不同融合液对延边黄牛体细胞核移植效率的影响

[目的]探寻适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液。[方法]用延边黄牛颗粒细胞为供体细胞。试验1,比较3种浓度(0.25、0.280、.30 mol/L)3种融合液(蔗糖、D-山梨醇、甘露醇)对核移植胚胎融合率及重组胚体外发育的影响。试验2,比较3种0.28 mol/L融合液对核移植效率的影响。[结果]3种浓度的蔗糖、D-山梨醇、甘露醇融合液的融合率和卵裂率差异均不显著,但0.28 mol/L融合液处理的重组胚后期发育相对较好。3组融合液融合率(88.44%、86.83%、86.85%)差异不显著,蔗糖、甘露醇融合液卵裂率(87.98%、86.06%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(78.64%);蔗糖、甘露醇融合液囊胚发育率(22.16%、19.91%)差异不显著,在0.05水平上显著高于D-山梨醇融合液(10.14%)。[结论]适宜延边黄牛体细胞核移植的最佳融合液为0.28 mol/L蔗糖融合液。     

犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展

犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守。融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用。因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义。本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述。     

用原生质体融合进行冬菇育种的研究

用灭活的〔Flammulinasubnudus (Pr .)Sing〕双核菌株原生质体与〔Flammulinavelutipes (Fr.)Sing〕双核菌株原生质体融合 ,在 2 2℃的条件下筛选得融合子。融合频率为 0× 10 -5～ 4 1× 10 -5。融合子与双亲有明显的拮抗性。融合子的菌丝体形态 ,氨基酸含量 ,子实体的形态 ,以及酸性磷酸酶的测定都与双亲不同。     

应用逆转录套式PCR检测新城疫病毒核酸

选择DNV融合蛋白保守的编码区域,设计并合成了一对外引物和一对内引物,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCRI地,通过检测NDV感染的实验客观存在病料和临床病料,结果表明,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约0.3pg的NDV RNA,攻毒后第8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出DNV,第8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为5/10,第8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为6/10,对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第5天。逆转录套式PCRY应运地临床样品中DNV的最大检出率为6/7,经核酸杂交验证,该法具有很高的特异性和敏感性,也比较简便快速,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。     

表达新城疫病毒融合蛋白基因禽痘病毒重组体的构建

通过RT-PCR扩增新城疫病毒F基因,利用禽痘病毒复合启动子、SV40 PolyA终止信号序列构建F基因表达盒。将F基因表达盒与loxp-GFP-loxP序列串联插入禽痘病毒重组臂,构建了禽痘病毒转移质粒载体。在脂质体介导下转染CEF,获得了带有绿色荧光信号的重组病毒rFPVFGFP。通过二次转染,利用Cre-loxP位点特异性重组将重组病毒基因组的GFP自动去除,结果获得了只含新城疫病毒F基因表达盒的重组禽痘病毒rFPVF。试验结果表明,rFPVF复制稳定,表达的F蛋白具有免疫原性,能够刺激鸡只产生抗新城疫病毒的中和抗体。     

重组MBP-GnRH6融合蛋白的表达与鉴定

将人工合成促性腺激素释放激素(GnRH)六聚体基因片段连接至pMAL-c4x载体,获得的pMAL-c4x-GnRH6重组质粒转化到大肠杆菌TB1中进行表达.采用SDS-PAGE,Western blot进行鉴定,并通过动物实验对表达产物的免疫原性进行检测.获得了分子量大小约为50 kD的麦芽糖结合蛋白-GnRH六聚体(MBP-GnRH6),且融合蛋白与GnRH抗体的反应性较好,并能使睾丸萎缩、变性.表明重组MBP-GnRH6融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性,可用于小鼠的免疫去势.     

苹果原生质体研究进展——文献综述

综述了近二十年来苹果原生质体研究进展。概述了苹果原生质体分离培养技术及影响分离培养的条件。通过对有关文献的分析，提出了在选用不同的原生质体起始分离材料时应重点解决的问题及今后苹果原生质体研究的方向     

荧光标记紫孢侧耳和糙皮侧耳原生质体融合研究

异硫氰酸荧光素(FITC)标记的紫孢侧耳单核原生质体与未标记的糙皮侧耳单核原生质体经PEG融合后,在倒置显微镜下,用显微操纵仪直接吸取一方带有荧光另一方不带荧光的原生质体对,经培养后,根据“锁状联合”这一形态特征挑选出融合子,融合率为5.2×10~(-3).进一步鉴定结果表明,融合菌株的酯酶同工酶谱发生了明显的变化,其生物量和生长速度有不同程度的提高,子实体形态也与双亲有所不同.     

1株抗肿瘤新城疫病毒的毒力分析

[目的]分析1株抗肿瘤新城疫病毒(NDV)的毒力。[方法]通过传统毒力的测定方法,测定此株NDV的最小致死量的平均死亡时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)及静脉致病指数(IVPI)。通过RT-PCR扩增此株病毒基因组的多个片段,相邻扩增片段之间有部分核酸序列重叠且覆盖完整的融合蛋白(F)基因和血凝素神经氨酸酶(HN)基因的区域,并进行测序。[结果]此株NDV的MDT为105.6h,ICPI约为0.26,IVPI为0。测序结果表明,此株病毒是1株新的NDV,其F蛋白剪切位点为112RRQRRF117。[结论]此株NDV为弱毒株,其F蛋白剪切位点与强毒株一致。除F蛋白剪切位点外,NDV的毒力必然与其他因素相关。     

家蚕抗菌肽moricin在大肠杆菌中的融合表达及抗菌活性测定

Moricin是家蚕中发现的一种抗菌肽,对革兰氏阴性和阳性菌都有较强的抗菌活性,具有良好的开发应用前景。为了建立一种大量表达和快速分离moricin的方法,采用PCR拼接法获得moricin基因后重组到表达载体pET-32M上,并在大肠杆菌(E.coli)中融合表达。表达产物存在于上清中为可溶状态,经Ni-NTA柱纯化获得融合蛋白,再经凝血酶(thrombin)酶切后过2次Ni-NTA柱获得纯度为90%以上的moricin,液相测定法表明纯化获得的moricin对大肠杆菌具有抗菌活性。