柑橘溃疡病致病基因PthA核定位信号肽抗血清制备及其抑菌的研究

 用PCR法扩增位于柑橘溃疡病菌致病基因pthA C-末端的3个核定位信号序列,并将其克隆到原核表达载体PET32a(+)上,经双酶切及核酸序列测定重组质粒(PthA-NLS),其序列与GenBank中pthA的相关序列有99.9%的同一性。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导了重组多肽的表达,并用Ni2+-NTA纯化柱得到了48kD的纯化重组多肽。把重组多肽注入免疫Balb/c小白鼠,制备了相应的抗血清,Western Blotting和ELISA分析结果表明,抗血清可特异地结合重组多肽,亦可识别溃疡病菌PthA天然蛋白,获得的抗血清可以用于柑橘溃疡病的检测。利用抗血清与溃疡病菌混合接种离体冰糖橙叶片,发现抗血清能推迟溃疡病菌的致病过程,且病斑比对照小,但未能达到抗病的程度。pthA基因末端核定位信号序列的克隆、原核表达及抗血清的制备为进一步研究pthA的致病机理和研发溃疡病快速分子检测技术奠定了基础。     

四种鹅病快救治

一、小鹅瘟立即将未出现发病症状的个体隔离出饲养场地,放在清洁无污染场地饲养,每只雏鹅皮下注射高效价抗血清0.5—0.8毫升或卵黄抗体1—1.6毫升,在血清或卵黄抗体中可适当加些广谱抗菌素;每只病雏鹅皮下注射高效价     

提高兔抗血清制备量的措施

<正>抗血清即免疫血清或高免血清,是指含有对某一特异性抗原起作用的抗体的血清。是用同一种抗原物质(菌苗、疫苗、类毒素等)反复多次注射动物体后,机体体液中尤其是血清中产生大量抗体,待抗体效价达到实验要求时,采集全血,析出的血清即为我们所需要的抗血清。制备血清需要一     

小鹅瘟的诊断和防治

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起雏鹅的一种急性败血性传染病,主要感染25日龄以内的雏鹅,25日龄以上很少发病,该病最早发病在雏鹅4～5日龄开始,多在7～10d发病,数日内波及全群,致死率高达90%[1].早在1956年,我国学者方定一教授首先发现了该病,认为其病原是鹅细小病毒,并将该病命名为小鹅瘟(gosling plague,GP).     

甜菜黑色焦枯病毒BBSV的提纯与抗血清制备

用病毒分离提纯技术及血清学制备技术对甜菜黑色焦枯病毒进行生物学及血清学研究，探讨制备高效价抗血清的有关技术问题，本次试验中抗血清效价测定为1：512，用已知纯度BBSV做免疫电镜观察证明抗血清效果良好。     

猪源粪肠球菌菌毛亚单位蛋白多抗对其生物被膜形成及黏附侵袭作用的影响

以猪源粪肠球菌N9、N41为受试菌株,探究了粪肠球菌N9、N41的生物膜形成能力和对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)的黏附侵袭能力,然后与重组亚单位蛋白(Ebp)的多克隆抗血清及纯化IgG作用,分别测定其生物膜的形成量、对猪肠上皮细胞(IPEC-J2)的黏附侵袭能力。结果表明,多抗IgG EbpA1、EbpC1和EbpA3对生物被膜的形成有阻断作用(P0.05),且EbpA1的阻断作用最强,其次是EbpC1。6个蛋白片段的多抗血清对细菌黏附、侵袭细胞均有一定的阻断作用,但血清EbpA1和EbpC1对菌株的黏附侵入阻断能力最强,且对N41菌株黏附、侵袭细胞的阻断能力强于N9菌株;6个纯化多抗IgG的黏附、侵入阻断作用基本同多抗血清的作用。这说明重组亚单位蛋白EbpA1和EbpC1可诱导试验动物机体产生相对应的特异性抗体,且在体外试验中具有明显的免疫保护作用。     

抗血清防治蛋鸡新城疫的疗效试验

在鸡新城疫(ND)防治实践中,应用抗血清进行防治很少见,这样做一方面可能与传统的免疫学理论相违背,因为新城疫是细胞免疫为主的病毒性疾病。所以通常认为体液免疫无效;另一方面新城疫抗血清价格昂贵,不易大批量生产和使用。但笔者曾在1996年7月份用抗血清成功地治疗了一起蛋鸡新城疫,取得了确实的疗效,现将诊治经过报道如下:     

鸡Mx基因的表达及其抗血清的制备

Mx蛋白已被证明具有抗A型流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的生物活性.本研究通过PCR扩增,将Mx基因克隆至pMD18-T载体;经测序验证后将Mx基因克隆到原核表达载体pProExHTa和pcDNA3.1中.以构建的重组质粒pProExHTa-Mx转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达,以切胶纯化方式回收了Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清;SDS-PAGE和western blot分析表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 ku,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应.以真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性.抗血清的制备为鸡Mx蛋白的功能研究、Mx蛋白在转基因动物机体中表达的检测奠定了基础.