姬松茸ISSR特异扩增体系的研究

为了建立稳定的姬松茸(Agaricus blazei Murill)简单序列重复区间(Inter-Simple Sequence Repeats,ISSR)分子标记技术体系,笔者通过单因子试验分别研究了模板DNA、Mg2 浓度、dNTP、引物浓度和Taq酶用量对姬松茸ISSR-PCR扩增的影响,确定了姬松茸ISSR分析的最佳PCR条件为:25μL反应体系中,模板DNA20ng,引物0.75μmol/L,dNTP200μmol/L,Mg2 2.0mmol/L,Taq DNA polymerase 1.5U。并应用该优化体系筛选到6个适合姬松茸ISSR-PCR扩增的引物,为利用ISSR标记技术研究姬松茸的种质资源提供了参考。     

扁穗牛鞭草种质遗传多样性的ISSR分析

用ISSR标记对来自中国西南地区(四川、重庆、贵州)的28份扁穗牛鞭草材料的遗传多样性进行了检测。从96个ISSR引物中共筛选出13个多态性明显、反应稳定的引物。28份材料的DNA共扩增出129条谱带,平均每个引物扩增出9.9条带,多态性条带比率达84.2%。材料间遗传相似系数为0.466~0.980,表现出丰富的遗传多样性。通过聚类分析和主成分分析,将28份扁穗牛鞭草分为两大类,同一地区的扁穗牛鞭草品种(系)基本聚在同一类,呈现出一定的地域性分布规律。     

女贞ISSR分子标记的引物筛选

利用60个ISSR引物，对来自不同地域的12份女贞种质材料进行PCR扩增，筛选出12个多态性丰富、条带清晰且重复性良好的、适合于所有女贞种质材料进行ISSR分析的有效引物。筛选出的12个有效引物对12份女贞种质材料进行ISSR—PCR扩增，均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱，共扩增出228条DNA谱带，其中210条为多态性带，占总扩增带数的92．1％，平均每个引物扩增出19条谱带。本试验筛选的12条引物可以有效地应用于女贞种质资源材料的ISSR分析。     

ISSR和SRAP标记技术在葫芦科植物种质资源研究中的应用

阐述了简单重复序列间扩增(ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术的基本原理和特点,综述与探讨了分子标记技术在葫芦科植物种质资源的亲缘关系鉴定与遗传多样性分析、分子遗传图谱的构建与目的性状基因的标记定位、基因库的构建和基因克隆、辅助育种选择及品种纯度鉴定等研究领域的广泛利用与推广,以期更合理高效地保护和利用葫芦科植物种质资源。     

43份黄秋葵种质的ISSR分析

对Owayadei(Abelmoschus esculentus L.)、Ladies fmger(Abelmoschus esculentus L.)、golder kost(Abelmoschus esculenats L.)、Esoyafido(Abelmoschus esculentus L.)等42个国内外黄秋葵栽培种和野生黄葵(Abelmoschus moschatus Medicus Malv.)进行ISSR分析.结果表明,选用22条引物扩增出306条DNA片段,平均每个引物可扩增出13.9条片段,其中多态性片段271条,占扩增总片段的88.6%.利用扩增结果进行遗传距离分析,构建分子树状图,可把42份黄秋葵栽培种质和野生黄葵分开,同时,可将42份黄秋葵栽培种质材料划分为2个类群.     

Phylogenetic study and molecular identification of 31 Dendrobium species using inter-simple sequence repeat (ISSR) markers

The genetic diversity of the genus Dendrobium is not well known and the phylogenetic relationship of Dendrobium species are mainly determined by studies of the comparative vegetative anatomy and plant systematics. In the present study, we used the technique of inter-simple sequence repeats (ISSRs) to evaluate genetic diversity and phylogenetic relationship among 31 Dendrobium species from Yunnan region of China. In total, 2368 bands were amplified by 17 ISSR primers, resulting from 278 ISSR loci with 100% polymorphism at genus level. Thirty-one species were unequivocally distinguished based on ISSR fingerprinting. Species-specific ISSR markers were identified in nine of 31 tested Dendrobium species. Unweighted pair-group mean analysis (UPGMA) showed that 31 Dendrobium species were grouped into six clusters, indicating the genus was polyphyletic with several well-supported lineages. The high polymorphism and reliable amplification across species demonstrated the utility of ISSR marker for species diagnosis and genetic diversity study of the genus Dendrobium.     

野扁桃ISSR-PCR反应体系的优化

以野扁桃为材料,对影响ISSR-PCR扩增结果的Mg2 、dNTPs、Taq酶、模板DNA、引物等因素进行筛选和优化,确立了适合野扁桃ISSR分析的最佳反应体系:25μL PCR反应体系中包含1×Buffer,2.0 mmol.L-1Mg2 ,160μmol.L-1dNTPs,模板DNA30 ng,Taq聚合酶1 U,引物15 pmol。     

蜂王产卵特性探讨

以西方蜜蜂(Apis mellifera Linnaeus)为实验材料,在2 h内观察蜂王标记产卵,20天后取样.运用ISSR(inter-simple sequence repeat)标记分子技术和NTSYS聚类软件分析各个卵之间的亲缘关系和亚家庭数组成.结果表明:蜂王在短时间内不会固定产某一个亚家庭卵.     

白木香基因组DNA提取与ISSR反应体系的优化

白木香为瑞香科沉香属植物,是中国特有的珍贵药用植物,也是国产沉香药材唯一资源植物,现已濒临灭绝,被载入<中国植物红皮书>采用改良CTAB法提取白木香DNA较传统方法简单高效.通过琼脂糖凝胶电泳和OD260/OD280比值测定,所得基因组DNA纯度高,可作为ISSR等以PCR为基础的DNA多态性标记.通过优化影响白木香ISSR-PCR的主要参数,确立了适用于白木香的ISSR反应体系和扩增条件.结果表明在20μl反应体中,模板DNA、引物、Mg2+、dNTP和Taq DNA聚合酶5种主要成分的最适浓度分别为25 ng、0.8 μmol/L、2.5 mm01/L、0.2 mmol/L、1.0 U,扩增出足量产物至少需要35个循环.     

香樟ISSR-PCR反应体系的正交优化

应用L9(34)正交表建立了适合于樟树ISSR-PCR的优化反应体系,即20μL ISSR反应体系中含有1×PCR buffer、dNTP0.25 mmol/L、引物0.3μmol/L、Mg2 2.0 mmol/L、Taq酶1 U和模板DNA50 ng.适宜的扩增条件为:94℃预变性4 min;94℃变性40 s,58℃退火1 min,72℃延伸2 min,42个循环;72℃延伸10 min;4℃保存.