奶牛干细胞多能性基因Nanog和Lin28克隆分析及其逆转录病毒表达载体的构建与包装

以50~60日龄的Holstein奶牛胎儿原始生殖嵴组织为材料,通过RT-PCR的方法克隆奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框(ORF)全序列。序列全长分别为903 bp和618 bp。所克隆的奶牛Nanog与Lin28基因序列与GenBank中已经发表的参考序列进行比对同源性均为100%。将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到反转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,应用lipofectamine2000介导转染PT67包装细胞,经过14 d G418连续抗性筛选,挑选抗性集落扩大培养。收集病毒上清经过RT-PCR与透射电镜检测,并用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果表明,病毒上清中含有逆转录病毒颗粒,Nanog与Lin28基因在筛选后的包装细胞PT67细胞中均有转录,病毒上清感染滴度值分别达到7.5×107cfu/mL和9.19×107cfu/mL。结果表明,本试验已经成功克隆出奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生包含有pMSCV-Nanog与pMSCV-Lin28质粒的感染性病毒颗粒的包装细胞株,为进一步产生奶牛诱导性多能干细胞(Induced pluripotentstem cells,iPSCs)奠定基础。     

妊娠中期猪羊水来源干细胞EGFP基因转化及体外分化

本研究旨在获得妊娠中期猪羊水来源千细胞,并通过用EGFP对干细胞进行标记,为以EGFP作为示踪标记对干细胞进行体内移植研究奠定基础.利用羊水来源干细胞培养技术体系,从胎龄60 d猪胎儿羊水中分离获得干细胞,通过脂质体介导转染将EGFP基因导入干细胞,诱导转基因干细胞向肌细胞和神经细胞分化,观察其分化特点.采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因.结果成功分离培养出妊娠中期猪羊水来源干细胞,并获得转EGFP基因干细胞.干细胞在表达EGFP的同时仍具有分化潜能.干细胞中Oct4、CD-90和Sox2表达阳性;体外诱导的干细胞能分化为肌细胞(表达myf-6和myoD)、星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2).研究表明,从妊娠中期猪胎儿羊水中分离干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能,可以用EGFP对羊水来源干细胞进行标记、追踪,为EGFP作为示踪标记对干细胞用于体内移植研究奠定了基础.     

经济林木在山东新农村人居环境绿化中的应用

通过对山东农村绿化现状的调查和分析,归纳总结出了经济林木用于人居环境绿化的诸多优势,其花果叶兼美的特性比其他绿化树种更能体现地方特色和景观多样性,是新农村人居环境绿化的理想树种。探讨了农村绿化中经济林木树种选择方法和配置方式,建议在具体应用时应统一规划、适地适树、加强养护。     

图书馆岗位设置研究综述

从文献数量统计、研究内容这两方面对国内外图书馆在岗位设置方面的研究文献进行统计分析,对相关研究进行梳理。在此基础上,总结了图书馆岗位设置研究的三个方面的内容,即岗位职责和使命、信息环境对图书馆岗位设置的影响、图书馆人力资源管理。最后,还指出了目前图书馆岗位设置研究的不足,同时提出今后研究的建议,以期对今后的研究提供参考。     

秦公散对LPS活化的内皮细胞表达黏附分子和分泌一氧化氮的影响

为阐明秦公散的抗炎作用机制,本试验采用流式细胞术检测了LPS刺激的内皮细胞黏附分子E-选择素和ICAM-1的表达,用一氧化氮(NO)测定试剂盒检测LPS刺激的内皮细胞培养上清液中NO的含量。结果表明,LPS刺激的内皮细胞可显著提高E-选择素和ICAM-1的表达(P0.01),显著提高培养上清液中NO的含量(P0.05);用秦公散及其含药血清处理后则明显抑制LPS诱导的E-选择素、ICAM-1的表达和NO分泌(P0.05)。表明秦公散可通过抑制黏附分子的表达及NO分泌量发挥抗炎作用。     

羊驼视网膜组织学结构

用光镜观察了羊驼视网膜的组织学结构,以及3级神经元的细胞胞核层数及胞核特点。结果表明:羊驼视网膜结构与昼行性的哺乳动物的视网膜结构相似,但米勒细胞较明显、水平细胞为一层、内网层细胞很厚等形成了羊驼视网膜结构的特性,显示了羊驼视网膜结构和机能与其行为学特性的一致性。     

骨髓间充质干细胞对肿瘤细胞的生物学行为的影响

骨髓来源的间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,MSCs)具有良好的向损伤部位归巢的能力,有利于组织修复和再生。肿瘤被认为是一种特殊的不愈合创伤,MSCs通过向肿瘤组织的归巢和向间质成分分化,改变肿瘤微环境,并影响肿瘤的生长和转移。研究发现MSCs对肿瘤细胞的影响并不统一,存在双向性。目前,MSCs与肿瘤细胞之间关系的研究越来越受到学者的关注。MSCs作为一种肿瘤治疗的靶向新型载体,在临床上具有广阔的应用前景,但MSCs在临床应用中也存在潜在的恶性转化风险,特别是致癌机制。文章主要介绍MSCs对肿瘤细胞相关生物学行为的影响以及在癌症治疗方面的应用。     

Ca~(2+)信号介导川芎嗪诱导小鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的定向分化

用含2.4 mg.mL-1川芎嗪提取液对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行诱导,探讨川芎嗪体外诱导BMSCs分化为神经元样细胞的作用.应用EGTA(细胞外Ca2+螯合剂)、Nifedipine(L-型Ca2+通道阻断剂)和LY294002(PI3K阻断剂)等Ca2+阻断剂分别作用细胞,RT-PCR和Western blot技术研究Ca2+信号在川芎嗪诱导BMSCs分化为神经细胞过程中的作用.结果表明:川芎嗪作用不同时间的BMSCs均可见Nestin、β-Tubulin Ⅲ、NSE和Nurrl的表达;川芎嗪诱导后的细胞浆内Nestin和NSE蛋白表达呈阳性.EGTA、Nifedipine及LY294002分别阻断细胞外Ca2+、L-型Ca2+通道及PI3K后,NSE和Nurr1基因及NSE蛋白表达较川芎嗪诱导组显著上调.以上结果说明川芎嗪能使BMSCs定向分化为神经元样细胞,细胞内、外Ca2+的减少可促进川芎嗪诱导BMSCs向神经细胞的分化,Ca2+信号在川芎嗪诱导BMSCs向神经细胞定向分化过程中起负调控作用.     

IMAGING DIAGNOSIS—LEFT RETROCAVAL URETER AND TRANSPOSITION OF THE CAUDAL VENA CAVA IN A DOG

Retrocaval ureter and transposition of the caudal vena cava are each, rare developmental anomalies. We describe the usefulness of static fluid magnetic resonance urography and dynamic contrast-enhanced magnetic resonance urography in the diagnosis of these anomalies. Basic techniques, benefits, and drawbacks of magnetic resonance urography are presented.     

Purulent Necrotic Dislocation of the Hip Joint Associated with Umbilical Infection in a Foal

A 42-day-old heavy draft horse fell into sudden astasia. Significant swelling and heat sensation of the left femoral region were observed. Because of a friction sound in the left hip, we supposed that the hip joint was dislocated or the hip bone was fractured. Computed Tomography (CT) examination showed that the left hip joint was dislocated and the left femoral head was disjunct. We carried out a pathological autopsy, and made a diagnosis of the foal as fracture of the hip bone and femoral head with suppurative umbilical arteritis. Pathologic changes in the umbilical artery and hind leg were completely unilateral, suggesting that left umbilical arteritis spread to the blood circulation, causing arthritis and dislocation of the hip bone.