关中驴抗兔瘟IgG制备工艺研究及质量监控

应用本中心选育的兔出血症病毒(RHDV)配制成油佐剂抗原,按特定基础免疫与强化免疫程序接种陕西关中驴,适时采集血浆,选用改进的提纯工艺和质检方法,研制用于预防和治疗驴抗兔瘟免疫球蛋白(IgG)生物制剂获得理想结果.经在全国6个省、市、自治区试用后疗效显著,治愈率85%,紧急预防有效率为100%.     

流感疫苗脂质体制备的初步研究

以包封率为依据,采用薄膜分散法制备疫苗脂质体,以Lowry检测法测定包封率.结果制备得到包封率高于84%的疫苗脂质体.制备过程中冻融处理、磷脂用量对疫苗脂质体包封率影响较大,该实验筛选得到的配方能制备得到较高包封率的疫苗脂质体.     

奶牛MTT比色法的最佳条件探讨

为建立奶牛淋巴细胞增殖反应MTT比色法,对试验条件进行了研究。应用L16(45)正交试验,对影响MTT比色法的四个主要因素,包括ConA浓度、细胞浓度、培养液小牛血清浓度及培养时间进行了比较和探索。试验表明几个因素对其增殖反应都有显著影响(P<0.05),且最佳反应条件为:15μg/mL的ConA、1×106/mL细胞浓度、10%小牛血清及60h的培养时间;影响增殖反应的先后顺序为细胞浓度、ConA浓度、培养时间及血清浓度。     

梨果实发育过程中石细胞团及几种相关酶活性变化的研究

以梨品种西子绿、菊水及砀山酥梨为试材,对不同发育时期梨果实石细胞团的密度、大小及几种相关酶的活性变化进行了研究。结果表明石细胞团的分布密度在幼果期较高,以后随着果实的发育和膨大,密度逐渐减小,接近成熟前1个月左右基本稳定;石细胞团的直径随果实的生长而逐渐变大;苯丙氨酸解氨酶在果实发育初期表现出较高的活性,随着果实的生长逐渐降低,花后75d后保持低水平不变;过氧化物酶活性高峰出现稍迟于苯丙氨酸解氨酶,高峰后呈现出下降的趋势;多酚氧化酶活性波动较大,总的变化趋势逐渐下降。品种间苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶活性与石细胞团的形成之间表现为正相关。     

犬传染性喉气管炎病毒的分离及鉴定

用犬肾细胞 (MDCK)从疑似犬传染性喉气管炎病毒感染犬的急性期血清中分离到 1株病毒 ,经血凝试验、免疫电镜观察、中和试验、免疫荧光抗体试验、细胞培养特征观察和回归动物试验等鉴定 ,证明所分离的病毒为犬传染性喉气管炎病毒 ,命名为 BJ- JB- 3。     

细胞松弛素B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响

目的　探讨细胞松弛素 B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响。方法　常规超排 KM小鼠获卵母细胞 ,将有明显第一极体的卵母细胞放入含有 5× 10 - 3、1× 10 - 2 、2× 10 - 2 g/ L CB的成熟培养液中孵育 15 min,采用盲吸法去核 ,去核后的卵母细胞放入含 5× 10 - 3g/ L Hoechst33342的成熟培养液中染色 15 min,在荧光显微镜下检查去核的效率。结果　 CB组去核率可达 88.2 % ,而对照组去核成功率仅达 2 9.7% ,两者的去核效果统计学上有显著差异 ;同时 CB的浓度过高会影响去核的效果 ,使卵母细胞的破溃率升高。结论　 CB有利于去核 ,同时卵胞膜可以借助磷脂双层的游动性而很快得到修复 ;高浓度的 CB对卵胞膜作用过于强烈 ,细胞骨架严重破坏 ,磷脂双层结构的弹性和粘性减弱 ,修复能力降低 ,影响胚胎的构建。     

医用外科拉链生物相容性研究

生物相容性是指生命体组织对材料产生反应的一种性能，包括组织相容性和血液相容性，生物安全性和生物功能性原则，生物材料对宿主是异物，在体内必定会产生某种应答，或出现排异现象，生物材料要应用于机体，应使发生的反应被接受，不产生有害作用，因此，要对生物材料进行生物安全性评价，以     

鸭肠炎病毒单克隆抗体的制备

采用差速离心和蔗糖密度梯度离心法提纯鸭肠炎病毒(DEV)鸭胚成纤维细胞适应毒，免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经间接ELISA筛选，有限稀释法3次克隆，获得了2株稳定分泌DEV单克隆抗体的杂交瘤细胞株1B8和2G8。经鉴定，2株单克隆抗体分别为IgM和IgG1亚类，腹水ELISA效价均达到1：10^7以上。以2G8单抗腹水为材料，采用间接免疫荧光抗体技术对DEV标准毒感染的鸭胚成纤维细胞进行检测，结果表明，用该抗体可特异性检出接毒后6h感染细胞中的DEV，且感染后48h免疫荧光强度最高，该单抗与细胞成分和鸭肝炎病毒无交叉反应。将杂交瘤细胞冻存3和6个月，复苏后仍能稳定分泌单克隆抗体。     

猪原始生殖嵴细胞(PGCs)建系因素的研究

从五指山猪(WSZP)近交系第8～13代培育群中，先后选用21头5～10月龄青年母猪，分别于授精后25～30d采集胎儿106个，进行原始生殖嵴(PGCs)细胞分离、培养等建系技术研究。以DMEM F10(1:1)为基础培养液，按添加或不添加生长因子，将培养液分为A、B、C3种，并以STO细胞作饲养层，在38℃、5.0％CO2和湿润的气相中进行培养建系。结果获得胚胎生殖嵴细胞(EG)细胞系6个细胞株，其中1个EG细胞株传至11代、2个传至5代、1个传至4代、2个传至3代冻存。并进行了AKP染色、体外分化、冷冻-解冻复苏和嵌合体制作等鉴定研究。研究发现：不同胚龄对EG细胞建系具有一定影响，不同培养液对EG细胞建系效果不同，STO细胞饲养层的质量是建株、传代、冷冻-解冻复苏的关键因素之一。EG细胞系的初步建立，为今后筛选进入种系的EG细胞系、实施体外基因操作提供了可能。     

山羊生精上皮细胞分离研究

采用四种酶法分离二月龄关中奶山羊生精上皮细胞,A组:胶原酶Ⅳ;B组:胶原酶Ⅳ +透明质酸酶;C组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA;D组:胶原酶Ⅳ+透明质酸酶+胰蛋白酶与EDTA+DnaseI。结果二月龄羔羊曲细精管主要包含Sertoli细胞、精原细胞和管周排列的肌样细胞。每 200mg睾丸实质收获生精上皮细胞总数 (×105 )A,B,C,D组分别为 6. 91±0. 68, 6. 67±0. 80, 5. 94±0. 81, 5. 74±0. 82;细胞存活率 (% )分别为 76. 82±3. 80, 75. 96±1. 61, 94. 19±2. 89, 92. 32±1. 97;圆形细胞比率 (% )分别为 17. 54±1. 68, 16. 70±1. 46, 23. 64±1. 72, 22. 90±2. 38;细胞贴壁率(% )分别为 5. 93±0. 36, 5. 81±0. 54, 26. 94±1. 54, 25. 00±1. 74。C,D组不但组织块解离效果及细胞离散程度均较A,B好,且原代培养细胞团块数少。多重比较C,D组显著优于A,B组 (P<0.05);C组与D组差异不显著(P>0.05),但与A,B组比较细胞存活率、圆形细胞比率及贴壁率差异极显著(P<0.01)。结论认为C组是较简单有效的山羊生精上皮细胞分离酶组合。