传染性支气管炎病毒S1蛋白在Vero细胞的表达与分布

将传染性支气管炎病毒（IBV）ZJ971 S1基因亚克隆到绿色荧光蛋白（GFP）表达载体pEGFP—C2中，成功构建重组表达质粒pEGFP—ZJ971-S1。重组质粒在脂质体的介导下转染Vero细胞，借助荧光显微镜在转染后4h观察到S1—GFP融合蛋白的瞬时表达。免疫细胞化学染色（ICC）结果显示，抗ZJ971 S1D蛋白单克隆抗体和鸡抗IBVZJ971全病毒血清特异性识别了S1基因转染细胞，表明S1蛋白在Vero细胞中得到有效表达。荧光显微镜观察和ICC均表明，S1表达蛋白主要分布在转染细胞的胞浆内，而胞核中未见分布，提示IBVS1蛋白内可能存在与病毒装配相关的细胞定位信号。     

双黄连粉针主要药效及安全性的研究

双黄连粉针由金银花、黄芩、连翘组成,具有辛凉解表、清热解毒的功效。临床上用于治疗急性上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃体炎、轻型肺炎等。根据其主治功效,笔者对其主要药效及安全性进行了研究。1试验材料1.1药品及试剂双黄连粉针(0.1g/支,相当于原生药10g/g),批号:20     

禽传染性支气管炎DNA疫苗在鸡体内的分布和安全性

采用本实验室构建的3种禽传染性支气管炎病毒基因的真核表达质粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN,按各50 mg/L配制成质量浓度为150 mg/L的DNA疫苗,经腿部肌肉分点注射免疫1周龄SPF雏鸡。分别在免疫后24 h,73、0及60d,采集试验鸡的血液、心、肝、脾、肺、肾、胸腺、性腺（卵巢/睾丸）及注射部位肌肉进行组织总DNA抽提,以组织总DNA为模板进行PCR扩增。另外,在对照组DNA模板中加入不同拷贝数的质粒,确定PCR反应的灵敏性。以纯化后的组织总DNA为模板,PCR法检测质粒DNA整合到鸡细胞染色体基因组上的可能性,评价疫苗的安全性。结果表明,该疫苗在24 h内迅速分布于全身,并能在血液及所有检测的组织器官内持续分布60 d;纯化后的组织基因组DNA经PCR扩增均呈阴性,未发现整合现象,证实该DNA疫苗的安全性好。     

鸡传染性支气管炎的病原学研究

鸡传染性支气管炎（ＩＢ）是由传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）引起鸡的一种急性、高度接触性传染病。该病毒呈世界范围内流行。１９３１年Ｓｃｈａｌｋ和Ｈａｗｎ首先报道了此病。１９５６年发现康涅狄格（Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）和马萨诸塞（Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｓ）...     

鸡传染性支气管炎病变型的研究进展

鸡传染性支气管炎（ＡｖｉａｎＩｎｆｅｃｔｉｏｎｓＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓ,ＩＢ）是由传染性支气管炎病毒（ＩｎｆｅｃｔｉｏｎＢｒｏｎｃｈｉｔｉｓＶｉｒｕｓＩＢＶ）引起的急性、高度接触性传染病。目前世界上已分离的ＩＢＶ毒株达３０多种。正是由于新的变异毒株不断...     

应用RT-PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S_1基因的研究

选择Ｓ１基因做为目的基因,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增１２株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的ＩＢＶ,所用引物为ＩＢＶＢｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列,跨幅为１．７２ｋｂ。结果６株ＩＢＶ毒株（ＳＡＩＢ３、Ｆ、Ｄ４１、Ｍ４１、Ｈ５２、Ｈｏｌｔｅ）扩增出了长约１．７ｋｂ的Ｓ１基因片段,而另６株ＩＢＶ毒株虽经４次ＲＴ－ＰＣＲ重复后也显阴性。用ＨａｅⅢ内切酶对６个毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物进行酶切,结果显示Ｍ４１、Ｈ５２、Ｄ４１３个ＩＢＶ毒株的Ｓ１基因包含两个ＨａｅⅢ位点,Ｆ株与Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因包含１个ＨａｅⅢ位点,而ＳＡＩＢ３株Ｓ１基因则已丢失ＨａｅⅢ位点。实验结果表明：运用ＲＴ－ＰＣＲ技术检测ＩＢＶ时,由于Ｓ１基因的核酸序列具有较高的变异率,因此Ｓ１基因不宜做为目的基因。     

中国鸡传染性支气管炎病毒的变异

同ＩＢＶ参考株比较,中国ＩＢＶ流行株血清型内和血清型间在基因型和组织嗜性上均已发生变异,研究首次表明ＩＢＶ血清型,基因型及组织嗜性间存在有规律的相关性,病毒免疫原Ｓ１基因的点突变在一定程度上影响病毒的免疫原性。     

传染性支气管炎病毒的分离提纯及蛋白电泳分析

通过ＳＰＦ鸡胚接种分别对传染性支气管炎病毒的２ 个标准毒株Ｍ４１、ＩＢＶ－ Ｔ 株，４ 株山东分离株及１ 株北京分离株进行扩增繁殖；利用差速离心法、蔗糖不连续密度梯度离心法进行提纯；用ＳＤＳ－ 聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行蛋白分析。结果表明：各毒株都含有四种结构蛋白，且各毒株结构蛋白分子量基本相似，其中仅Ｍ 和Ｓ蛋白略有区别