Isolation of Pathogenicity Mutants of Fusarium oxysporum f. sp. melonis by Insertional Mutagenesis

Restriction enzyme-mediated integration (REMI) mutagenesis was used to isolate mutants of Fusarium oxysporum f. sp. melonis impaired in pathogenicity. The race 2 strain Mel02010 was transformed with linearized pSH75, conferring resistance to hygromycin B, with or without the enzyme used to linearize the plasmid. Addition of restriction enzymes did not affect the transformation frequency. A total of 2929 REMI transformants were tested for pathogenicity to three melon cultivars, Amus, Ogon 9 and Ohi. The race 2 strains are pathogenic to Amus and Ogon 9, but not to Ohi. Of 43 transformants with reduced pathogenicity on susceptible melon cultivars, 12 mutants were examined in detail for pathogenicity, vegetative growth and integrative mode of pSH75. The levels of pathogenicity varied among these mutants. Two mutants (B48 and B137) almost completely lost pathogenicity to both susceptible cultivars, and the others had reduced pathogenicity. Mutants B48, B241, B886 and X36 were also impaired in vegetative growth. Mutant B809 was a biotin auxotroph. By DNA gel blot analysis, nine mutants were found to contain a single copy of the transformation vector. These mutants may thus be useful in isolating genes involved in pathogenicity. Received 22 December 2000/ Accepted in revised form 16 April 2001     

禾谷镰刀菌和稻瘟病菌基因组中的微卫星序列比较

利用禾谷镰刀菌Fusarium graminearum和稻瘟病菌Magnaporthe grisea基因组测序结果,对这两种植物病原真菌基因组中的微卫星(SSR)序列进行了系统地分析和比较.结果表明,在禾谷镰刀菌基因组中,共发现4679个SSR序列,总长度为96.2kb,占基因组全长的0.27%.平均7.7kb碱基中有一个大于15 bp的SSR序列.在稻瘟病菌基因组中共发现16398个SSR系列,其总长度达到330kb,约占整个基因全长的0.85%,平均2.36kb碱基中就分布有1个SSR序列.在禾谷镰刀菌基因组中,数量最多的是五碱基重复序列,其次是六碱基重复序列;稻瘟病菌基因组中数量最多的是单碱基重复序列,其次为三碱基重复序列和五碱基重复序列.两基因组中数量最少的都是二碱基重复序列.尽管这两种植物病原真菌都属子囊菌,基因组大小也十分接近,但无论是在SSR的总体数量上,还是在各类SSR的分布上,两种植物病原真菌都存在十分显著的差别.     

合欢枯萎病菌的生物学特性研究

通过组织分离法获得合欢枯萎病纯茵种，并以常规方法对合欢枯萎病病茵的生物学特性进行了研究，其结果表明，该茵可在PDA、PSA以及合欢的根、茎、叶培养基上生长，在PDA及PSA上的生长情况基本一致，且茵丝旺盛，而在合欢根、茎、叶培养基中的生长情况稍差；该茵的生长温度为5～32℃，最适生长温度为23—29℃；孢子在葡萄糖培养...     

从土壤中分离棉枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfetum (Atk) Synder & Hansen)选择性培养基研究

本文介绍一种用于分离检测土壤中棉枯萎病菌的选择性培养基—植选2号。其成分为:KH_2PO_41g,MgSO_4·7H_2O 0.5g,K_2S_2O_50.2g,KCl0.6g,NH_4NO_3 0.5g,蛋白胨5g,山梨糖10g,蔗糖5g,琼脂20g,蒸馏水1000ml,PCNB 620mg,Oxgall1g,硫酸链霉素300mg,盐酸金霉素75mg。根据棉枯萎病在此培养基上的形态特征,能较容易地识别和检测该病菌。     

棉枯萎菌血清学检测技术初步研究

以棉枯萎镰刀菌菌丝中孢子提取的蛋白质为抗原免疫家兔制备的２种抗血清Ａｓ２、Ａｓ１０中成分复杂，用琼脂双扩散法和比较对流免疫电泳法测定特异性，交叉反应明显。Ａｓ２用木贼镰刀菌的异原、Ａｓ１０用禾谷镰刀菌的异种抗原吸收排除非特异性成分后，抗血清的专化性提高，消除了交叉反应。特异性测定结果表明；利用此种经吸收后的抗血清检测棉枯萎镰刀菌可以准确地鉴定到尖孢镰刀菌种的水平，但不能区分专化型。     

Argonaute1敲除前后尖孢镰刀菌转录组分析比较

 Argonaute蛋白(AGO)介导的沉默复合体在RNA干扰(RNAi)中起着至关重要的作用。为了探究AGO1在尖孢镰刀菌RNAi中的作用机制,本文以粘团专化型尖孢镰刀菌生理1号小种FOX-A8野生型和其AGO1缺失突变体(FOX-A8-△Ago1)的菌丝和孢子为材料,分别进行了RNA提取、Illumina HiSeq 2000高通量转录组测序、差异表达基因(DEGs)的显著富集分析;选择菌丝和孢子中的DEGs 进行实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR, qRT-PCR)验证。GO通路注释结果显示,相对于野生型菌株,AGO1缺失突变体菌丝中的醇脱氢酶(NADP⁺)、孢子中的CAMK / CAMKL / CHK 1蛋白激酶均显著上调;KEGG通路注释结果显示,相对于野生型菌株,AGO1缺失突变体菌丝中与 MAPK信号通路相关的基因、孢子中与PLD信号通路相关的基因均显著下调;另外,相对于野生型菌株,编码AGO2的基因下调,但是下调不显著。qRT-PCR检测DEGs的表达模式与RNA-Seq分析结果一致,证实了RNA-Seq结果的可靠性。     

尖孢镰孢菌室内生物药剂筛选

在室内选用了6种生物药剂对尖孢镰孢菌进行了毒力测定。结果表明:在供试的药剂中,抑菌效果较好的药剂有低聚糖素、春雷霉素、克菌康,其中低聚糖素对尖孢镰孢菌的抑菌效果最好,EC50为18.20mg·L-1,春雷霉素次之,EC50为20.49mg·L-1。     

党参根腐病病原菌鉴定及其室内毒力测定

为明确引起甘肃省渭源县党参根腐病的病原菌,并筛选防治该病害的最佳杀菌剂,试验采用组织分离法和单孢分离法对引起党参根腐病的病原菌进行了分离纯化,通过致病性测定、形态学特征、编码转录延伸因子区序列(TEF-1α)聚类分析对病原菌进行了鉴定,并采用生长速率法进行药剂毒力测定.病原鉴定结果表明,引起甘肃省渭源县党参根腐病的病原...     

三江平原主栽大豆品种对大豆根腐病尖孢镰孢菌的抗性分析

明确三江平原地区主栽大豆品种对主要大豆根腐病致病菌尖孢镰孢菌的抗性。收集了该地区主栽大豆品种13 个,对其同时进行盆栽接种和大田接种尖孢镰孢菌的抗性分析试验,大田接种试验设不接种对照。‘垦丰16’和‘合丰55’的抗性最好,盆栽试验中均表现为抗病,平均病情指数分别为15.33%和20.67%,大田接种试验中表现为抗病,病情指数分别为25.55%和22.89%,与未接种对照相比,减产率最低,分别为3.55%和3.77%,差异达到显著水平。‘垦丰16’和‘合丰55’是适宜三江平原地区种植的抗尖孢镰孢菌根腐病的抗病品种。