落花生之黄曲毒素防治与其保健植物化合物之探讨

落花生是全球熟悉与普遍消费的作物,其特殊之香气与酥脆质地吸引绝大多数消费者的味口。然而,由于落花生可能被黄曲毒素产生菌污染产毒,导致许多消费者常将落花生与黄曲毒素（系一种天然致癌物质）联想在一起,因而犹豫甚至拒绝进食含落花生之产品。落花生虽然是黄曲毒素产生菌生长之良好基质,但必须遭受其侵入,且得到充分生长才会产毒。田间栽种时有适当灌溉、采收后花生荚果迅速干燥,以及良好仓储条件,是落花生采收前后有效降低黄曲毒素污染的最重要方法。加工时,先将花生仁轻度焙烤,再脱膜并以色差电子自动筛检,则能更进一步将被霉菌污染之花生仁筛除,筛选后之花生仁可加工制作安全无虞之高品质食品。另外,有鉴于黄曲毒素产生菌普遍存在于土壤中,但采收后之健康花生荚或花生仁几乎均无黄曲毒素之污染,经探讨得知,落花生具有生合成二苯乙烯类化合物（包括熟知的白藜芦醇在内之植物防御素）以抵抗微生物入侵之本能。因此,落花生可经由发芽制备花生芽作为机能蔬菜,并促进生合成二苯乙烯类化合物,包括白藜芦醇,Arachidin-1,Arachidin-3及Isopentadienylresveratrol（IPD）等,这些二苯乙烯类化合物目前已知,具有相当值得重视的抗氧化与抗发炎活性,具有进一步开发作为饮食补充或保健产品之潜力。     

酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺优化

[目的]对酶法提取虎杖中白藜芦醇的工艺条件进行优化。[方法]采用单因素试验与正交试验相结合的方法,确定用酶法从虎杖中提取白藜芦醇的最佳工艺条件。[结果]从虎杖中提取白藜芦醇的最佳工艺为:料水比1∶15(V/V),漆酶含量0.30%,纤维素酶含量0.50%,木聚糖酶含量0.40%,β-葡聚糖酶含量0.20%,pH 4.4,在此条件下白藜芦醇的得率达0.592%。[结论]该研究为白藜芦醇的开发及综合利用提供了研究基础。     

二温式PCR在特异短核酸探针合成中的应用

经基因库序列比对确定花生白藜芦醇合酶基因(RS)中的特异序列(长度约108 bp).以此为模板设计分别含有Sal I和Sac I酶切位点的一对上、下游引物,并应用二温式PCR扩增得到该特异短片段.将该特异片段正向连接到pBIueskriptIIKs( )的多克隆位点上,利用T7 RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记的反义特异短核酸探针.该特异短核酸探针的合成为后续RS基因在花生组织器官中表达的RNA原位杂交研究打下了基础.     

葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。     

花生白藜芦醇研究进展

在花生体内,白藜芦醇合成酶是白藜芦醇生物合成途径中的关键酶之一,也是最主要的限速酶。将花生或葡萄中的白藜芦醇合成酶基因转化到其它植物中,可以有效提高植物的抗病性。本文简要介绍了白藜芦醇一般特性,对花生中白藜芦醇的分布、诱导因素作了相关介绍,并阐述了白藜芦醇在植物体内的生物合成途径及白藜芦醇合成酶基因的克隆、诱导表达及转化。     

花生芽白藜芦醇的影响因素及分子结构研究

研究种子、水质和不同取材部位对白藜芦醇含量的影响,并初步探讨花生芽内白藜芦醇的分子结构类型。采取紫外分光光度法测白藜芦醇含量,首先选择2种花生种子,一是到成熟期收获的种子,一是成熟期后延期半月收获的种子,对比二者萌发后白藜芦醇的含量;花生芽培养期间,使用纯净水和配制的营养水,对比花生芽内白藜芦醇含量的变化;生长初期,取1,2,3,4,5,6,7,8 cm长的胚轴及子叶测其含量;酶解花生芽2,3,4,5 cm胚轴,检测酶解后白藜芦醇含量。结果表明,酶解后的白藜芦醇比酶解前含量增加;胚轴在3 cm时含量最高,子叶在胚轴1 cm时含量最高;水质对白藜芦醇无明显影响,而延长收获期,对白藜芦醇含量有明显影响。白藜芦醇有糖化形式存在,花生芽培养用纯净水,使用延期收获的种子,选取3cm左右到胚轴或整株,即可得到经济实效的花生芽。     

白藜芦醇对HA-VSMC细胞膜电位和钙离子的影响

[目的]研究白藜芦醇对人主动脉血管平滑肌细胞(T/G HA-VSMC)膜电位和游离钙浓度的影响。[方法]用荧光染料DiBAC4(3)和Fluo-3-AM分别标记细胞,在流式细胞仪上分别测定细胞膜电位及胞内游离钙浓度的变化。[结果]给予Res后,HA-VSMC膜电位去极化,胞内游离钙浓度升高。[结论]Res可去极化HA-VSMC细胞膜电位,促进钙内流。     

甘薯Ran基因的克隆和表达分析

Ran蛋白是小GTP结合蛋白家族成员之一,控制着蛋白和RNA分子的运输过程。研究发现有些Ran基因受多种逆境胁迫的诱导表达。为了获得甘薯Ran基因,本试验通过RT-PCR克隆了1个甘薯Ran基因。测序结果显示其含有长666 bp的完整开放阅读框,编码的蛋白含221个氨基酸,推测分子量为25.15 kDa。比对分析发现甘薯与多种生物的Ran蛋白的氨基酸序列同源性都超过90%,荧光定量PCR研究表明IbRan基因受低温、PEG、盐和植物激素ABA的诱导表达。这为利用基因工程手段调控甘薯的抗逆性奠定了基础。     

白藜芦醇对动脉粥样硬化大鼠核转录因子NF-кB的影响

[目的]研究白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化（AS）大鼠血脂水平和NF-κB的影响,探讨抗AS的部分机制。[方法]制成AS大鼠模型后,设4个组：①模型对照组（高脂饲料）;②低剂量给药组[高脂饲料＋Res30mg/（kg·d）];③中剂量给药组[高脂饲料＋Res60mg/（kg·d）];④高剂量给药组[高脂饲料＋Res120mg/（kg·d）],连续灌胃给药5周后,测定各组血脂和血管壁组织NF-кB阳性细胞表达率。[结果]各给药组TG、TC和LDL-C均较对照组有不同程度的降低,HDL-C较对照组有所升高;免疫组化和蛋白印迹分析均显示各给药组NF-кB阳性细胞表达率明显低于对照组。[结论]白藜芦醇可调节AS大鼠血脂,降低AS大鼠主动脉壁NF-κB的表达,从而抑制AS的形成。     

白藜芦醇-羟丙基-β-环糊精包合物的制备及鉴定

采用冷冻干燥法制备白藜芦醇-羟丙基-β-环糊精包合物。采用正交试验以包合率为指标筛选最佳工艺条件:白藜芦醇∶羟丙基-β-环糊精为1∶2(物质的量的比),包合温度为20℃,包合时间为60 min。以红外光谱、紫外光谱方法对包合物进行鉴定,初步证明包合物已形成。通过测定包合率的大小证明羟丙基-β-环糊精包合白藜芦醇效果较好。