毛细管电泳技术及其在兽药残留分析中的应用

随着人们生活水平的提高和养殖业的发展,兽药残留对食品安全的危害日益受到人们的关注.中国作为畜禽产品重要出口国,将在相当长的一段时间内必须面对兽药残留所形成的贸易壁垒.因此,必须加强兽药残留检测技术的研究.文章就毛细管电泳技术及其在兽药残留分析中的应用做一综述.     

兽药二维码印刷及识读效率的研究

从国家兽药产品追溯系统中兽药二维码着手,针对兽药二维码印刷及识读效率方面的问题,对兽药二维码印刷方式、规格以及编码方式进行了分析与研究,提出了编码规则选择的依据、印刷规格的建议及其与识读效率间的关系,以期为兽药生产企业在实际应用中提高兽药二维码识读效率提供参考。     

Canine Haematopoietic Chimerism Analyses by Semiquantitative Fluorescence Detection of Variable Number of Tandem Repeat Polymorphism

Canine models are successfully applied to the study of haematopoietic stem cell transplantation (HSCT). Monitoring of haematopoietic donor/recipient chimerism is of major significance in detecting and quantifying engraftment or graft rejection of the donor-derived haematopoietic cells after transplantation. Radioactive analyses of polymorphic microsatellite markers are commonly used for chimerism analyses. We describe an improved, non-isotopic method that is based on the analysis of microsatellite markers in donor and recipient cells using capillary electrophoresis and fluorescence detection. Artificial mixtures of donor and recipient DNA that were generated from peripheral blood mononuclear cells from dog leukocyte antigen-identical siblings were used to analyse the sensitivity of the assay. DNA from dogs that had received HSCT were also analysed in order to demonstrate the feasibility of the method in vivo. For chimerism analyses, six different microsatellite loci were systematically amplified using fluorescent PCR primer. The fluorescent polymerase chain reaction products were separated by capillary electrophoresis using POP4 on a 310 ABI Prism Genetic Analyzer. After electrophoresis, fluorescence signals were automatically sized and quantified using GeneScan software. The method described provides an accurate assessment of haematopoietic chimerism in the canine model with significantly reduced hands-on time compared to conventional gel electrophoresis.     

南农选系草地早熟禾POD同工酶的酶谱特征及与其它品种的差异

利用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳技术对南农选系及16 个当前生产上应用较多的草地早熟禾品种的过氧化物酶同工酶进行了研究。结果表明,供试材料共在18 个位点表现酶带。南农选系表现出13条酶带,除与其它16个品种所共有的6 条主酶带外,还出现了其特有的7 条酶带。对不同品种POD同工酶酶谱信息进行相异性类平均聚类分析,17 个供试品种(系)聚为3 类,其中南农选系、美国品种“Merit”及其它15个品种分别各成一类。据此推测,南农选系与其它供试品种的亲缘关系相对较远,为一个相对独立的品系。     

家蚕孤雌生殖相关蛋白PGL的鉴定与生物信息学分析

应用二维凝胶电泳(2DE)技术分离有性生殖蚕卵与孤雌生殖蚕卵的差异蛋白,通过基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOFMS)分析获得大量小肽的序列特征。与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,确定一个在家蚕孤雌生殖过程中表达量显著上调的差异蛋白为磷脂酰肌醇蛋白聚糖(phosphatidylinositol glycan,PGL)。为了探讨PGL蛋白在家蚕孤雌生殖发生中的作用,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术扩增目的基因5′端片段,获得PGL蛋白基因的全长cDNA,生物信息学分析显示该基因cDNA全长1038bp,编码345个氨基酸,其编码蛋白理论分子质量为39.516kD,等电点为5.845,包含1个保守的GPI8结构域,信号肽概率为0.997,可能为分泌型蛋白,预测蛋白功能域包含酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化、N糖基化、蛋白激酶C磷酸化等多个功能位点。依据PGL蛋白的理化性质、结构功能推测其有可能在不同程度上通过细胞信号转导途径参与了家蚕孤雌生殖发生过程并发挥重要作用。     

Milk Protein Polymorphism in Kangayam Cattle

This paper reports the milk protein polymorphism, the allele frequencies of variants and the possible linkages among various combinations of milk protein phenotypes in the Kangayam cattle of south India. Milk samples from 156 Kangayam cows were typed by starch gel and polyacrylamide gel electrophoresis for caseins and whey proteins, respectively. All the four milk protein components studied, _s1-casein, -casein, -lactoglobulin and -lactalbumin, exhibited polymorphism with high allele frequencies of 0.9231±0.0151 for _s1-casein C, 0.9263±0.0148 for -casein A, 0.9135±0.0159 for -lactoglobulin B and a relatively high frequency of 0.6218±0.0275 for -lactalbumin A. The mean heterozygosity estimated over all the four milk protein loci was 0.2420. Genetic equilibrium was observed among all the loci studied, except -lactalbumin. Linkage analysis confirmed the non-independence between _s1- and -caseins and between caseins and -lactalbumin phenotypes.     

基于双向电泳技术研究湖羊初乳和常乳乳蛋白质组差异

试验旨在分析绵羊初乳和常乳乳蛋白质组的差异,揭示绵羊不同泌乳阶段的乳蛋白质组特征。选用6只胎次相同、预产期相近的湖羊母羊,分别采集分娩后第1、3、7天的初乳和第14、28、56天的常乳,每个时间点采集6份奶样并等体积混合,离心弃去乳脂肪,采用双向电泳（2-DE）技术对初乳和常乳的脱脂乳蛋白进行比较分析。结果发现,初乳中乳蛋白含量较高,且随着泌乳期的延伸,乳蛋白含量降低。以第1天乳蛋白2-DE图谱为参照,第3天检测到38个差异蛋白点,其中有20个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第3天图谱中,其余17个蛋白点呈现表达量的差异;第7天检测到35个差异蛋白点,其中有19个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第7天图谱中,其余15个蛋白点呈现表达量的差异;第14天检测到34个差异蛋白点,其中有11个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第14天图谱中,其余22个蛋白点呈现表达量的差异;第28天检测到38个差异蛋白点,其中有28个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第28天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异;第56天检测到36个差异蛋白点,其中有26个蛋白点仅存在于第1天图谱中,有1个蛋白点仅存在于第56天图谱中,其余9个蛋白点呈现表达量的差异。综上,共检测出44个差异表达的蛋白点,其中有8个蛋白点仅存在于第1天图谱中,而这些蛋白主要涉及免疫活性功能。     

牦牛与黄牛肌肉差异蛋白质组及生物信息学分析

为了建立和优化牦牛肌肉组织蛋白质双向电泳(2DE)体系,结合生物信息学方法进行牦牛、黄牛差异蛋白质通路分析。以牦牛背最长肌为实验材料,对不同裂解液成分、等电聚焦程序、染色方法进行研究,在最优2DE体系参数下,对比分析牦牛、黄牛差异倍数大于2倍且达到显著水平(P0.05)的19个蛋白质,通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间(MALDI-TOF/TOF)质谱进行鉴定,并对鉴定结果进行了基因本体(GO)注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果表明,裂解液II、渐进式快速升压程序、改良的考染法获得的蛋白点匹配率高,牦牛、黄牛2DE图谱蛋白点平均个数分别为479个和553个。通过比较牦牛和黄牛背最长肌中差异蛋白质可知,所得到的差异蛋白质按照功能可分为代谢酶、结构蛋白和应激蛋白3大类。通过KEGG分析可知,牦牛、黄牛差异蛋白质主要集中在细胞代谢过程、碳水化合物代谢通路、遗传信息通路和能量代谢通路中,研究结果可为解释牦牛和黄牛肌肉生物学特性和肉品质差异提供理论依据。     

烟草叶片总RNA提取方法的比较

[目的]研究提取烟草叶片总RNA的最佳方法。[方法]利用CTAB法、酚-SDS法和Trizol法等从烟草叶片中提取总RNA。[结果]通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测,结果表明,CTAB法、Trizol法、RNAiso法均能得到质量较高的RNA。RNAiso法提取RNA操作步骤简单,所提取的RNA纯度好、质量高且无污染,可以进行下一步的分子生物学研究。[结论]RNAiso法最适用于烟草叶片总RNA的提取。     

暗纹东方鲀几种组织中可培养细菌的组成分析

采用16S rDNA特征序列PCR-DGGE法,分析了不同饵料饲养的暗纹东方鲀的表皮、肠道和河鲀毒素累积组织(肝和卵巢)中可培养细菌的群落组成.根据分子系统发育分析,共鉴定出45种可培养细菌,在这些细菌中,以变形细菌的gamma亚群占多数,其它分别隶属于低GC含量革兰氏阳性菌和高GC含量革兰氏阳性菌.摄食不同饵料的暗纹东方鲀,其肠道、表皮或河鲀毒素累积组织中的细菌菌落组成是不同的,但不管是摄食人工配合饲料或天然饵料,在暗纹东方鲀的肠道、表皮或河鲀毒素累积组织中,均发现已有报道的可产河鲀毒素的细菌类群,表明饵料来源对暗纹东方鲀的河鲀毒素产生不是必需的.