猪肝星状细胞内质网应激模型的建立及对泛素化的影响

试验对衣霉素（tunicamycin,TM）处理猪肝星状细胞的浓度和培养时间进行筛选,以期成功构建内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）模型,并在此基础上探究ERS下猪肝星状细胞泛素化的变化。试验采用浓度为0、1、2、5、10和15 μg/mL的TM处理猪肝星状细胞,培养2、4、8、16、24和36 h。通过检测细胞抑制率对TM浓度和培养时间进行初筛;通过检测细胞周期及ERS标志基因和蛋白表达对TM浓度和培养时间进行终选,以确定是否成功构建ERS模型,同时,在ERS下检测猪肝星状细胞泛素化相关基因的表达变化。结果表明：由细胞抑制率检测结果初步确定TM浓度5 μg/mL、培养8或24 h后有可能出现ERS。5 μg/mL TM在培养8或24 h时,ERS标志基因表达均极显著上调（P < 0.01）。在培养8 h时,ERS标志蛋白中仅ATF4显著上调（P < 0.05）,细胞周期中仅G2/M期细胞比例显著下降（P < 0.05）;在培养24 h时,ERS标志蛋白均显著上调（P < 0.05）,细胞周期在G1期出现阻滞,并导致S期和G2/M期细胞比例极显著下降（P < 0.01）。以上结果说明,5 μg/mL TM培养24 h可成功构建细胞ERS模型。在ERS下,细胞泛素化相关基因UBA2和UBE2E的表达均极显著升高（P < 0.01）。综上,猪肝星状细胞经5 μg/mL TM处理24 h,可成功建立ERS模型,并启动泛素化机制。     

产PVL金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞内质网应激和自噬的影响

【目的】研究产PV-杀白细胞素（Panton Valentine leukocidin,PVL）金黄色葡萄球菌ATCC49775（产PVL标准菌株）、ΔPVL 49775（PVL基因缺失株）以及体外重组PVL（rPVL）对奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells,BMECs）内质网应激和自噬的影响,为系统阐述金黄色葡萄球菌及PVL对BMECs损伤的分子机制奠定基础。【方法】用感染复数（MOI）为30的金黄色葡萄球菌菌株ATCC49775和ΔPVL 49775感染BMECs,于感染后3和6 h取样;用100 ng/mL rPVL处理BMECs,于处理后1,3和6 h取样;以未处理的BMECs为对照（CK）。用免疫荧光法检测样品BMECs细胞的自噬体荧光强度;提取样品细胞的总蛋白,以GADPH为内参蛋白,采用Western blot法检测各处理组内质网应激相关蛋白（CHOP和GRP78）和自噬相关蛋白（LC3 Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62）的相对表达量。【结果】ATCC49775、ΔPVL 49775感染后不同时间,BMECs自噬体荧光强度均极显著（P＜0.01）高于CK,内质网应激相关蛋白（CHOP和GRP78）和自噬相关蛋白（LC3-Ⅱ、ATG5、Beclin1和p62）的表达水平也大多显著(P<0.05)或极显著（P＜0.01）高于CK;同一处理时间下, ATCC49775感染组自噬体荧光强度和相关蛋白表达水平均显著(P<0.05)或极显著（P＜0.01）高于ΔPVL49775感染组。 rPVL处理后不同时间,BMECs的自噬体荧光强度均极显著（P＜0.01）高于CK,内质网应激和自噬相关蛋白的表达水平大多极显著（P＜0.01）高于CK。【结论】产PVL金黄色葡萄球菌ATCC49775、ΔPVL 49775以及rPVL均加剧了BMECs的内质网应激和自噬,说明PVL在金黄色葡萄球菌感染BMECs的过程中有重要作用。     

棉花（Gossypium hirsutum L.）花粉壁的发育

用光镜和透射电镜观察研究了棉花花粉壁的发育过程。棉花花粉壁的发生邕于四分孢子时期，四分体形成后，在小孢子的质膜与胼胝质壁之间逐渐形成多糖性质的原外壁。游离小孢子时期，在一定间隔的原外壁中小孢子质膜表面积累外壁物质并形成基粒棒，之后在基粒棒的下部和上部分别横向延展并接合形成基足层和覆盖层。花粉内壁发生     

姜酮缓解3-乙酰呕吐毒素诱导的猪肠上皮细胞损伤研究

本研究旨在探讨姜酮对3-乙酰呕吐毒素（3-Ac-DON）诱导的猪肠上皮细胞损伤的影响。选用IPEC-1细胞经16μmol/L的3-Ac-DON和0、80、160和320μg/mL的姜酮共处理24 h,选择合适的姜酮浓度,研究其对细胞凋亡、内质网应激相关蛋白和紧密连接蛋白表达的影响。结果表明：1） 80、160和320μg/mL的姜酮单独处理没有影响IPEC-1细胞的活力（P>0.05）,160和320μg/mL的姜酮显著缓解了3-Ac-DON引起的IPEC-1细胞活力的下降（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,姜酮显著缓解了3-Ac-DON引起的IPEC-1细胞凋亡（P <0.05）,显著降低了3-Ac-DON引起的凋亡相关蛋白,如活化型半胱氨酸蛋白酶3 （cleavedCaspase-3）、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白（BAX）和细胞色素C（CytC）的蛋白表达上调（P <0.05）。2）蛋白免疫印迹结果显示,与3-Ac-DON处理相比,姜酮显著降低了转录活化因子6（ATF6）、磷酸化的需肌醇酶1α（p-IRE1α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHO...     

钙信号转导对细胞凋亡的影响

钙离子作为生命体最普遍的一种信号转导因子,在细胞的凋亡进程中起到了重要的调节作用。以往的研究认为细胞内钙离子浓度升高是凋亡进行到后期所引起的间接结果,但近年来研究发现钙离子作用于细胞凋亡的各个层次,通过多种方式精细调控细胞凋亡进程,构成了细胞凋亡过程中复杂的钙调控网络。论文总结了近几年来关于钙信号转导对细胞凋亡影响的研究成果,从钙离子与内质网、线粒体、Bcl-2家族蛋白和细胞凋亡的关系出发,就钙信号转导对细胞凋亡的影响进行讨论和分析。     

重口裂腹鱼消化道黏膜的超微结构

用透射电镜技术对重口裂腹鱼消化道黏膜的超微结构进行了观察。结果显示:口咽腔和食道黏膜上皮均为复层上皮,上皮中存在大量粘液细胞,相邻细胞间通过发达的犬牙交错的桥粒紧密相连,表层和中间层细胞中有较多致密颗粒,表层细胞游离端表面有绒毛状突起。前肠吸收细胞微绒毛长而密,细胞质中线粒体、滑面内质网、粗面内质网、高尔基体发达。后肠吸收细胞微绒毛短而粗,终末网区中吞饮小泡较多。巨噬细胞中有多量溶酶体,其中见有凋亡细胞。2种形态的肥大细胞含大量分泌颗粒。肠黏膜上皮中存在少量凋亡细胞,其胞体、胞核和胞质均见有明显的形态学变化。     

重组人表皮生长因子基因遗传转化烟草研究

将携带内质网滞留信号肽SEKDEL编码序列的重组人表皮生长因子基因（hEGF）克隆到植物表达载体中构建植物表达载体pSH-hEGFS,通过冻融法将pSH-hEGFS转化到根癌农杆菌LBA4404中,以烟草无菌苗叶盘为外植体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,经抗生素抗性筛选获得抗性植株,通过GUS组织化学染色分析、PCR检测以及RT-PCR分析,证明重组人表皮生长因子基因已整合到烟草基因组中并已表达,间接法ELISA检测结果表明转基因烟草中重组人表皮生长因子表达量最高达叶片总可溶蛋白的0.003%。     

疱疹病毒引起内质网应激/未折叠蛋白反应研究进展

内质网是真核细胞内蛋白质折叠及翻译后修饰的主要场所，还参与调控Ca2+和脂类物质储存合成，具有重要生理功能。疱疹病毒是一类具有囊膜的DNA病毒，其表面糖基化囊膜蛋白的合成加工依赖于内质网，在病毒复制过程中，大量合成的糖基化囊膜蛋白在内质网内过度堆积则会引起内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS），进而发生未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）。某些疱疹病毒可能已经进化出调控UPR的机制，为复制过程创造最佳环境，它们在宿主细胞内复制时，会引起相关内质网UPR信号级联反应，如细胞损伤、炎症反应、细胞凋亡等。综述了内质网应激/未折叠蛋白（ERS/UPR）对病毒的反应机制，从Ⅰ型单纯疱疹病毒、伪狂犬病病毒、马立克病病毒、鸭肠炎病毒和其他疱疹病毒等感染引起ERS分子机制及相关信号通路进行阐述，以期为疱疹病毒相关疫苗和药物作用靶点的研发提供理论依据。     

血凝素诱发内质网应激反应初探

为促进药物结构优化和改造，利用293T细胞进行转染及蛋白免疫印迹试验，研究病毒血凝素(HA)在内质网应激反应中的作用。结果表明，不同糖基化位点HA蛋白差异性表达明显，HA蛋白可诱发内质网应激反应，且不同的HA蛋白样中CHOP的表达量不同，从而引起内质网应激反应所导致的细胞凋亡也不同。