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51.
一组容量为5 927条烟草(Nicofiana tabacum)EST的数据(GenBank登录号为CV015900~CV021826),包含521个重叠群和3 079个独立EST.EST数据分析显示:高丰度表达基因主要涉及光合代谢、蛋白合成等植物基本的生理功能;而低丰度表达基因则占假定独立转录本(TUTs)总数的85.5%.在此基础上,制备完成cDNA阵列,并应用于盐胁迫下烟叶的基因表达谱分析,结果表明,盐胁迫即可使烟草叶片的基因表达谱发生显著改变,并涉及多个重要的植物生理过程.包括水通道蛋白PIP2a、乙烯应答蛋白酶和mRNA剪接因子prp31等42个基因的检出,为阐明植物胁迫反应的调控机制提供新的线索. 相似文献
52.
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表 相似文献
53.
小黑麦异多附加系M17叶片cDNA文库构建及抗小麦白粉病特异表达cDNA的差别筛选(英文) 总被引:1,自引:0,他引:1
以对小麦白粉病菌免疫的小黑麦异多附加系M17(1R“6R”)为材料,一组接种小麦白粉病菌,另一组不接种.分别提取两组叶片的总RNA,经磁珠法分离出poly(A+)RNA,以Oligo(dT)为引物,经反转录合成cDNA.将接种组双链cDNA克隆进λgt10载体,得到一个含9.8×104个重组噬菌体的cDNA文库.两组cDNA双链经切口平移法制成总cDNA探针,分别与cDNA文库杂交,通过差别筛选的方法,找到了6个与小麦白粉病抗性有关的cDNA克隆. 相似文献
54.
本文以鸡外周血单个核细胞总 R N A 为模板,据已报道的8 种哺乳动物 I L—1β核酸序列保守区设计合成1 对引物,反转录合成c D N A 链,经 P C R 扩增,回收扩增后的 D N A 片段,用klenow 酶处理,与 Pu c1 9 / Sm a I 连接构成重组质粒,转化宿主菌大肠杆菌 J M1 0 9 ,筛选出含有插入片段的重组质粒,用 P C R 及酶切分析鉴定,结果表明获得了带有鸡 I L- 1β片段的c D N A 克隆;再经序列分析测定,得知此片段长为270bp ,与人及小鼠 I L—1β基因核苷酸序列同源性分别为45 % 和30 % 。 相似文献
55.
小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体α亚基cDNA片段的克隆和序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
利用简并引物,采用PCR等分子生物学技术,对小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)α亚基的cDNA片段进行克隆,并对序列进行分析。测序结果显示,扩增的目的基因片段包含了nAChRα亚基的3种亚型(分别命名为Pxαl,Pxα2,Pxα3)。都具有典型的α亚基的结构;2个相邻的半胱氨酸,由2个半胱氨酸之间二硫键形成包含15个氨基酸的胞外环,与烟碱和α银环蛇毒素结合有关的氨基酸残基,克隆的基因片段在氨基酸序列上和其他昆虫nAChRα亚基基因之间有高达65%-99%的同源性,表明克隆的cDNA片段是小菜蛾nAChRα亚基基因的部分序列。 相似文献
56.
利用One-Step RT-PCR技术,从鲫(Carassius auratus)肝胰脏组织中克隆了胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ),并进行了序列分析。结果表明,鲫IGF-ⅠcDNA由486个核苷酸组成,编码包括信号肽、成熟肽(B、C、A、D四个域)和E域的161个氨基酸。核苷酸同源性分析揭示,鲫IGF-ⅠcDNA序列与金鱼的同源性最高,为99.18%;与鲮、三角鲂、团头鲂的同源性次之,分别为94.44%、94.65%、94.44%;与鲤、草鱼的同源性相对较低,为86.03%和85.29%。E区域的分析结果表明,鲫IGF-Ⅰ序列为Ea-2亚型。 相似文献
57.
58.
选取经RT-PCR检测确认带葡萄茎痘伴随病毒的全球红葡萄品种,以葡萄叶片、皮层作为试材,采用SDS法提取高质量总RNA作为模板,以GRSPaV的特异互补引物引导,反转录合成cDNA,通过PCR扩增,获得830 bp的预期目的片段,并将其克隆测序,其同源性与NCBI中的相关序列的同源性达96%.利用克隆质粒合成了生物素标记的GRSPaV的cDNA探针,在此基础上,研究了影响GRSPaV斑点杂交的因素,结果表明当探针浓度为200 ng/mL,甲酰胺浓度为45%,42℃杂交反应4h,可获得较高灵敏度. 相似文献
59.
蜡梅花cDNA文库构建及其高频出现脂转移蛋白cDNA的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
【目的】构建蜡梅花cDNA文库,分析蜡梅脂转移蛋白基因的表达,为探索蜡梅冬季开花分子机理,分离克隆特色基因奠定基础。【方法】以蜡梅花器官为材料,用SMART cDNA Library Construction Kit 构建文库,RT-PCR分析基因表达。【结果】经测定原始文库滴度达到1.4×106 pfu/ml,扩增总文库滴度约为1010pfu/ml,重组率达到96%,插入片段在0.5 kb 以上,平均约1.1 kb,通过PCR 检测,从总文库中检测到了表达丰度不同的蜡梅PI、AP3和LTP基因的特异片段,说明所构建的文库覆盖度高、代表性强,LTP基因具有内含子,而总文库中扩增出的LTP基因不含内含子,说明所构建的cDNA文库无基因组DNA污染, LTP基因在蜡梅开花各个时期均表现较高的转录水平,与EST分析时高频率出现LTP序列的情况相符,证实所构建的文库能够反映蜡梅开花过程基因表达的基本情况。【结论】已获得高质量的蜡梅花cDNA文库,可以用于进一步的基因克隆或EST测序分析,这是首次正式报道蜡梅cDNA文库的构建。LTP基因在蜡梅开花过程中可能具有重要的生物学功能,为探索蜡梅冬季开花分子机理提供了线索。 相似文献
60.
用Gubler—Hoffman法构建了耐低温鲤Cyprinuscarpio脑组织全长cDNA文库,经测定库容量为5.7×10^5cfu/mL,文库的重组率接近95%,平均插入片段长度为1500bp,符合文库保存和筛选实验的要求。同时,根据鲤与低温相关的消减eDNA文库中低温下特异表达基因的片段序列,设计了PCR引物,并在此eDNA文库中进行PCR检测和序列测定。使用BLAST软件将测序的10个cDNA序列同GenBank等数据库进行比对,结果显示,8个阳性克隆有相关同源性,2个克隆为功能未知的基因,全长率接近75%。 相似文献