2004年8月分子植物育种理论与实践讲习班（第四期）

为了促进现代分子生物学技术在遗传与育种学、进化与分类学、群体与数量遗传学、微生物学、海洋生物及热带生物资源研究中的应用 ,海南省生物工程协会与分子植物育种编辑部拟定于2 0 0 3年 8月 2 - 10日在海南省三亚市海南省农作物分子育种重点实验室举行分子植物育种理论与实践讲习班。本期讲习班由方宣钧博士、吴为人博士主讲并邀请国内外知名专家作学术报告。研讨班结束后将给学员发结业证书。本期讲习班的主要内容 :植物遗传群体和突变库的建立和应用 ,DNA分子标记原理与应用 ,分子遗传图谱的构建 ,质量性状基因的定位 ,数量性状基因…     

水稻稻瘟病抗性基因定位与候选基因辅助选育

本试验研究了304个来源于中156／谷梅2号的重组自交系（RIL）和80个来源于Vandana／Moroberekan的高世代回交群体（BC3B和BC3F4）。在RIL中，利用RFLP，RAPD，SSLP，RGA和候选基因标记定位了一个对菲律宾稻瘟病菌株Ca89（谱系4）的抗性主基因，该基因来源于谷梅2号，暂定名为Pi-26（t），位于第6染色体上的两个RGA标记之间，距离标记RGA24a为4．9cM，距离RGA6a为8．4cM。同时，定位了对浙江稻瘟病菌株92-183的两个抗性基因，其中一个基因来自于中156，     

黑麦C型胞质雄性不育恢复基因的连锁RAPD标记

本研究旨在鉴定黑麦c型不育诱导胞质中与控制雄性不育基因连锁的RAPD标记。采用混合分离体分析法区别雄性不育标记，试验材料为2个雄性不育与可育自交系组合的F2。本试验在711-cmsC与DS2品系的组合中检测到10个标记，在544-cmsC与Oto-20品系的组合中检测到7个标记。在这两个组合中有5个共同标记，这样我们就可以完成比较图谱。有10个标记位于4RL染色体臂上，     

藏山羊生态地理分布及其生态类型

采用实地调查及生态地理比较法等方法研究表明，藏山羊生产区有藏山羊７２５．３万余只，约分布在北纬２６°～３６°（东经７５°～１０４°）之间的生态地理区，以我国青藏高原为分布中心。藏山羊有两个生态类型（即高原型和山谷型）。两个生态类型藏山羊分布地区的自然生态环境，羊的体格、毛被特征、解剖特征、血液生理指标及生化遗传标记等方面均有差异，可按不同的生态类型进行开发利用。     

利用芥蓝×青花菜DH群体构建AFLP连锁图谱

 利用青花菜(Brassica oleracea var. italica) 与芥蓝(Brassica oleracea var. alboglabra) 杂交后代双单倍体(DH) 群体为材料, 通过AFLP技术构建了一个甘蓝类作物较高密度的遗传连锁图谱。该图谱包括9个主要连锁群及2个小连锁群, 总图距801.5 cM, 含337个AFLP标记, 标记间平均距离为3.6 cM,为甘蓝类作物基因定位、比较基因组学及重要经济性状QTL分析提供了一个框架图谱。     

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记

 本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F₁ ,然后得到F₂ 性型分离群体, 利用分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA) 构建全雌和弱雌两个基因池, 筛选了64对AFLP选择性引物EcoR I-NN +Mse I-NNN组合, 发现EcoR I-TG +Mse I-CAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234 bp的特异带。经F₂ 代单株验证, 该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAP MAKER (Version 310) 软件分析, 该标记与全雌性位点的连锁距离在617 cM。命名该连锁标记为TG/CAC₂₃₄。将该特异条带回收、克隆、测序, 设计特异SCAR引物, 再对F₂ 代单株基因组DNA进行扩增, 仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166 bp 的特异带, 表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记, 该标记命名为SA₁₆₆。     

利用大白菜DH群体构建AFLP遗传连锁图谱

 以大白菜‘汴早- 26’和‘光90E16’的F₁ 代进行游离小孢子培养所获得的含有59个株系的DH群体为试材, 利用AFLP技术通过63对引物筛选共获得346个AFLP多态性标记, 运用JoinMap 3.0软件构建大白菜遗传连锁图谱。该图谱主要包括10个连锁群, 总图距为708 cM, 平均图距为2.0 cM。     

黄瓜抗霜霉病异源易位系CT201的筛选与鉴定

 将栽培黄瓜‘北京截头’ (Cucumis sativus L. , 2n = 14) 与Cucum is属双二倍体新种C. hytivus (2n = 38) 回交, 随后自交。通过霜霉病田间接种试验筛选, 从中发现抗霜霉病单株HH12825。将HH12825与C. hytivus的原始亲本‘北京截头’和野生种C. hystrix进行农艺性状对比观察, 发现此单株在叶面积、节长、果长×果径等方面介于栽培黄瓜和野生种之间, 在侧枝数、果刺颜色等方面偏向野生种。观察其花粉母细胞减数分裂过程, 发现其PMC中期Ⅰ多价体频率(56% ±8% ) 和后期Ⅰ二价体分离滞后率(72% ±5% ) 都较高, 具有染色体易位的细胞学特征。进一步利用RAPD分子标记分析, 结果在40个随机引物中找到了两个引物( E219: ACGGCGTATG和A I220: CCTGTTCCCT) 能够在HH12825中重复地扩增出原始亲本野生种C. hystrix特异DNA片断, 从分子水平上证明了其为黄瓜异源易位系, 并把此易位系命名为CT201。     

柑橘抗CTV转基因与分子标记研究进展

综述了柑橘抗衰退病基因工程中两方面的研究进展。介绍多种来源于柑橘衰退病毒(Citrustriztezavirus,CTV)核酸序列的转基因柑橘和抗性种质资源中抗性基因的分子标记,以及所涉及的方法和遇到的问题。目前研究表明,虽然已成功实现对病毒衣壳蛋白(CP)等基因的转化和Ctv等抗性基因的标记,但尚未获得对CTV有高度抗性的转基因柑橘,而抗性基因亦不能实现定点克隆和转化。因此上述两方面研究还有待深入。     

地高辛标记核酸探针的标记方法及其在食用菌研究领域的应用

综述了非放射性地高辛（DIG）标记系统的原理和主要特点，介绍了地高辛标记核酸探针的主要标记方法，影响探针标记方法选择的因素，标记探针的显色检测方法及其在食用菌研究领域的应用。