萱草种质资源扩增片段长度多态性鉴别与分类的研究Ⅰ.萱草DNA模板的制备

为了获得萱草清晰的AFLP指纺图谱并进一步进行萱草种质资源的鉴别与分类研究，以大花萱草为试材，用改进后的SDS法和CTAB法，从萱草的幼叶、成熟叶、新根等部位提取DNA。结果表明，用这两种方法均可从萱草的幼叶、成熟叶、新根中获得高分子量基因组DNA和AFLP指纹图谱，其中以幼叶的DNA产量和品质最好，CTAB法提取的DNA纯度较高且程序简单。     

含镁复合肥对黄花菜生长及土壤养分含量的影响

 【目的】探讨红壤旱地、特别是低肥力红壤旱地中镁对作物生长及产量的影响，为镁肥的合理施用和含镁复合肥的研制奠定进一步的基础。【方法】利用田间试验方法，研究了两种不同镁含量的复合肥对黄花菜生长、产量及红壤旱地养分含量的影响，并对其生长过程中土壤养分、作物生长等的变化进行了系统观测。【结果】两种含镁复合肥对促进黄花菜生长发育、提高黄花菜产量和抗病能力均具有良好效果，其中含镁量较高的镁肥II增产效果更优，比不施肥处理增产57.4%，比施氮磷钾处理增产32.8%，比含镁较低的镁肥I增产14.5%。两种含镁复合肥对土壤交换性镁和氮磷钾含量亦具有一定影响。其中施用镁肥II处理土壤碱解氮、速效磷、交换性钾及交换性镁含量分别比对照提高94.9%、46.5%、31.1%和35.3%。施用含镁复合肥可以明显提高黄花菜的产量、改善土壤养分状况。【结论】在红壤旱地土壤、气候和生产力水平等条件下，为保证作物优质、高产，在现有施肥结构的基础上，应考虑施用镁肥。     

萱草ISSR-PCR最佳反应体系的建立

[目的]为利用ISSR标记研究萱草的遗传多样性和和辅助育种奠定基础。[方法]从萱草中提取基因组DNA,建立萱草的ISSR-PCR反应体系,并通过正交试验对其进行优化。[结果]萱草的最佳ISSR-PCR反应体系为:ddH2O16.8μl、2.5 mmol/LdNTP2.0μl、10×buffer 2.5μl、10μmol/LPrimer0.3μl、50 ng/LDNA3μl、Taq酶1 U,总体积25μl。萱草的最佳ISSR扩增反应程序为:94℃变性5 min,94℃变性45 s、48.3℃退火1 min、72℃延伸2 min,共38个循环,最后72℃延伸7 min。该反应程序下进行的ISSR扩增,扩增产物最多,银染的效果最好。[结论]该研究建立了萱草ISSR-PCR的最佳反应体系和反应程序,通过ISSR扩增可获得清晰、稳定的条带。     

黄花菜多酚提取工艺及抗氧化作用的研究

探讨黄花菜多酚最佳提取工艺及抗氧化作用。结果表明,黄花菜多酚最佳提取工艺为:提取时间60min、乙醇浓度55%、料液比1∶15、提取温度35℃;在此条件下,多酚得率为28.89%。抗氧化试验表明黄花菜多酚对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基均具有一定的清除作用,其半抑制率(IC50)分别为0.1176mg/mL、0.1638mg/mL和0.1593mg/mL,且清除率与黄花菜多酚浓度成量效关系。     

以子房为外植体的‘金娃娃’萱草组织培养技术的研究

为提高萱草的繁殖效率,以‘金娃娃’萱草花蕾为试验材料,采用以子房为外植体的初代培养方法,对其组织培养技术体系进行了研究。结果表明：采用高强度灭菌花蕾,无菌剥离子房的技术方法,初代培养实现了零污染、零死亡;以子房为外植体的愈伤组织诱导分化以6-BA 2 mg/L+2,4-D 1 mg/L+NAA 0.4 mg/L效果最佳。通过对芽增殖培养基中基本培养基、激素配比和高有机物的研究发现,基本培养基B5好于MS,激素以6-BA 2 mg/L+NAA 0.3 mg/L效果最好,繁殖系数达到7.2;添加L-脯氨酸和水解络蛋白对繁殖系数影响不大,但是,可以有效改善试管苗的生长状态;试管苗的生根以1/2 MS+0.4 mg/L NAA+20 g/L蔗糖效果最好;试管苗在粗河沙、蛭石＋泥炭土(3︰1)和泥炭土3种介质中的成活率均可达到90%。     

萱草3种蔗糖转化酶基因的分离及对低温和渗透胁迫响应的分析

从‘Athlone’萱草(Hemerocallis fulva)中克隆了细胞质、细胞壁和液泡蔗糖转化酶基因各1个,命名为HfCIN3、HfCWIN1和HfVIN1,其ORF分别为1941、1701、1920bp,编码646、566和639个氨基酸,氨基酸序列相似性为18.81%～41.86%。HfCIN3与石斛、野香蕉等的氨基酸序列相似性为75.16%～82.79%,Hf CWIN1与芦笋、油棕榈等的相似性为58.95%～68.88%,HfVIN1与龙舌兰相似性为73.4%。HfCIN3具有信号肽和典型的β-fructofuranosidase domain、glycoside hydrolase family 100结构域,而HfCWIN1和HfVIN1有glycosyl hydrolases family 32特征结构域,Hf CWIN1还含有72个氨基酸与细胞壁糖分子识别有关的Malectindomain,HfVIN1含有可能的液泡识别motif"ILPD",并在N端有典型跨膜结构。HfCWIN1和HfVIN1同时存在N–糖基化位点和O-β-GlcNAc糖基化位点,HfCIN3仅...     

萱草叶斑病的病原鉴定及其生物学特性

为明确在贵州发现的萱草（Hemerocallis fulva）叶斑病病原菌及其生物学特性，采用组织分离法和离体接种法分别对其病原菌进行分离和致病性测定，利用形态学及ITS基因序列分析对病原菌进行鉴定并对其生物学特性进行研究。鉴定结果表明：分离得到的萱草叶斑病病原菌菌株（编号为XCS369）的菌丝为灰白色、绒毛状，菌落中心隆起呈灰褐色，背面橄榄绿色，培养15 d表面可产生白色孢子粉；分生孢子光滑，无色，椭圆至长椭圆形。在以ITS基因序列构建的系统发育树中，XCS369与古巴炭角菌（Xylaria cubensis）聚于一支，且支持率达99%，结合形态特征与系统发育分析将其鉴定为古巴炭角菌。该菌菌丝最适生长温度为25 ~ 28 ℃，最适pH 7，在马铃薯葡萄糖培养基上生长最快，对碳源麦芽糖、氮源酵母浸粉的利用最高，菌丝生长对光照不敏感。     

盐胁迫对萱草生长及其相关生理特性的影响

为了探明盐胁迫对萱草生长及其相关生理特性的影响,采用水培试验,对重瓣大花萱草(Hemerocallis fulva var.florepleno)、玫瑰红萱草(Hemerocallis.fulva var.rosea)、黄花菜(Hemerocallis citrina)和大花萱草(Hemerocallishybriaa)在NaCl质量分数分别为0.0%,0.2%,0.4%,0.6%,0.8%,1.0%的水溶液下的生长及相关生理变化进行了研究.结果表明:1)4个萱草材料在0.2%～0.6%的NaCl胁迫下,叶片伤害指数较小,根的生长只受到了轻微的抑制,胁迫后第20天,平均新根数≥3.67条;在0.8%～1.0%NaCl的胁迫下,叶片伤害指数较大,根系生长受到严重的抑制,并且还表现出了一定的基因型差异.以伤害指数和新根数量衡量萱草的耐受能力从大到小依次为重瓣大花萱草、大花萱草、黄花菜、玫瑰红萱草.2)在1.0%的盐(NaCl)胁迫下,随着胁迫时间的延长,萱草叶片中丙二醛(MDA)含量和质膜外渗率基本呈逐渐增加的趋势,这与形态观察指标测定的伤害程度相吻合,即盐胁迫下的MDA含量、质膜外渗率的变化可作为萱草耐盐性的鉴定指标.     

不同黄花菜品种同工酶分析

采用聚胺凝胶垂直平板电泳技术，对湖南邵东8个黄花菜品种的过氧化物同工酶、酯酶同工酶和淀粉同工酶进行了酶谱测定，并对其同工酶谱带进行分析和比较。结果表明：供试8个品种均有一条共同持征谱带，同时又蕴含着丰富多态性，因而根据谱带表型可以有效地鉴定黄花菜品种。     

黄花菜根水浸提液对小白菜和大白菜的化感作用

以小白菜和大白菜为试验材料,通过测定黄花菜根水浸提液对两种作物种子萌发和幼苗生长的影响,对黄花菜化感作用进行了研究。结果表明:低浓度(0.010 g/m L)的黄花菜根浸提液对小白菜种子的苗重、苗长和发芽指数表现为促进作用,对大白菜的发芽率和发芽指数表现为促进作用;高浓度(0.020、0.025 g/m L)的黄花菜根浸提液对小白菜种子的发芽势、发芽指数、根长、苗重以及苗长表现为抑制作用,对大白菜的发芽率、发芽势、发芽指数以及根重表现为抑制作用;浓度为0.015 g/m L的黄花菜根浸提液对小白菜的发芽指数和苗重表现为促进作用,对大白菜的苗长和苗重表现为促进作用。