT结果显示：8hpi在少数细胞的胞浆内检测到病毒E2蛋白,10-24hpi蛋白表达数量一直较少;36hpi蛋白表达量不断增多,72hpi到最大值;96hpi荧光信号由强变弱。病毒蛋白在细胞浆内的聚集数量与细胞浆中RNA含量成正相关。【结论】首次建立了CSFV RNA可视化原位杂交检测技术,并对CSFV强致病力毒株在细胞中的RNA定位分布进行了研究,发现病毒RNA吸附和进入靶细胞的时间早于0.5hpi,观察到CSFV RNA有在细胞核内的生活史。     

猪瘟病毒基因组及基因工程疫苗研究进展

本文着重介绍了猪瘟病毒基因组结构组成、基因组产物和以基因组为研究对象开展的亚单位疫苗、活栽体疫苗、标记疫苗等新型基因工程疫苗的研究现状。     

百合组培球茎尖剥取技术研究

[目的]研究百合组培球茎尖剥取技术。[方法]对不同直径大小的组培球对百合剥取茎尖的影响及不同大小的茎尖对百合脱毒效果的影响进行研究。[结果]大于0.5 cm的百合组培球适合茎尖剥取;在组培球剥取茎尖过程中,剥取0.4~0.7 mm大小的茎尖适合百合脱毒的培养。[结论]为百合种球生产提供技术支撑。     

海南省冬季蔬菜病毒病发生情况调查

病毒病是海南冬季蔬菜生产上的一类重要病害,发生为害日趋严重。通过对海南17个市县88个乡镇冬季蔬菜病毒病发生情况调查,同时采用ELISA或PCR方法对田间采集的1 385份样本进行病毒检测,结果表明:病毒病发生严重程度依次为黄瓜辣椒小白菜南瓜樱桃番茄菜豆豇豆。150份黄瓜样本中,CMV、CGMMV和TMV检出率分别为63.3%、22.67%和21.33%;180份南瓜样本中,CMV、TMV和CGMMV检出率分别为53.89%、5%和1.12%;220份辣椒样本中,CMV、TMV和TSWV检出率分别为49.1%、41.4%和1.53%;170份樱桃番茄样本中,TMV、CMV、BBWV和粉虱传双生病毒检出率分别为40%、34.7%、1.18%和3.53%;350份小白菜样本中,Tu MV和CMV检出率分别为49.1%和20.9%;130份菜豆样本中,CMV和BBWV检出率分别为30%和12.3%;195份豇豆样本中,CMV和BBWV检出率分别为9.2%和2.6%。CMV可以侵染已检测的4个科的所有蔬菜种类,检出率在9.23%~63.33%。已检测的所有蔬菜种类中,均存在2种或2种以上病毒的混合侵染,混合侵染率在0.56%~26.36%。     

新疆加工番茄病毒病害的调查

对新疆奎屯、石河子、玛纳斯、昌吉、焉耆和博湖等加工番茄产区进行了加工番茄病毒病害调查。结果表明:加工番茄病毒病害2005~2006年间各地发病率达63%~91%,在田间主要表现为花叶、条斑坏死、蕨叶畸形、曲叶和矮化等多种病害症状,以花叶和坏死条斑为主,其中花叶占78%,条斑占37%,并且条斑症状90%以上都伴有花叶症状。病毒种类以TMV为优势病毒种类,占86.4%;CMV次之,占28.1%,TMV和CMV复合浸染占17.7%,PVY有零星发生,占3.2%。另外,调查显示新疆加工番茄病毒病害的发生严重程度与栽培措施有一定的关系。     

药用植物粗提物对罗汉果花叶病毒病的防治作用研究

[目的]寻找有效防治罗汉果花叶病毒病的方法。[方法]研究测定4种药用植物粗提物对罗汉果病毒病的防治作用。[结果]结果表明,板蓝根、贯众、大黄和黄芩的粗提取物对罗汉果病毒病的防治效果分别为73．10％、46．20％、46．20％和57．60％;板蓝根粗提取物用水稀释5、10、50、100和200倍液对罗汉果病毒病的防治效果分别为77．48％、59．15％、59．15％、52．14％和43．69％。[结论]该研究为探讨防治罗汉果病毒病的新途径提供理论依据。     

辣椒疮痂病、黑霉病、软腐病、病毒病、猝倒病和白绢病的识别与防治

介绍了辣椒疮痂病、黑霉病、软腐病、病毒病、猝倒病和白绢病的危害症状、发病特点,指出防治这些病害应在种植抗病品种的基础上,加强栽培管理,提高植株抗病能力,采用以铲除菌源和药剂保护为重点的综合防治措施。     

几种番茄病毒病的症状识别特征与防治策略

本文简述了番茄斑萎病毒病、番茄黄化曲叶病毒病、番茄褪绿病毒病、番茄花叶型病毒病、番茄蕨叶型病毒病5种主要番茄病毒病的症状识别特征。提出加强植物检疫、选用抗病品种、诱虫板与防虫网联用、切断人为传播和昆虫传播途径、调整定植期、清洁田园环境、合理选择杀虫剂进行杀虫控病等防治策略和防治措施,为番茄产业绿色发展提供了建议和参考。     

Morphological analysis of viral communities in the floodwater of a Japanese paddy field

Capsid size distributions of viral communities in the floodwater of a Japanese paddy field under a long-term fertilizer trial were surveyed during the rice cultivation period by using transmission electron microscopy. The capsid size distributions were monophasic, and the median values fell within the range of 50-70 nm. The quartile intervals were narrow from either 40-50 nm or 50-60 nm to either 60-70 nm or 70-80 nm for most samples. There was no clear seasonal variation in the capsid size distribution of viral communities. The difference in size distributions among different fertilizer plots was also not found. Viral communities in the floodwater were predominated by isometric icosahedral forms. Viruses with octahedral capsids and elongated ones were rare and sporadic in the floodwater.     

植物源抗病毒剂20%丁香酚AS防治西葫芦病毒病药效试验

田间药效试验结果表明:20%丁香酚AS对西葫芦病毒病具有优良的防治效果,270 g/hm2和135 g/hm220%丁香酚AS 2次药后7 d的防效分别为73.29%和64.98%,显著优于对照药剂,对西葫芦安全。