水稻草状矮化病毒沙县分离株基因组第六片段的序列分析

 根据已报道的水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV) IRRI分离株第6片段的RNA序列设计引物,通过RT-PCR得到覆盖RGSV沙县分离株(RGSV-SX)基因组第6片段全长序列的cDNA克隆并进行序列分析,发现其与IRRI分离株的核苷酸序列同源性高达99.3%,并对这一结果的可能原因作出分析。     

龙眼胚性愈伤组织体胚发生的同步化调控及其DNA与RNA的提取方法

过改进培养基的配方,控制2,4-D和蔗糖浓度以及培养时间,获得了龙眼胚性愈伤组织体胚发生各个阶段即球形胚、心形胚、鱼雷形胚、子叶形胚、成熟体胚等阶段高度同步化的胚性培养物;对龙眼胚性培养物进行了DNA、RNA提取方法研究,获得了完整、高质量的DNA和RNA,摸索出一套简便、快捷、有效的DNA提取方法,并对提取的RNA进行了反转录及PCR扩增试验,为龙眼体细胞胚胎发生的分子生物学研究奠定了重要基础。      

改良CTAB-LiCl法提取枣总RNA体系的建立

本试验以枣树田间枝条的枝皮及组培苗为材料,应用改进的CTAB法进行了总RNA的提取。针对枣组织中富含多糖多酚的特点,改进了CTAB法,采用β－巯基乙醇和PVP去除酚类,KAc及无水乙醇去除多糖,LiCl沉淀过夜的方法提取得到的RNA,条带整齐、清晰,A260/A280介于1.8~2.0之间,A260/A230均大于2.0,证明得到的RNA纯度、完整性和产率均较高,蛋白、多糖及酚类等去除较彻底。结果表明,本试验建立的改良CTAB-LiCl法适于进行枣总RNA的提取     

瘤胃微生物总DNA提取方法的比较

目前如何获得完整的瘤胃微生物总DNA是对瘤胃微生物在分子水平研究中关键的一步。瘤胃微生物总DNA分子片段很大,大概在15kb~20kb,因此需要选择一种合适的提取方法来获得完整的总DNA片段。笔者研究采用物理方法如玻璃珠研磨震荡法、反复冻融法、超声波破碎法、液氮研磨法等,化学方法如表面活性剂十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）、溴化十六烷三甲基铵（Cetyltrimethyl Ammonium Bromide,CTAB等）,酶解法（溶菌酶、蛋白酶K等）相结合,并对其进行比较,选择最佳的提取方法,使其符合以后PCR扩增要求以及其它后续研究工作。试验结果表明用玻璃珠研磨震荡加CTAB提取液的方法、反复冻融加SDS提取液的方法提取的瘤胃微生物总DNA的效果高于其它方法,并且通过电泳以及PCR检测,所提取的DNA的量适于进一步的分子生物学研究。     

几个甘蓝型油菜雄性不育系花药败育过程中核糖核酸酶的变化

以5种不同类型甘蓝型油菜雄性不育系为材料,以保持系为对照,对其花药败育过程进行了研究,发现其败育过程中核糖核酸酶活力及游离尿苷酸（UMP）含量显著升高,而RNA及可溶性蛋白质含量显著下降。不育系雄蕊的核糖核酸酶活力与RNA含量呈负直线相关,相关系数为－0.9796**。认为核糖核酸酶活力异常增强与甘蓝型油菜雄性不育有密切关系。     

多功能复合材料对土壤物理性质的影响

通过模拟实际植树造林操作方法,进行了不同浓度梯度多功能复合材料对土壤物理性质影响的研究。结果表明：多功能复合材料可以降低土壤的pH值和土壤容重,提高土壤总孔隙度,提高土壤阳离子交换容量。随着施用多功能复合材料浓度的增大,土壤中＞0.25mm的团聚体含量增加,当保水剂用量为50g时,＞0.25mm的团聚体含量比对照提高了约8.91%~12.50%。     

RNA干涉及其抗病毒应用研究进展

综述RNAi的机制,植物与病毒相互作用的机制,及RNAi在植物抗病毒育种中的应用研究进展,并展望其研究前景。     

甘薯羽状斑驳病毒海南分离物全基因组序列克隆及分析

为了明确海南本地甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)种群的遗传进化关系及致病机理,本研究利用Small RNA测序技术对采自海南的甘薯样品进行鉴定,获得与SPFMV序列具有相似性的85个contigs,与NC_001841相似性较高。试验设计了5对共8条引物,分别为SPFMV-1F/1R、SPFMV-11F/1R、SPFMV-2F/2R、SPFMV-3F/3R和SPFMV-3F/33R PCR,扩增获得3987 bp、3710 bp、1996 bp、3369 bp和4730 bp目的片段。在此基础上再分段设计引物,进行基因全序列PCR扩增,序列拼接获得SPFMV-HN基因组全序列,其包含完整编码阅读框。本研究结果首次报道SPFMV海南分离物基因组全长,并且在P1区预测到另一个外框元件(pretty interesting sweet potato potyviral ORF,PISPO),聚合酶滑移机制可以产生带有额外核苷酸的转录变体,这些核苷酸可以翻译为P1N-PISPO和P3N-PIPO。本研究结果为进一步探究SPFMV致病分子机理和培育抗病甘薯品种奠定研究基础。     

2种微藻总RNA提取方法的比较

以微茫藻和莱茵衣藻为材料，比较Trizol试剂法和SDS-LiCl沉淀法提取2种微藻总RNA的效果，以期筛选出适合微藻RNA的提取方法。结果表明，SDS-LiCl沉淀法能从微茫藻中提取高质量的RNA，而Trizol法和SDS-LiCl沉淀法均能从莱茵衣藻中获得高质量的RNA，但Trizol法更为简单有效。RT-PCR结果表明，SDS-LiCl沉淀法提取的微茫藻总RNA和Trizol法提取的莱茵衣藻总RNA都能直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。