多位点序列分型技术在凝结芽孢杆菌菌株分类中的应用

本文通过16S rRNA基因和多位点序列分型(MLST)技术,对凝结芽孢杆菌不同菌株进行亲缘关系分析.试验选取国内具有代表性的15株凝结芽孢杆菌菌株,菌株纯化后提取基因组DNA,采用传统的16S rRNA基因分子鉴定和MLST技术相结合进行分析.其中MLST采用5个管家基因:adk、recF、sucC、rpoB和spo...     

纤维素结合域的酿酒酵母表面展示及其黏附位点初探

利用酿酒酵母表面展示系统表达产琥珀酸丝状杆菌S85纤维素结合域家族2(CBD2),分析其纤维黏附位点.将CBD2基因插入质粒pYDI的AGOg2 3'端,构建pMCBD2重组质粒,化学转化pMCBD2至酿酒酵母EBY100中,2%半乳糖诱导CBD2表达于酿酒酵母表面.利用免疫组化技术检测重组酵母细胞在稻草茎细胞壁上的黏...     

一株H1N1亚型猪流感病毒全基因克隆及遗传特性分析

为快速获知流感病毒的全基因组序列,及时得知其遗传演化特性。设计11对通用条形码引物,采用RT-PCR法扩增A\swine\Shandong\01\2009(H1N1)株的8个基因节段,进行克隆测序和遗传进化分析。核酸序列测定结果显示,全基因组序列完整无缺失,但是基因组内2个位点突变导致PB1-F2、NS-1蛋白表达不完整,HA切割位点处氨基酸序列PSIQSR/GLF,无多个连续的碱性氨基酸,符合非致病性切割位点的特征。从绘制的各个片段进化树分析,此毒株与11株近5年在人和猪中流行的H1N1相似度高,HA的同源性达98.1%~99.7%,NA同源性98.6%~99.8%,与2009年暴发的A型H1N1流行株A/California/07/2009(H1N1)8个片段进行比对,核酸同源性高达99.1%~99.6%。     

Screening the Polymorphic Tri-nucleotide Repeat Microsatellites from the Genome of Maiwa Yak and Their Genetic Diversity Analysis

In order to study the genetic diversity and differentiation characteristics of the existing population of Maiwa yak and provide a theoretical basis for utilization in the future, a total of 9 466 tri-nucleotide repeats microsatellites loci were screened based on the release of genome of yaks by bioinformatics method. The tri-nucleotide repeats microsatellites were amplified by PCR using the genomic DNA of 191 Maiwa yaks as templates,and the polymorphic microsatellite loci were genotyped through polyacrylamide electrophoresis experiment. After the Hardy-Weinberg equilibrium test, 5 tri-nucleotide microsatellite loci were deviated from the Hardy-Weinberg equilibrium (P <0.05). 15 microsatellite loci were highly polymorphic (PIC >0.5), the mean observed heterozygosity (Ho),mean expected heterozygosity(He) and mean polymorphic information content(PIC) were 0.5041,0.8152 and 0.7831,respectively. Maiwa yak population exhibited no characteristics of differentiation by Structure 3.0 software analysis. Therefore, Maiwa yak had plentiful genetic polymorphism while no signs of genetic differentiation were observed within the population.     

微卫星分子标记的研究进展

微卫星是指以少数几个核苷酸(一般1～6个)为单位多次串联重复的DNA序列，是1974年Skinner在研究寄居蟹的卫星DNA时发现的。微卫星广泛均匀地分布在基因组上，其重复数和重复单位序列都是可变的，故多态信息含量大。但由于微卫星无位点特异性，无法确切定位。因此以微卫星核心序列为中心，两侧各加上1个侧翼序列，形成所谓的序列示踪微卫星位点(STMS)。由于侧翼序列在基因组中是单拷贝的，具有位点特异性，而微卫星本身又使STMS具有多态性，只需根据微卫星侧翼序列设计一对PCR引物，通过PCR反应从模板DNA中将该位点扩增出来，然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，溴乙锭或银染法显色进行研究。     

野猪ASIP基因的突变位点及其与毛色表型的相关性研究

 本试验旨在研究影响动物被毛颜色变化的功能基因ASIP在野猪群体里的变异及其与被毛表型之间的相关性。通过直接测序法搜寻ASIP基因编码区、5′ UTR、3′ UTR和部分内含子区域突变位点。结果表明：在ASIP基因的3′ UTR区域识别了一个T→C突变位点（ASIP.c 695 T→C）,而在其它区域没用发现。通过群体内多态性检测,7个毛色类型的野猪在此突变位点都是CC或CT基因型,而长白猪群全部是TT基因型。从这个结果得出具有不同毛色的野猪群体可能是由突变位点C等位基因引起,不能排除还有其它毛色功能基因参与野猪被毛的形成。研究为进一步了解野猪ASIP毛色功能基因在其群体内的遗传变异奠定了理论基础。     

第二十届美国蜜蜂研究会议论文选(一)

对美国和意大利的意大利蜂遗传多样性评估培育蜂王的数量减少以及潜在伴随遗传多样性的丢失可能导致蜜蜂近亲交配,并使蜜蜂对病虫害日益敏感。利用微卫星遗传标记对美国和意大利出售的意大利蜂的遗传多样性进行评估。从这两个国家的主要育王场的蜂群取工蜂样品。迄今为止,     

转外源基因(pGH)在猪染色体上整合状况

应用地高辛标记技术,对通过睾丸注射法制备的转基因猪进行荧光原位杂交,确定外源pGH(猪生长激素)基因在染色体上的整合位点及数目.选用睾丸注射法制备的140日龄转基因长白猪6头与同期同龄非转基因猪2头进行血细胞培养及荧光原位杂交.结果显示,外源基因已整合于染色体上,但在染色体上的整合位点具有随机性,而且不同的转基因猪阳性个体外源基因在染色体上的整合位点有差异,但集中分布于1、6、8、13号染色体上;非转基因猪染色体上无杂交信号;个体杂交信号数越多,其生长速度越快.     

SPAG6基因多态性对种公鸡精液品质和性发育相关性状的影响

本研究旨在筛选北京油鸡SPAG6基因的SNPs位点,探讨其与种公鸡精液品质和性发育相关性状之间的关系。选择89只35周龄北京油鸡种公鸡,采用质谱SNP技术进行基因分型,利用Phase软件和Haploview软件进行单倍型分析并构建线性模型,对单个位点、单倍型与精液品质和性发育相关性状进行关联分析。结果表明:SPAG6基因内含子区域共有5个SNPs,其中C29756T和T23041C与精液量、精子活率和精子畸形率显著相关(P0.05);不同单倍型组合与精液量、精子畸形率显著相关(P0.05);H4H4单倍型组合精液量显著高于H2H3和H3H3组合(P0.05),精子畸形率显著低于H2H3和H3H3等组合(P0.05)。综合分析,SPAG6基因是影响鸡精液品质的候选基因;其单个位点SNP突变C29756T、T23041C和H4H4单倍型组合可作为高精液品质鸡群选择的分子标记。     

Asia1型口蹄疫病毒含RSD受体识别位点感染性克隆的构建与病毒拯救

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不同宿主传代后产生含RSD和RDD受体识别基序的变异株,为了研究含RDD受体识别基序的FMDV在受体结合位点内1个氨基酸的变化是否影响感染性病毒子的产生,作者利用已构建的含RDD受体结合位点的FMDV Asia1/JS/China/05株的全长感染性cDNA克隆为骨架,采用融合PCR方法,构建了该毒株含RSD受体位点的全长cDNA克隆pFMDV-RSD。线性化的pFMDV-RSD重组质粒和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,56 h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光试验、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,结果证实该毒株细胞受体位点1个氨基酸的替换不影响活病毒的拯救。该试验为进一步研究含RSD受体结合位点FMDV的生物学特性奠定了基础。