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[目的]构建大麦黄矮病毒运动蛋白(BYDV-MP)基因的原核表达载体,并在E.coli-BL21中进行高效表达。[方法]根据GenBank中收录的大麦黄矮病毒PAV6株系的基因序列设计合成1对引物,应用RT-PCR技术从感染大麦黄矮病毒的叶片中扩增得到大麦黄矮病毒(BYDV)的运动蛋白(MP)基因,利用基因重组技术构建pGEX-4T-1-MP,将其转化至大肠杆菌表达菌株E.coli-BL21(DE3)中,用IPTG诱导重组质粒pGEX-4T-1-MP在E.coli-BL21中进行表达。[结果]对重组质粒进行酶切分析及序列测定,鉴定正确后,与GeneBank中收录的大麦黄矮病毒PAV6株系的MP基因序列比对分析,同源性达100%。在IPTG诱导下,高效表达出相对分子质量约43 kD的蛋白,蛋白质电泳(SDS-PAGE)结果表明,表达的蛋白条带与预期的GST-MP融合蛋白相符。[结论]成功构建了pGEX-4T-1-MP的原核表达载体,在E.coli-BL21中高效表达了MP,为进一步研究该蛋白的结构和功能奠定基础。 相似文献
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西北地区新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析 总被引:5,自引:0,他引:5
从西北地区(陕西、甘肃、青海和新疆)1979~1999年发生新城疫鸡群中共分离和收集了15个毒株,经蚀斑纯化、SPF鸡胚增殖得到9株NDV分离株。致病力测定结果表明,除2株为中强毒外,其余均为强毒株。以异硫氰酸胍法提取病毒基因组RNA,RT-PCR扩增基融合蛋白(F)基因N端908bp的片段,经回收、鉴定后,克隆到pGEM-T载体上进行核苷酸序列测定。对各毒株核苷酸及推导的氨基酸进行序列和同源性的比较,结果表明所有毒株在该区段没有缺失和插入,但有多处碱基置换。各分离毒株之间同源性很高(平均96.8%),与疫苗毒株同源性较低(82.5~85.8%),而分离自青海省的3个毒株与其他毒株的同源性均较低(平均88.0%)。以389bp核苷酸绘制系统发育树,证实西北地区的新城疫是由基因型Ⅶc和一个新发现的基因型Ⅸ引起的。 相似文献
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A 17-year-old mixed breed pony was presented with intermittent neck stiffness during regular training rides in the six months preceding its admission. All parameters were within the normal range, except for an increase in heart rate (48 bpm) during the examination. Concave areas were observed at the level between the atlas and axis vertebrae (C1-C2) on both the left and right sides of the neck. Radiographs were taken of the laterolateral, left ventrodorsal oblique, and right ventrodorsal oblique projections in the cranial cervical region. The images revealed severe structural disorders, including trauma with luxation of the atlantoaxial joint, a fusion of the atlas and axis vertebrae, and evidence of a false joint in the axis bone. Subsequent ultrasonography showed hyperechoic areas in the rectus capitis caudalis and obliquus capitis caudalis muscles. Neck mobility was improved after two weeks of stall rest, administration of oral phenylbutazone (4.4 mg/kg), and topical cold gel treatment. The overstretching of surrounding soft tissues accompanying chronic injury of cranial cervical area may result in neck stiffness in the aging pony. Radiographic and ultrasonographic findings were consistent with the presence of cranial cervical trauma leading to neck stiffness. These findings emphasized the essential role of imaging diagnostics in treating a pony with intermittent neck stiffness. 相似文献
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应用融合变换对四川西昌地区紫茎泽兰遥感图像ASTER数据进行处理,结果表明:对ASTER三种传感器生成的三种分辨率的影像数据进行Gram-Schmidt融合处理,可以将具有较高光谱分辨率的多光谱遥感波段的空间分辨率从30m×30m提高到15m×15m,增加更多的地表地物组分信息,有助于识别各种不同地物类型,同时使同一地物的光谱信息变换前后保持不变,确保了后续图像分类的可靠性。应用ENVI中对融合后的图像进行马氏距离分类,分类结果总体精度为73.6983%,Kappa系数等于0.6936。 相似文献
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根据猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)和纤维蛋白原结合蛋白(FBPS)的基因序列,选取可能含有抗原决定簇的两片段,各设计合成一对引物,使之含有共同的酶切位点。通过T4DNA连接酶串联两片段,构建原核表达载体pET32a-mrp-fbps,重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3),经不同时间、不同温度,不同浓度IPTG诱导表达,经SDS-PAGE电泳,表达约为80kD的融合蛋白。Westernblot结果表明重组蛋白可被SS2阳性血清所识别。证实串联表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,是重要的保护性抗原,本试验为进一步研究猪链球菌亚单位疫苗奠定了基础。 相似文献
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