棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制及其防病促生作用研究

探究棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制、盆栽防治效果及其促生作用,为筛选用于草莓炭疽病绿色防控的高效生防菌提供资源及应用技术。采用平皿培养法、显微镜观察法和盆栽灌根法测定了棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽病的生防机制、盆栽防效及其对草莓幼苗的促生效果。结果显示,棘孢木霉GYSW-6m1对草莓炭疽菌LC0220具有较强的竞争、抗生和重寄生作用,菌株GYSW-6m1能迅速占领营养空间,对峙培养3、5和7 d对病菌LC0220抑制率分别为68.06%、71.03%和79.03%,病菌LC0220在含有菌株GYSW-6m1发酵代谢产物平板上培养3、5和7 d抑菌率分别为79.18%、75.81%和76.13%,菌株GYSW-6m1挥发代谢物对病菌LC0220菌丝生长几乎没有抑制作用,菌株GYSW-6m1菌丝可通过接触、缠绕和穿透病菌LC0220的菌丝并引起菌丝消解断裂。菌株GYSW-6m1对草莓炭疽病具有较好的盆栽防治效果,处理LC0220+GYSW-6m1防效最显著,防效高达87.23%,处理GYSW-6m1（3 d）+LC0220和LC0220（3 d）+GYSW-6m1防效分别为52.72%和44.76%。棘孢木霉GYSW-6m1对草莓幼苗具有明显的促生效果,株高、根长、植株总鲜重和植株总干重均显著增加,促生率分别为7.96%、10.42%、22.54%和34.21%。棘孢木霉GYSW-6m1可以作为一种重要的生防资源用于草莓炭疽病的防治,具有一定的实用开发潜力。     

‘芽黄’红瑞木炭疽病病原菌的分子鉴定

‘芽黄’红瑞木炭疽病在上海普遍发生。本研究从上海迪士尼园区采集疑似炭疽病的红瑞木病叶,进行了分离培养,获得2种培养形态的炭疽菌,致病性测定证明其为致病菌。联合核糖体转录间隔区、3-磷酸甘油醛脱氢酶、钙调蛋白和β-微管蛋白2多基因序列,使用最大似然法和贝叶斯分析法分别构建了多基因系统进化树。结果显示,分离获得的2株炭疽菌菌株分别与暹罗炭疽菌Colletotrichum siamense和胶孢炭疽菌C.gloeosporioides聚集在一个分支,辅以形态学特征,鉴定引起‘芽黄’红瑞木炭疽病的病原菌为暹罗炭疽菌和胶孢炭疽菌,这是国内关于红瑞木炭疽病的首次报道。     

根癌农杆菌介导柱花草炭疽菌遗传转化体系的优化

选取含有氯嘧磺隆抗性标记的ILV1基因和报告基因GFP二元载体的农杆菌AGL-1,采用单因子和双因子方法研究根癌农杆菌AGL-1介导柱花草炭疽菌CH008转化过程中各主要因素对转化率的影响,优化构建ATMT转化柱花草胶孢炭疽菌体系条件,使转化效率达到300 ～400个转化子/106个炭疽孢子,即根癌农杆菌AGL-1浓度OD600=0.8,炭疽菌分生孢子浓度为1x106个/mL,AS浓度为100 μmol/L,诱导时间为6h,共培养温度和时间分别为25 ℃和4d.经PCR检测都有GFP片段,并能够表达绿色荧光蛋白.这为进一步开展炭疽菌对柱花草的致病机理研究提供了依据,优化转化体系有利于后续突变体库的扩大、筛选突变体和致病功能基因的研究.     

不同地区潜伏侵染香蕉果实的炭疽菌生物学特性研究

不同保湿时间、孢子浓度、营养和光照等条件，对潜伏侵染在香蕉果实中的芭蕉炭疽菌的分生孢子萌发、菌丝体生长和产孢影响试验结果表明，来自广东茂名、化州、台山和海南琼山的芭蕉炭疽菌分离系Ｉ－ＩＶ号，均表现出在１００％ＲＨ下，３ｈ后分生孢子开始萌发，９ｈ后达最高；ＲＨ〈９０％时，萌发率急剧下降；孢子浓度超过１×１０＾６个／ｍｌ时，不利孢子萌发；增加营养可提高孢子萌发率；黑暗较光照条件下更有利于孢子萌发和菌丝     

四川辣椒炭疽病菌鉴定及育种材料抗性筛选

四川省西充县发现1种严重危害辣椒果实的辣椒炭疽病,造成部分田块绝收.田间调查发现,此病菌既能危害未熟果也能危害红熟果,但未危害叶片或茎干.在果实上病斑圆形,长椭圆形或不规则.在实验室PSA培养基上菌落圆形,边缘整齐,粉红色或橙色,无孢子堆,无菌核,分生孢子盘无刚毛.分生孢子单生,梭形,大小11.703 ～13.657 μm×3.074～4.773μm,附着胞圆形或长椭圆形,褐色,大小为3.985 ～6.633 μm×3.954 ～6.170μm.菌株rDNA ITS的PCR产物经测序后进行BLAST比对分析,结果显示,此菌株的ITS序列与尖孢刺盘孢Colletotrichum acutatum(有性阶段为尖孢小丛壳Glomerella acutata)的相似性达99％,结合培养性状的观察及rDNA ITS序列分析,确定其为尖孢刺盘孢(C.acutatum),是四川省内首次报道C.acutatum危害辣椒果实的.以该菌为菌源,对60份辣椒材料进行了抗病性鉴定,结果显示所有的材料中仅有4份抗病,14份耐病,剩余的均是感病材料,未发现高抗和免疫的材料.     

广州地区6种野生蔬菜上的病原真菌记述

通过对广州地区规模种植的野生蔬菜秋葵Abelmoschus esculentus（L.）Moench、紫背天葵Gynura bicolor DC．、香麻叶Corchorus capsularis L．、黄花菜Hemerocallis citrina Baroni、四稜豆Psophocarpus tetragonolobus（L．）DC．、一点红Emilia sonchifolia（L．）DC等的病害进行调查及病原菌鉴定,明确了8种真菌病害,分别是秋葵链格孢叶斑病Alternaria malvae Roum.et Letendre、秋葵壳二胞叶斑病Ascochyta abelmoschi Harter、紫背天葵链格孢叶斑病Alternaria tenuissima（Fr）Wiltshire、紫背天葵棒孢叶斑病Corynespora cassiicola Berk．＆Curt．、香麻叶炭疽病Colletotrichum capsici（Syd．）Butl．＆Bisby、黄花菜炭疽病Colletotrichum gloeosporioides（Penzo）Sacc．、一点红壳针孢叶斑病Septoria lactucae Passerini和四棱豆小球腔叶斑病Leptosphaeria blumeri E.Muller,并对各病原真菌的形态进行了描述。除黄花菜炭疽病外,其它7个均为国内未报道的植物真菌新病害。     

Non-abscised aborted sweet cherry fruits are vulnerable to fruit decaying fungi and may be sources of infection for healthy fruits

During three growing seasons (1999–2001), disease incidence of non-abscised aborted and normally developing (sound) sweet cherry fruits were investigated in a research orchard at Ullensvang, western Norway. To reveal possible fungal infections, aborted and sound fruits of two cultivars (cv. Van for three years and cv. Lapins for two years) were harvested over four to seven weeks in an experimental orchard during the green fruit phase and incubated at 20°C in moisture saturated air for 7 days. The most frequently observed fungal pathogens were Monilinia laxa, Colletotrichum gloeosporioides, and Botrytis cinerea. The mean of all observations (±standard deviation) over three years, showed that aborted and sound fruits had a disease incidence of 51.9% (±31.8) and 5.2% (±9.7), respectively, after seven days incubation. In 24 of 25 trials aborted fruits had significantly higher disease incidence than sound fruits after incubation. In one season, when fruits were collected from two commercial orchards, aborted fruits had much higher disease incidence than sound fruits (a mean of 6.5 and 4.5 times higher incidence for the two orchards, respectively). Time of fruit abortion varied with the years (two years observation) and the two cultivars, but the major abortion took place between the fourth and eighth week after anthesis. A higher disease incidence and more rapid disease development in non-abscised aborted fruits indicate that they are more vulnerable to fungal colonisation than sound fruits and may thus be potential incoulum sources for neighbouring, healthy fruits.     

番木瓜WRKY转录因子家族基因鉴定及其响应短孢炭疽菌侵染的表达分析

【目的】在全基因组水平鉴定番木瓜(Carica papaya L.) WRKY（CpWRKY）转录因子家族基因,并对其在短孢炭疽菌侵染下的表达量进行分析,为CpWRKYs 家族的功能研究和利用奠定基础。【方法】采用生物信息学方法,鉴定和筛选CpWRKYs转录因子家族基因成员,并对其进行系统进化分析、基因结构分析、蛋白保守基序预测和启动子顺式作用元件分析;同时以番木瓜炭疽病耐性品种和敏感性品种为材料,利用短孢炭疽菌侵染采后果实,于0,24,48 h 取样,对其转录组学数据进行分析,筛选2个品种中差异表达的CpWRKY基因,并利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)试验对筛选结果进行验证。【结果】经系统分析从番木瓜中共鉴定出48个CpWRKYs成员,分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ 3类;其中第Ⅱ类成员最多,可分为Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd和Ⅱe 5个亚类。CpWRKYs家族成员的氨基酸残基数目为97~747 个,等电点为4.83~9.71,为亲水性蛋白,大部分CpWRKYs的结构域高度保守,但有个别蛋白保守域缺失。在 CpWRKYs家族中共预测到10个保守基序,其中包括含有WRKY七肽结构域的基序1、含锌指结构的基序2和同时含有七肽序列和锌指结构的基序3,其中基序3为大多数I类CpWRKY转录因子N端WRKY结构域所特有。CpWRKYs含有1~6个外显子,同一家族或亚家族成员在基因结构上表现出一定的相似性,同时在CpWRKYs启动子中检测到大量与生物胁迫和非生物胁迫相关的元件。对短孢炭疽菌侵染番木瓜的转录组数据进行分析,在番木瓜耐性品种中筛选出了特异表达的CpWRKY22、CpWRKY11、CpWRKY2、CpWRKY33和CpWRKY25,RT-qPCR检测结果显示,这些基因在耐性品种中特异上调表达,在敏感性品种中的表达量无明显变化。【结论】番木瓜WRKY家族共包括48个成员,该家族基因结构和蛋白基序具有组间差异性和组内保守性。CpWRKYs家族成员强烈响应炭疽菌侵染,其中CpWRKY22、CpWRKY11、CpWRKY2、CpWRKY33和CpWRKY25是有潜力的抗炭疽病候选基因。