SPA的实验室制备及标记技术

ＳＰＡ具有与ＩｇＧＦＣ段非特异性结合的生物学特性，这一特性使其在免疫学研究中有重要的作用，根据应用目的不同，ＳＰＡ制剂分为三类：菌体试剂、ＩｇＧ－ＳＰＡ、可溶性纯化ＳＰＡ。本文将介绍这三种试剂的实验室制备方法及ＳＰＡ的ＦＩＴＣ、ＨＲＰ、１２５Ｉ的标记技术。     

菘蓝根腐病菌毒素最适浓度的筛选及其对菘蓝幼苗可溶性蛋白的影响

［目的］为深入研究菘蓝对根腐病的抗性机制提供理论依据。［方法］采用不同浓度菘蓝根腐病菌毒素处理菘蓝幼苗，筛选最适处理浓度；对最适浓度毒素处理过的菘蓝幼苗的外部形态进行鉴定，并测定其可溶性蛋白的含量。［结果］稀释10、20倍毒素处理过的菘蓝幼苗在试验期间全部萎蔫死亡，稀释40、50倍毒素处理过的菘蓝幼苗在试验期间大部分无病变现象，稀释30倍毒素处理过的菘蓝幼苗病变现象明显，处理72 h后50%幼苗萎蔫死亡。经稀释30倍毒素处理的菘蓝幼苗可溶性蛋白的谱带大体相同，但也出现了个别特异性条带；经毒素处理的样品蛋白条带数多于对照，且染色较深。［结论］菘蓝根腐病菌毒素的筛选压力以稀释30倍最好。     

柑橘衰退病毒柚类分离物CP基因的克隆及原核表达分析

以来自湖北省的HB柚柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)分离物(CTV-HB1)为材料,利用RT-PCR技术对其CP基因进行克隆,序列分析结果表明:CTV-HB1与典型茎陷点分离物SY568和NUagA的核苷酸和推定氨基酸的序列相似性均在97%以上,而与CTV速衰分离物T36和弱毒分离物T385和T30的核苷酸和氨基酸序列相似性较低,均在95%以下。将CP基因片段连接到表达载体,转化大肠杆菌后诱导重组蛋白的表达。SDS-PAGE和Westen-blot分析结果表明,经IPTG诱导后产生了预期大小的重组蛋白,该蛋白可与CTV-L5提纯病毒制备的多克隆抗体发生特异性免疫反应。     

Pt100铂热电阻在雨花茶精揉机温度控制中的应用

从铂热电阻非平衡电桥测温原理出发,分析了雨花茶精揉机揉锅温度测量与控制系统在温度信号采集过程中引入的非线性误差,提出了以Pt100铂热电阻和AT89S52单片机为核心的软件非线性补偿方案,给出了系统硬件结构图和软件设计流程图。实验结果表明该方案简便有效,能够提高温度控制系统性能。     

Study on Proliferation and Apoptosis of EBL Cells Induced by P48 Protein of Mycoplasma bovis

The aim of this study was to investigate the effect of P48 protein on proliferation and apoptosis of embryonic bovine lung (EBL) cells.In this study,samples which co-incubated with P48 protein and EBL cells in different concentrations at different time points were collected,the proliferation rate of the cells was detected by MTT method,and the changes in the nuclear morphology of EBL cells were observed by DAPI staining method.Meanwhile,flow cytometry was used to detect the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein.Real-time quantitative PCR was used to detect the changes in mRNA level of apoptotic marker genes,and Western blotting tested the Bax and Beclin-1 protein expressions.The results showed that under the condition of 72 h and 10 μg/mL of protein concentration treatment,P48 extremely significantly inhibited EBL cells proliferation (P<0.01),while 0.1 and 0.5 μg/mL protein concentration had no inhibitory effect (P>0.05).The nuclear morphology showed no significant change after protein induction for 12 h,but wrinkled and condensed at 24 h.The nucleus was fragmented,and a sprouted apoptotic body was appeared at 48 and 72 h.Apoptosis related genes expression showed no obvious increase at 2 and 12 h at mRNA level,but gradually increased at 24,48 and 72 h,and it showed a time-dependent manner.Accordingly,the expression of apoptosis marker proteins Bax and Beclin-1 significantly increased.Flow cytometry analysis showed that the apoptosis rate of EBL cells induced by P48 protein was 48.44%.In conclusion,P48 recombinant protein of Mycoplasmas bovis inhibited the proliferation of EBL cells and promoted their apoptosis,which provided reference for revealing the pathogenic mechanism of Mycoplasmas bovis.     

饲粮中添加白藜芦醇对“杜×长×大”猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白表达的影响

试验旨在研究饲粮中添加白藜芦醇(resveratrol,RES)对"杜×长×大"猪空肠抗氧化酶活性及抗氧化基因指标和紧密连接蛋白相关基因表达水平的影响。试验选用12头体重约为65 kg的育肥猪分为2组,每组6头。对照组育肥猪饲喂基础饲粮,试验组育肥猪饲喂在基础饲粮中添加400 mg/kg的RES的饲粮,试验期41 d。结果表明,与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg的RES显著提高了育肥猪空肠过氧化氢酶(CAT)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.05),显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化基因铜/锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPx-1)和谷胱甘肽过氧化物酶-4 (GPx-4)活性(P<0.05);显著提高育肥猪空肠抗氧化酶活相关基因CAT、T-SOD和GSH-Px的表达水平(P<0.05),显著降低MDA的表达水平(P<0.05);显著提高育肥猪空肠紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1 (Claudin-1)和链接黏附分子A (JAM-A)的表达水平(P<0.05)。研究表明,饲粮添加400 mg/kg的RES能够显著提高育肥猪空肠抗氧化能力及紧密连接蛋白的表达,改善动物肠道健康。     

抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256 000。IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。     

日粮组成对牛奶中乳成分合成与调控机制影响的研究

牛奶中乳蛋白和乳脂肪含量的高低直接关系到牛奶的品质和风味。牛奶中乳蛋白主要可以分为酪蛋白和乳清蛋白两种类型,其合成代谢过程均受到mTOR信号分子通路、JAK-STAT信号分子通路、GCN2-eIF2a信号分子通路的影响。牛奶中乳脂肪主要为三酰基甘油酯、磷脂等,对于牛奶的营养和风味均有重要影响,其受到脂肪酸相关酶ACACA、FAS、SCD1的调控。饲料营养是影响牛奶中乳蛋白和乳脂肪的关键因素之一,包括精粗饲料配比及饲料添加剂的应用等方面。本文对牛奶中乳蛋白和乳脂肪的合成调控机理,及日粮组成对其的影响机制进行阐述,为改善乳品质提供参考。     

9株绵羊肺炎支原体内蒙古分离株P113基因克隆及蛋白序列分析

[目的]克隆绵羊肺炎支原体内蒙古分离株P113基因,比对、分析不同菌株P113蛋白序列,为研究绵羊肺炎支原体P113蛋白的生物学功能提供参考。[方法]设计绵羊肺炎支原体P113基因特异性引物,采用PCR方法扩增9株绵羊肺炎支原体内蒙古分离株的P113基因片段;对获得的9株绵羊肺炎支原体P113基因片段进行测序分析,将DNA序列翻译为氨基酸序列,对不同菌株的P113氨基酸序列进行比对。[结果]不同分离株P113基因片段扩增产物大小不同。氨基酸序列分析显示,C末端序列重复区域长度存在差异,以KKAEGA（S）QNQG为主要重复序列单元。不同菌株重复序列单元数量不同,NM01-MO株和CK-MO株的重复序列单元数量最多,为16个;LK-MO株重复序列单元数量最少,为3个;多数菌株之间重复序列单元数量差异较大。[结论]绵羊肺炎支原体内蒙古分离株P113氨基酸序列的C末端重复序列单元数量不同,这些不同数量的重复序列影响P113蛋白结构,进而可能影响其生物学功能。     

刺槐叶蛋白的营养价值评价

在对3种刺槐叶蛋白的氨基酸组成及含量进行分析的基础上,应用模糊识别法和氨基酸比值系数法,对其营养价值进行了全面评价和比较.结果表明:3种刺槐叶蛋白中均含有18种氨基酸,种类齐全,含量也很丰富,属完全蛋白质;其总氨基酸含量为63.97%~96.85%,必需氨基酸占总氨基酸的42%~44%,必需氨基酸与非必需氨基酸的比例为73%~80%,第1限制性氨基酸为色氨酸或含硫氨基酸,符合FAO/WHO提出的理想蛋白质模式;刺槐叶蛋白还含有丰富的呈味氨基酸,占总氨基酸的34%~38%,具有较好的适口性;刺槐叶蛋白的贴近度为0.64~0.89,比较符合婴幼儿及少年食用;刺槐叶蛋白质的营养价值与紫花苜蓿叶蛋白相当,刺槐叶蛋白是一种值得开发利用的优质植物蛋白.