农杆菌介导的玉米合子基因转化

本研究建立了农杆菌介导的玉米合子转化方法。用农杆菌介导合子转化方法,以含有bar基因的标准双元载体PTF102和含有bar基因和双价抗虫基因Cry1A（a）或Cry1A（c）、PTA（半夏凝集素）的载体p3300-Bt-pta转化玉米自交系吉8902、丹340、吉4112、吉853、铁7922及PA91,直接从受体植株得到转化种子,用除草剂PPT筛选和PCR鉴定,获得转基因植株及后代。实验分析了2002年、2003年和2004年的3批转化操作的结实率、转化率及转基因的遗传情况：经农杆菌侵染的雌穗平均结实率为39％,合子转化频率达1％以上,转基因可以遗传下去。农杆菌介导玉米合子转化方法可以重复获得成功,表明我们成功建立起一个新的不依赖组织培养的玉米转基因技术体系。     

大肠杆菌整合子的研究进展

<正>大肠杆菌(E.coli)是肠杆菌科细菌中最广泛分布及最常分离的革兰阴性菌。由于抗生素的广泛使用和滥用,导致了多重耐药(multidrug resistant,MDR)大肠杆菌的大量出现,对人类健康及动物安全造成了致命威胁[1-2]。建模研究预测,到2050年,大肠杆菌MDR致命性感染将达到每年300万例,占致命性MDR感染的30%[3-4]。抗微生物药物耐药(antimicrobial resistance,AMR )产生的主要原因是     

大肠杆菌转座子及整合子携带类型与其多重耐药谱型相关性的研究

为探究猪源大肠杆菌转座子及整合子携带类型与其多重耐药相关性，试验采集贵州省12个规模化养猪场猪肛门拭子，分离鉴定到259株大肠杆菌。采用微量肉汤稀释法测定分离菌株对7类（16种）抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）值，并用PCR方法检测转座子及整合子的携带情况。结果发现，受试菌株对7类（16种）抗菌药物呈现出不同程度的耐药，对大观霉素、庆大霉素、四环素为高度耐药，MIC₉₀的耐药倍数为32倍；对亚胺培南、多黏菌素B表现敏感，MIC₉₀的耐药倍数为2倍，其他药物的耐药倍数介于二者之间。受试菌株多重耐药最高达7重，2重以上耐药率达到100%，多重耐药谱型共计14种，以β-内酰胺类+氨基糖苷类+四环素类+酰胺醇类+磺胺类+氟喹诺酮类、β-内酰胺类+氨基糖苷类+四环素类+酰胺醇类+磺胺类+氟喹诺酮类+多肽类为主，占56.97%。受试菌株转座子和整合子检出率较高，转座子及整合子表型共计20种，其中IScp1+IS26+tnpA+tnp513+intI1和IS26+tnpA+tnp513+intI1的组合类型占比最多，分别为48.48%和26.06%。本试验结果表明，插入元件IScp1与β-内酰胺类药物耐药呈显著或极显著相关（P<0.05，P<0.01），插入元件IS26与氨苄西林耐药相关性极显著（P<0.01），与磺胺异唑耐药相关性显著（P<0.05）；整合子intI1与氨苄西林耐药相关性极显著（P<0.01）；intI2与头孢他啶耐药相关性极显著（P<0.01），与头孢噻呋、恩诺沙星、亚胺培南耐药相关性显著（P<0.05）；IScp1+IS26+tnpA+tnp513+intI1组合类型与复方新诺明耐药相关性极显著（P<0.01）；IS26+tnpA+tnp513+intI1组合类型与复方新诺明耐药相关性显著（P<0.05），与头孢噻呋耐药相关性极显著（P<0.01），但与庆大霉素耐药呈负相关关系（P<0.05）。综上，受试菌株对β-内酰胺类、氟喹诺酮类、磺胺类、氨基糖苷类的多重耐药与转座子及整合子携带类型呈显著或极显著相关。     

山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品，采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定，用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性，采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示，从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌；大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%，多重耐药率为15.5%，其中对多黏菌素耐药率为52.2%，对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%，而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示，β-内酰胺类耐药基因中bla_TEM基因携带率为100%，其中全部为bla_TEM-1基因，bla_CTX-M基因携带率为32.4%，其中主要为bla_CTX-M-15基因，没有检测到bla_SHV、bla_OXA基因；多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%；喹诺酮类耐药基因中aac（6'）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%，qnrB基因携带率为20.8%，没有检测到qnrA和qnrC耐药基因；对8种毒力基因检测分析结果显示，仅Hly毒力基因没有被检出，Ecs3703、Irp2基因的检出率较高，分别为90.1%和63.4%，71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子，检出率为15.5%，11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构，最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明，山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重，携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌，Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用，可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。     

花椰菜雪剑4号合子胚增殖体系的建立

为建立花椰菜合子胚增殖体系,本研究采用花椰菜种子为外植体,经表面消毒后,刻伤并接种到不同胚状体诱导培养基上;将诱导出的胚状体转接到不同的增殖培养基上进行增殖培养。结果显示,花椰菜种子在MS+8.0 mg·L^-1 BA+2.0 mg·L^-1 2,4-D+0.5 mg·L^-1 NAA+8%蔗糖的培养基上可诱导出松散的花椰菜胚状体;将花椰菜胚状体接种到MS+4.0 mg·L^-1 BA+0.5 mg·L^-1 2,4-D+3%蔗糖的培养基上,胚状体继续增殖生长,增殖效果良好。     

肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌耐药基因检测与耐药性分析

利用聚合酶链式反应(PCR)扩增整合酶基因intⅠ检测沙门菌中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒并从β-内酰胺类、磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和酰胺醇类等5类抗生素的15种耐药基因进行检测,微量肉汤稀释法(MIC法)测定菌株对8类13种抗菌药的敏感程度。结果显示:肉鸡屠宰加工生产链中分离的沙门菌共检测12种耐药基因,未检测到β-内酰胺类的blaoxA-1group、blapse-1、四环素类的tetB和tet X基因。其中,以耐药基因catⅠ的检出率最高,87%(59/68);其次是tet G,检测率是85%(58/68);blatem耐药基因69%(47/68)。69%(47/68)的沙门菌检测出第Ⅰ类整合子。PCR扩增Ⅰ类整合子耐药基因盒,检测率为73%(35/47),扩增产物大小为1 009,1 664bp,携带aadA5、dfrl7和aadA2耐药基因,可分别介导对氨基糖苷类抗生素壮观霉素、链霉素和磺胺类药物甲氧苄氨嘧啶的耐药。68株菌中对AM的耐药率最高,多重耐药(≥2)菌株高达85%。结果表明:肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌检测到较高的耐药基因及整合子携带率,对常见抗生素具有不同程度的耐药性,且耐药基因在耐药药敏试验结果与耐药基因的检测结果具有一致性。     

Effect of RH-3 Fusion Hybrid on the Immune Function and Intestinal Microlora of Three Buff Chickens

The purpose of this experiment was to study the effect of RH-3 fusion hybrid of Bacillus subtilis and Lactobacillus rhamnosus on the immune function and intestinal microflora of three buff chickens.96 one-day-old chickens were randomly divided into 4 groups with 3 replicates per group and 8 chickens per replicate.Chickens in control group were drinking water that had not added the RH-3 fusion hybrid culture;Chickens in the experimental group were drinking water that supplemented with 0.5%, 1.0% and 1.5% RH-3 fusion hybrid culture, respectively.The whole experiment period was 42 days, including two phases of days 1 to 21 and days 22 to 42.The results showed that compared with the control group, the supplementation of RH-3 fusion hybrid increased the Newcastle disease HI antibody titer, SOD activity, lymphocyte transformation rate in serum and the immune organ index of three buff chickens at days 21 and 42, and the difference was significant of 0.5% level (P<0.05).Compared with the control group, the supplementation of RH-3 fusion hybrid reduced the number of Salmonella and E.coli and increased the number of the Bifidobacterium and Lactobacillus in jejunum, ileum and cecum of three buff chickens at days 21 and 42, and the difference was significant of 0.5% level (P<0.05).In summary, RH-3 fusion hybrid could improve the immune function and regulate the intestinal microflora of three buff chickens, promote the growth of beneficial bacteria and inhibit the growth of harmful bacteria, but the effects showed a downward trend with the increasing of the amount of RH-3 fusion hybrid.So the adding amount of RH-3 fusion hybrid in the drinking water of three buff chickens was suggested as 0.5% under this experimental condition.     

植物生长调节物质对成熟红松合子胚愈伤组织诱导的影响

诱导成熟红松合子胚愈伤组织的关键,是选择正确的诱导培养基以及适宜浓度及配比的生长调节物质。结合松柏类针叶树种体胚发生文献,从7种基本培养基中筛选出LM培养基为最佳诱导培养基;在植物生长调节物质的筛选中,2,4-D优于NAA;LM+2mg/L 2.4-D+(0~0.5)mg/L 6-BA可以诱导出更多的Ⅱ型有效愈伤组织;LM+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L 6-BA的诱导培养基中加入0.5mg/L KT或0.5mg/L TDZ,可显著提高有效愈伤组织的诱导率(75.7%)。