几种内生真菌DNA提取方法的比较

通过3种内生真菌DNA提取方法的比较,即CTAB法、SDS法、改良的CTAB法,结果表明三种方法都能得到目的DNA,而且得率都较好,但改良的CTAB法效果最好,不仅DNA纯度高且质量也好.用改良的CTAB法所提取的DNA作为模板,进行PCR扩增,得到了清晰的、单一的扩增普带,完全可用于酶切、测序等后续实验.     

三种DNA提取方法对检测草莓镶脉病毒稳定性的研究

草莓成熟叶片中含有大量的多糖、蛋白质、多酚和色素等物质,影响高质量DNA的提取和下游PCR反应的进行。为确定适用于PCR技术检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的DNA提取方法,从草莓叶片中提取DNA后,对样品中的SVBV进行特异性的PCR检测,比较确定不同DNA提取方法对PCR检测SVBV稳定性的影响。以感染SVBV的草莓叶片为材料,分别采用CTAB试剂盒法、高盐低pH法、改良SDS法提取草莓叶片的总DNA,将不同方法提取的DNA通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳法进行测定,对DNA产量和质量进行分析。结果表明,3种方法均能获得较为完整的DNA片段,用CTAB试剂盒提取的DNA质量最高,改良SDS法提取的DNA质量较低。将不同方法提取的DNA经过PCR反应特异性检测SVBV后,将与目的片段大小一致的PCR扩增产物经序列测定及分析,证明与SVBV的序列相吻合,证明了方法的可靠性,其质量能够满足PCR特异性检测需要。     

棉花基因组DNA快速提取方法改良

选择2种简化的棉花基因组DNA提取方法并进行适当精简改良后与传统CTAB提取法进行实验对比的结果显示,改良SDS-CTAB法所提DNA得率较高,纯度好,但其操作步骤相对复杂。改良CTAB法操作更加简捷,但DNA得率相对较低,所得DNA溶液浑浊度较高。相对于传统的CTAB提取法,两种改良方法都能够更加快捷的得到足量且纯净的基因组DNA,完全能够满足转基因后代PCR筛选检测的要求。     

2种提取椰子树RNA方法的比较研究

椰子树组织中富含多糖和酚类化合物，为了获取高质量的RNA，笔者以椰子树叶片和根部为材料，比较分析CTAB法和SDS法提取RNA的效果。结果表明：CTAB法提取椰子树组织的总RNA效果较好，能有效克服酚类物质和多糖对RNA提取的影响。经OD值检测和电泳检测，总RNA的28 S和18 S条带清晰可见，纯度较高，完整性好，无明显降解，以此RNA为模板进行RT-PCR反应，能获得特异条带，表明该RNA完全可以用于后续的分子生物学操作。     

鸡毒支原体C株的分离鉴定及与其它北京株结构蛋白的比较分析

本文对北京某鸡场气囊炎病进行了支原体的分离和鉴定,并将此分离株与北京另两个分离株ＢＧ４４Ｔ、ＮＢ７２的结构蛋白通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行了比较分析。结果表明此分离株（命名为Ｃ株）可发酵葡萄糖,不水解尿素和利用精氨酸,是一具有毒力较强的鸡毒支原体株。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明,此分离株与ＮＢ７２株相当一致,与ＢＧ４４Ｇ株有相对较大的区别。我们认为,Ｃ株和ＮＢ７２株具有同源性,鸡胚液制造的活疫苗中支原体的污染可能源于鸡胚培养时采用了ＭＧ感染病鸡所产蛋,另外,还可看出北京地区的支原体感染存在着一定的多样性。     

鹿茸基因组DNA提取方法的比较研究

本研究旨在建立一种稳定、高效的鹿茸药材DNA提取方法,以满足后续的鹿茸DNA条形码鉴定方法需求。采用2种试剂盒、改良的CTAB法以及SDS法对市场上5个厂家共8批次的鹿茸药材进行基因组DNA的提取,参考2015版《中华人民共和国药典》四部通则9107考察了样品量、水浴温度、水浴时间3个因素。实验结果表明4种方法均可以从鹿茸药材中提取出基因组DNA,其中天根试剂盒提取效果最佳,改良的CTAB法提取效果较差;通过方法学考察得出使用天根试剂盒,提取条件为样品量70 mg、水浴温度56℃,水浴时间6 h时提取效果最佳。本研究优化得到的天根试剂盒提取鹿茸DNA方法操作简便,提取DNA浓度、质量优良,能够用于后续的DNA条形码鉴定中。     

不同方法提取大豆基因组DNA的效果比较

[目的]采用不同方法对大豆基因组DNA进行提取,为大豆基因组DNA的提取提供参考。[方法]采用CTAB法、SDS法和高盐低pH值法对大豆基因组DNA进行提取,对提取的DNA进行光密度、紫外光谱、琼脂糖凝胶电泳和DNA限制性内切酶图谱等的检测。[结果]光密度和光谱检测结果表明,SDS法的提取量和纯度均优于CTAB法和高盐低pH值法;琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,SDS法提取的基因组DNA谱带较CTAB法和高盐低pH值法提取的基因DNA谱带粗、亮、重复性好;限制性内切酶检测结果表明,3种方法所得基因组DNA均能被胁谢Ⅲ和EcoRI酶切,但SDS法所得基因组DNA的酶切效果最好。l结论ISDS法的提取效果明显优于CTAB法和高盐低pH值法。     

多小穗小麦品系10一A及其改良系的谷蛋白分析

应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析了多小穗小麦品系１０－Ａ以及来源于三交组合１０－Ａ／８８－１６４３／川育１２号的５６个稳定品系的谷蛋白。结果表明,１０－Ａ、８８－１６４３和川育１２号的谷蛋白带纹各不相同,能彼此区分。在这５６个后代品系中,高分子量谷蛋白带纹出现了与８８－１６４３、川育１２号一致的类型以及４种三亲本间的重组类型,没有出现１０－Ａ的谱带类型和突变类型。在这些品系中,有８个品系含优质亚基组合２,７＋８,５＋１０（占１４．３％）,１１个品系含优质亚基组合１,７＋８,５＋１０（占１９．６％）。     

大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白的研究

为了研究在大肠杆菌BL21 (DE3)中重组蛋白的表达特点,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点,从表达载体中表达了植物ACC合成酶.经SDS-PAGE电泳与双波长扫描分析,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加.但是其最佳表达时间为2.5 h,菌液密度OD600为0.6,IPTG的最佳浓度为0.6 mmol/L,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高.植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在,未能检测到可溶性蛋白的表达.     

大豆猝死综合症病原菌北美种的PCR鉴定

 应用等位基因特异性PCR(allele-specific PCR,AS-PCR)技术,建立了大豆猝死综合症(sudden death syndrome of soybean,SDS)病原菌北美种Fusarium virguliforme与其近似种Fusarium phaseoli(菜豆根腐病菌)的鉴别方法。针对翻译延长因子(EF-1α)基因上的3个SNP(单核苷酸多态性)位点,参照引物设计原则和等位基因特异引物(allele-specific primer,ASP)的要求设计了1对引物Fsg-α-1/2,能特异地扩增F.virguliforme,产生327 bp的电泳条带。另外,根据ITS区序列设计了1对通用引物Fu1/2,能扩增F.virguliforme和F.phaseoli,产生452 bp的电泳条带。本实验在传统的AS-PCR基础上进行改进,引入Fu1/2作为阳性质控引物,将ASP的特异性与双重PCR的严谨性相结合,建立了简便可靠的SDS病原菌鉴定方法。