兔肝金属硫蛋白提取液的稳定性

研究Tris-HCl浓度、pH、温度、光照和乙醇对金属硫蛋白提取液稳定性的影响,为金属硫蛋白的研究提供资料.结果表明,金属硫蛋白在低浓度Tris-HCl中较稳定,0.01和0.02 mol/L Tris-HCl对其稳定性影响最小;pH对金属硫蛋白稳定性影响较大,pH 6～7时较稳定;光照对金属硫蛋白稳定性影响比较明显,其对硫蛋白具有破坏作用;乙醇对金属硫蛋白有明显的保护作用;金属硫蛋白具有很强的耐热性.     

以组织锌、金属硫蛋白及其基因表达指标评价肉仔鸡对锌源的相对生物学利用率

研究了有机锌源和无机锌源条件下肉仔鸡组织中金属硫蛋白(MT)的基因表达。在肉仔鸡饲粮中以锌蛋白盐或硫酸锌形式添加锌200mg/kg饲喂6d或12d,比较肝、小肠MT和MTmRNA与骨锌作为评价锌源利用率的指标。3种指标均随锌量的增加而增加(P<0 001)。以骨锌为指标,锌蛋白盐的相对生物利用率为124%。此值在一定范围内类似于以几种组织MT和MTmRNA水平为指标的测定结果,对于肉仔鸡,MT基因的调控可能是评价锌相对生物利用率的敏感指标。这种方法可减少试验所需的时间和动物数量。     

Metallothionein inhibits rat vascular fibroblasts activation induced by homocysteine

AIM:To study the effects of exogenous metallothionein (MT) and ZnCl₂-induced MT production on biological action of homocysteine(HCY)in vascular fibroblasts.METHODS:[³H]-TdR, [³H]-Pro incorporation and LDH leakage were measured, the cellular viabilities were calculated by trypan blue exclusion test and the intracellular contents of MT were assayed by [¹⁰⁹Cd]-hemoglobin saturation method in cultured rat vascular fibroblasts.RESULTS:Proliferation, collagen production of vascular fibroblasts in HCY-treated group were significantly increased compared with control group in a concentration-depedant manner. HCY (500 μmol/L) increased LDH leakage and decreased the cellular viabilities (P＜0.05 or P＜0.01). [³H]-TdR incorporation, [³H]-Pro incorporation, collagen secretion and LDH leakage were all decreased in MT (1×10^-5 mol/L, 1×10^-4mol/L) plus HCY(500 μmol/L) incubated group, compared with HCY alone group, respectively (P＜0.05 or P＜0.01). MT content in ZnCl₂ pretreatment group was increased compared with control group. Proliferation, collagen production and LDH leakage in HCY group pretreated with ZnCl₂ were decreased whereas the cellular viabilities were increased compared with HCY alone group.CONCLUSIONS:The results shows that HCY induces proliferation and collagen production of vascular fibroblasts. Both exogenous MT and endogenous MT induced by ZnCl₂ inhibite the above-mentioned effects of HCY on vascular fibroblasts. MT inhibites vascular fibroblast activation induced by HCY, which may be related to its vascular protection.     

根癌农杆菌介导的mMT-IcDNA转化枸杞及其表达的研究

报道了小鼠金属硫蛋白－ＩｃＤＮＡ通过根癌农杆菌介导转入枸杞,并在枸杞体内表达产生富集锌的转基因枸杞。用带有嵌合ｍＭＴ－ＩｃＤＮＡ及ｃａＭＶ３５ｓ启动子的含非致癌性Ｔｉ质粒载体的概癌农杆菌ＬＢＡ４４０４（ｃａＭＶ３５ｓ：ｍＭＴ－ＩｃＤＮＡ：ｎｏｓ）感染枸杞幼茎外植体,在含有Ｋｍ１００μｇ／ｍｌ和Ｚｎ＾２＋５０μｍｏｌ／Ｌ的选择培养基上筛选转化的愈伤组织,并在含Ｋｍ５０μｇ／ｍｌ,Ｚｎ＾２＋１００μｍ     

白桦金属硫蛋白的生物信息学分析（英文）

[目的]分析白桦金属硫蛋白的生物信息学信息,为后续基因重要功能研究奠定基础。[方法]利用生物信息学方法和工具对白桦（Betula platyphylla）金属硫蛋白（metallothionein,MT）的理化性质、跨膜结构、疏水性/亲水性、二级结构、结构功能域、功能分类进行了分析和预测。[结果]金属硫蛋白的分子量为7.75 kD,等电点为5.66,中部有较强疏水区,而其两端为明显亲水区,其可能为非跨膜蛋白,主要构件为卷曲,属于Metallothio_2蛋白家族。[结论]该研究可为白桦金属硫蛋白基因功能研究提供参考。     

Changes of metallothionein contents in plasma and tissues of rabbit with atherosclerosis

AIM: To observe the level of metallothionein (MT) in liver, aorta and plasma of rabbit with atherosclerosis (AS) in order to recognize the alteration of oxidative defense system in body when AS occurred.METHODS:Preparation of AS model of rabbit induced by having high-fat diet for eight weeks; the levels of MT and malondialdehyde (MDA) were measured in the tissues of liver and aorta and plasma of rabbit.RESULTS:The MT levels in liver tissues and plasma in atherosclerotic group increased 318%(P＜0.01) and 62% (P＜0.01), compared with control group, but its level in aortic tissue in atherosclerotic group decreased 33% (P＜0.01). The MDA levels in liver, aortic and plasma in atherosclerotic group increased 95%(P＜0.01), 76%(P＜0.01) and 42%(P＜0.01), respectively, compared with control group. The changes of contents of MT in liver and plasma have relation with level of MDA in liver tissues and plasma.CONCLUSION:The alteration of MT in liver tissues and plasma in atherosclerotic rabbits may be related to lipid hyperoxidative injury.     

金属硫蛋白基因转化黄瓜的研究

以黄瓜无菌苗子叶切段为外植体,通过叶盘转化法与根瘤农杆菌进行共培养建立了黄瓜的遗传转化体系.比较了不同苗龄,不同侵染时间对黄瓜离体再生的影响,并做了潮霉素敏感性测试.结果表明:苗龄3～4 d的子叶,侵染时间为15min,潮霉素浓度为25 mg/L最适分化出抗性小苗.最终获得3株抗性植株,经过PCR和PT-PCR检测,初步确定均为阳性转化植株.     

大珠母贝金属硫蛋白cDNA克隆与序列特征分析

[目的]探讨重金属对大珠母贝苗种存活的影响。[方法]对大珠母贝金属硫蛋白基因进行克隆和序列分析。[结果]结果表明,通过构建大珠母贝外套膜全长cDNA文库,首次克隆得到大珠母贝金属硫蛋白（PmMT）全长cDNA序列。该序列全长599 bp,5′UTR（Un-translated region）为75 bp,3′UTR为296 bp,开放阅读框（Open reading frame,ORF）为228 bp,编码75个氨基酸。编码的氨基酸中半胱氨酸含量丰富,达29.3%;赖氨酸和甘氨酸含量也较高,均为9.3%;不含苯丙氨酸、组氨酸、色氨酸和酪氨酸等芳香族氨基酸;含有软体动物等无脊椎动物金属硫蛋白的特征序列。序列特征分析表明,该序列具备金属硫蛋白的典型特征,是金属硫蛋白家族成员。[结论]该研究为海洋贝类金属硫蛋白的进化及功能研究提供基础资料。     

龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究

以龙葵为试验材料,利用RT-PCR技术分离到2个长度不同的编码Ⅱ类MT（金属硫蛋白）的cDNA克隆SorMT2a（EU760481）和SorMT2c（EU760483）,成功构建植物表达载体pROKⅡ-SorMT2a和pROKⅡ-SorMT2c,通过农杆菌介导法转化烟草并通过PCR验证了基因的表达情况。与野生植株相比,转SorMT2a和SorMT2c基因烟草对镉的耐受性不同,有的转SorMT2a基因植株在MS培养基中的CdCl2浓度达到200μmol/L时仍然生长良好,生物量和株高均大于野生型植株;而转SorMT2c基因植株对镉的耐受性没有提高。这说明SorMT2a基因在植物对镉的耐受性中起作用,而SorMT2c基因则不起作用,从而也说明了同一类基因不同家族可能具有不同功能。     

水稻3型金属硫蛋白基因的分离和表达研究

[目的]对从水稻幼苗中分离的2个3型金属硫蛋白基因OsMT-I-3a和OsMT-I-36的结构进行了分析,并对其表达模式进行了检测。[方法]利用Blast搜索水稻数据库,设计引物并利用RT—PCR的方法克隆OsMT-I-3基因cDNA全长。通过多重比对等方法对其基因和蛋白结构进行了分析。利用Northem杂交对这两个基因的组织表达模式和环境应答模式进行了检测。[结果]OsMT-I-3a和OsMT-I-3b分别编码62和65个氨基酸的多肽,具有典型的3型金属硫蛋白的半胱氨酸分布模式。OsMT-I-3a基因在叶片中没有检测到表达,OsMT-I-3b在叶片中高表达,且各种非生物胁迫因素会影响两种基因的表达模式。[结论]I类3型2个水稻MT基因可能参与水稻多种环境胁迫的信号通路,在水稻抗非生物胁迫过程中起作用。