应用套式PCR分段扩增犬瘟热病毒融合蛋白的全基因

为研究犬瘟热病毒（ＣＤＶ）融合蛋白各段功能,根据ＣＤＶＯｎｄｅｒｓｔｅｐｏｏｒｔ弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了１０条寡聚核苷酸引物。对此１０条引物进行不同的配对,将１株犬瘟热疫苗弱毒株细胞培养物的总ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ扩增,利用１次ＰＣＲ扩增得到了７个基因片段,最长的达１６６９ｂｐ,最短的为３１４ｂｐ;应用套式或半套式ＰＣＲ,扩增得到了能覆盖整个融合蛋白基因的８个片段     

鸡大肠杆菌iss基因的克隆测序及原核表达

本实验对鸡大肠杆菌O2血清型菌株进行iss基因克隆测序，并在此基础上设计出两对套式引物，分别对含信号肽Miss基因序列和不含信号肽Miss基因序列进行扩增，并与原核表达载体pGEX-6p-1连接进行原核表达。iss基因克隆测序的结果与两组国外发表Miss基因序列进行比对，其同源性达100％。SDS—PAGE鉴定显示融合蛋白获得了较理想的表达，融合蛋白分子量分别约为36kD和33kD。     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致，说明是Ｆｃ基因的表达产物     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的…

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒）、对病毒进行纯一提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆人ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／Ｓａｌ Ｉ双酶切法、ＰｓｔＩ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，ａｑｔ     

城市生态修复中的屋顶模块式垂直绿化技术

随着社会的持续发展,城市化进展随之加快,产生建筑光污染、空气污染等一系列阻碍城市持续发展的问题,城市生态修复这一概念成为落实城市健康发展的重要方针。因此,屋顶模块式垂直绿化技术成为现代城市绿化的必然趋势,其既符合城市生态修复理念,具有净化空气、减少建筑光污染的作用,还可以有效减少近年来肆虐城市的雾霾。通过分析屋顶模块式垂直绿化技术,旨在为城市可持续发展提供一定推力。     

火烧迹地森林修复探究

极端高温现象经常发生在世界各地,森林火灾频率增多。森林资源作为人与自然和谐发展的重要组成部分,森林火烧后的地块难以恢复到原始森林面貌,大量森林植物损毁,生态环境恶化,破坏了动植物赖以生存的生活环境。研究森林火烧迹地的生态修复,对于防风固沙、保持水土涵养和净化空气质量等有重要意义。作为森林可持续发展的恢复模式,总结火烧迹地森林修复措施和原则。     

高职动物医药专业“123”实践教学体系改革与实践

为了顺应"工学研融合"人才培养模式的发展要求,根据动物医药专业人才培养目标定位,提出了"123"递进式实践教学模式,从优化实践教学内容、搭建多层次实践教学平台、改革实践教学模式、打造"三能型"师资队伍、改革考核评价体系、建立"三级监督、三方联运"的监督保障体系等方面着手,对动物医药专业实践教学体系进行改革并付诸实践,使动物医药专业人才培养质量明显提高。     

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统在家蚕中表达人瘦素蛋白

瘦素(leptin)蛋白由肥胖基因编码,对人体能量代谢等多种生理过程起着重要的调节作用。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统,将人瘦素蛋白基因(lep)克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTb,并转化E.coli DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-lep,然后转染家蚕BmN细胞,获得重组杆状病毒。用SDS-PAGE和Western blotting方法在感染重组病毒的家蚕BmN细胞检测到大小约22 kD的蛋白条带,与预期的人瘦素蛋白分子质量相符。给家蚕5龄起蚕注射重组病毒液后的4～5 d出现发病症状,RT-PCR检测发病家蚕的血液中有lep基因转录,并通过SDS-PAGE和Western blotting检测到大小为22 kD的人瘦素蛋白的表达。研究结果表明,利用Bac-to-Bac表达系统能够获得含有人瘦素蛋白基因的重组杆状病毒,并且目的蛋白能在家蚕细胞及幼虫体内表达。     

细小病毒和腺联病毒感染细胞方式的研究进展

细小病毒是最小的动物病毒之一,包括2个亚科,即浓核病毒亚科和细小病毒亚科。浓核病毒亚科病毒感染非脊椎动物;细小病毒亚科病毒感染脊椎动物,其主要包括细小病毒属、红病毒属和依赖病毒属。依赖病毒属病毒依赖于一种辅助病毒(腺病毒或疱疹病毒)为其应答反应提供基础。它们能有     

网络版《中国草业开发与生态建设》数据库的更新

针对网络版《中国草业开发与生态建设》专家系统知识库、模型库和空间库的特点,提出以下更新方案:知识库和模型库的更新采用2个途径进行,即数据库管理员直接在服务器端进行更新和普通用户在远程客户端以提交数据的形式进行更新。由于空间数据库处理的复杂性和传输量大的特点,空间数据库的更新主要还是由数据库管理员在服务器端进行。本研究虽在一定程度上全面详细地阐述了数据库的更新过程,具有一定的可行性,但仍有许多需改进的地方,如普通用户提交的数据在传往服务器端前的验证标准的制定、空间数据更新技术的改进等。