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太空诱变玉米核雄性不育材料的cDNA-AFLP分析 总被引:4,自引:2,他引:4
利用cDNA-AFLP技术对太空诱变玉米核雄性不育材料的花药进行差异表达分析,并对差异片段进行回收、克隆和测序,结合半定量RT-PCR方法,分析差异片段在可育株和不育株的表达情况。利用16对引物共回收得到9个差异序列,其中2个为来自不育株的特有片段,7个为来自可育株的特有片段。序列分析发现,来自不育株的 2个EST序列未检测到同源性较高的序列。来自可育株的4个EST序列分别与水稻上推断的查尔酮合成酶、脂酰CoA脱氢酶、蛋白激酶PK12、甘氨酸脱羧酶具有较高的同源性。这些物质可能参与小孢子发育过程中的物质代谢、能量代谢及信号传导等。半定量RT-PCR分析表明,与查尔酮合成酶同源性较高的Z3片断在可育花药发育的早期有较高的表达。而与甘氨酸脱羧酶同源性较高的片断Z8在可育花药发育的中间阶段呈增量表达。这可能与花药发育过程有较高的能量和物质需求有关。 相似文献
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【目的】初步获知棉花NBS-LRR类基因的生物学意义,构建干扰载体。【方法】以抗枯萎病棉花中棉12号为材料,用霍格兰营养液培养至三叶期,进行枯萎病菌接菌诱导处理,以不接菌为对照。利用cDNA-AFLP技术筛选差异基因片段,在GenBank中进行序列同源性比对,找到抗枯萎病基因片段,该基因片段的序列与GenBank中报道的序列同源性达到72%。将此基因片段以正向和反向插入到pPZP35S,经限制性酶切和质粒PCR鉴定。【结果】已成功构建了干扰载体。采用农杆菌侵染法将干扰载体转入烟草中。【结论】为研究棉花NBS-LRR类基因的功能打下基础,为通过转基因技术深入研究该基因在棉花抗病机理创造条件。 相似文献
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cDNA-AFLP技术及在差异表达基因克隆上的应用 总被引:11,自引:0,他引:11
cDNA-AFLP技术是在AFLP技术基础上发展起来的主要用于研究基因差异的技术,具有高效可靠的优点,受到研究者的青睐,被广泛应用于包括植物在内的各类生物的基因表达的研究中。简要阐述了cDNA-AFLP技术的原理,重点讨论了操作过程中可能出现的问题和技术关键,并就该技术与其他差异表达技术进行了比较,以说明其在克隆差异表达基因上的优势,还简要列举了一些在抗病育种等领域的应用实例。 相似文献
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四种甘蓝雄性不育类型差异基因表达分析 总被引:2,自引:0,他引:2
通过cDNA-AFLP分析了4种甘蓝(Brassicaoleracea)雄性不育类型的花粉败育特异中断基因表达特点,并对不同特异表达类型分别选取代表性TDFs克隆测序。结果表明,表达差异在转录片段多态性上能反应出不同雄性不育类型在细胞学水平上的败育时期和特征差异,4种不育类型中萝卜胞质不育(OguCMS)与可育类型遗传距离最近。实验未检出萝卜胞质不育特异中断的TDFs,说明其特异中断基因数目较少,因此检测到这一类基因较为困难。三种代表黑芥胞质不育(NiCMS),隐性核不育(Ms-cr1)和显性核不育(Ms-cd1)特异中断表达的TDFs共计46条。序列分析结果表明,黑芥胞质不育,隐性核不育和显性核不育类型分别与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶,具RNA识别结构域(RRM)的蛋白,质膜类钙转运ATP酶基因表达受阻有关。 相似文献
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cDNA-AFLP(amplified fragment length polymorphism) is used to isolate genes differentially expressed in salt-stressed and unstressed wheat lines RH8706-49 and H8706-34 derived from a single seed,representing a salt-stress resistant (SR) and salt-stress sensitive(SS) line,respectively.About 88.1% cDNA fragment are expressed in all the four samples,11.9% are different between the samples.68 cDNA fragments were cloned,of which 35 were subject to sequence analysis.Database searches indicate that 11 cDNA fragment show high homology to known genes,which mainly include proteins related to ion transport,signal transduction and oxidative stress.The remaining 24 cDNA show no detectable homology to known genes,suggesting that they probably represent novel genes. 相似文献
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Chilling Tolerance of Cucumber During Germination is Related to Expression of Lysine Decarboxylase Gene 总被引:1,自引:0,他引:1
LU Ming-hui LI Xiao-ming CHEN Jin-feng CHEN Long-zheng QIAN Chun-tao 《中国农业科学(英文版)》2005,4(12):898-902
Using cDNA-AFLP technique, a specific fragment was isolated from cucumber cultivar Changchun mici possessing chilling tolerance induced at low temperature (15℃). This fragment, named cctr 132, could not be induced in the chilling sensitive cucumber cultivar Beijing jietou. After recovering the fragment, sequencing and translating, the results of blastx and blastp in GenBank of NCBI indicated that CCTR132 had 88.37% identities and 100% positives with Oryza sativa putative lysine decarboxylase-like protein respectively, and PGGXGTXXE, the putative conserved domain of lysine decarboxylase family, was detected from CCTR132, suggesting the cucumber chilling tolerance during germination is related to the expression of the lysine decarboxylase gene. 相似文献