牛病毒性腹泻-黏膜病病毒斑点酶联免疫吸附检测法的建立

采用辛酸-硫酸铵法提取兔抗BVDV高免血清中的免疫球蛋白IgG,在混合硝酸纤维素膜上进行间接酶联免疫吸附试验,建立了检测BVDV抗原的斑点酶联免疫吸附检测法.结果显示,抗体最佳包被量为400μg/mL,酶标记羊抗兔IgG的最佳工作浓度是1:500倍稀释,抗原最小检出量是5.36μg/mL.应用建立的检测方法对78份腹泻...     

酒糟营养成分检测及其酶水解研究

文章测定了采自甘肃世纪金徽酒业集团公的酒糟营养成分,并对其进行了酶水解研究.结果表明：酒糟中蛋白质、淀粉和粗脂肪含量分别为14.03％、13.7％和3.4％,并富含维生素B族,其中维生素B6含量高达0.3 g/kg.矿物质元素钙、镁、锌、铁含量均远远高于其他常见粮食.含有的18种氨基酸中,必需氨基酸占总氨基酸的30.27％,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值43.40％.氨基酸比值系数法评价表明,该酒糟中必需氨基酸种类齐全,比值系数分（SRC）63.37,比例均衡.酶解结果表明,蒸汽加热处理（121℃,10 min）后酒糟的酶解效果优于超声波（400 W,15 min）处理,酶添加顺序为先加纤维素酶,后加糖化酶,酶添加量分别为纤维素酶（2 000 U/g纤维素）和糖化酶（1 000 U/g淀粉）,该条件下还原糖含量达49.75 mg/mL.     

莆田市部分猪场猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的感染调查

分别用PCR方法和酶联免疫吸附试验对采自莆田部分猪场的382份临床发病育肥猪扁桃体和465份种猪血清样品进行了检测,以分析PCV2的感染情况。结果表明：发病育肥猪PCV2的阳性率为74.60%,种猪PCV2平均阳性率为20.61%。     

禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立

用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒（ARV）P17非结构蛋白基因完整开放阅读框（ORF）的特异性引物，对ARVS1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后，转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0．2mmol／LIPTG诱导，表达的融合蛋白分子质量为42.4ku，占茵体总蛋白的34％。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后，纯度达到85％。Western-blotting显示，纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应，说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。     

青海省牛传染性鼻气管炎及病毒性腹泻黏膜病血清学调查

从青海省互助、玛多、海晏、玉树、贵德、德令哈、共和等14个地区采集牛血清样品420份,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）调查了青海省牛传染性鼻气管炎和病毒性腹泻黏膜病的感染情况。结果在被检牛血清420份样品中,共检出阳性血清样品228份,平均阳性率为50.67%（228/420）;在被检牦牛血清180份样品中,共检出阳性血清样品1份,平均阳性率0.56%（1/180）。     

IFA和ELISA检测J亚群禽白血病病毒的比较研究

为比较3种禽白血病病毒(ALV)抗原检测ELISA试剂盒的特异性和灵敏度,将J亚群禽白血病病毒(ALV-J)传染性克隆rNX0101株以病毒原液(9×103TCID50)、10倍病毒稀释液(9×102TCID50)、100倍病毒稀释液(90 TCID50)接种培养于6孔板的DF1细胞,每孔均提前放入灭菌的细胞爬片,于接种后第1~6天每天取上清用3种ELISA试剂盒(A、B、C)检测ALV p27抗原,同时在接种后的第3天和第6天取出细胞爬片进行间接免疫荧光法(IFA)检测。结果表明,IFA方法对高、中、低剂量接种3 d后均可检出ALV-J的感染,而ELISA试剂盒中只有A试剂盒在高剂量接种时才能检出,试剂盒B和试剂盒C最早要在第4天才可检出;中、低剂量接种,3种试剂盒在第4~5天才能检出;第6天时,由于病毒的明显复制,无论IFA方法还是3种ELISA试剂盒都可检出ALV-J的感染。本研究结果为正确选择商品化禽白血病抗原检测试剂盒提供了借鉴。     

ELISA技术在犬病毒与抗体检测中的应用

<正>ELISA即酶联免疫吸附测定,是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性、特异性较高的试验技术。比较常用的ELISA方法有双抗体夹心法和间接法。     

新疆部分地区牛新孢子虫病的血清学调查

应用间接免疫荧光抗体试验，酶联免疫吸附试验，斑点酶联免疫吸附试验3种检测方法，对新疆地区部分牛和牦牛的血清样品进行新子虫病抗体检测。结果显示，298头份牛血清全部为阴性，4份牦牛血清1份为阳性。     

鸡腺胃型IBV分离株血凝特性初探

从不同发病地区患鸡传染性腺胃病的鸡中分离出４株病毒，选择Ｈ９５和Ｓ９６两株流行株，采用胰蛋白酶和卵磷脂酶Ｃ处理，在不同条件下测定其血凝性，试验表明：用２％胰蛋白酶３７℃处理０．５小时后的病毒株对鸡的红细胞凝集价高达２＾１４，这种血凝性不能被抗Ｈ９５毒株的单克隆抗体、鼠、鸡特异性抗血清所抑制。经４单位／ｍｌ卵磷脂酶Ｃ３７℃处理３小时后血凝价可达２＾９，而能被相应的特异性单克隆抗体、鼠、鸡抗血清所抑制     

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因的原核表达及其ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR技术扩增了禽流感病毒（AIV）A／Goose／HLJ／p46／2003（H5N1）的NSl基因，将其克隆于融合蛋白表达载体pMAL-c2X上，转化DH5α大肠埃希氏菌感受态细胞，经BamHⅠ和HindⅢ双酶切鉴定及序列分析，表明筛选到了重组质粒pc2X-NS1。SDS-PAGE电泳结果显示，重组质粒转化TB1大肠埃希氏菌后，经0．3mmol／L的IPTG诱导，融合蛋白MBP-NS1得到大量表达，融合蛋白以可溶形式存在，分子质量约为67ku。Western-blotting检测结果表明，融合蛋白MBP-NS1能够与H5N1亚型AIV活病毒感染康复鸭血清发生特异性反应，而不能够与H5N1亚型AIV灭活疫苗免疫鸭血清发生反应。试验初步建立了以纯化的融合蛋白MBP-NS1为包被抗原的间接ELISA检测方法，为AIV灭活疫苗免疫家禽与AIV感染家禽的鉴别诊断奠定了基础。