猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

根据GenBank上发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,针对TGEVN基因全序列设计合成了一对引物,以TGEV疫苗株为模板,建立了检测TGEV的RT-PCR方法。应用该方法对TGEV疫苗株RNA进行扩增,获得与预期大小相符,长度为1168bp的特异性目的片段;测序结果与已报道的TGEV不同毒株的序列同源性达到95%～97%;敏感性测定该RT-PCR可扩增到18pg的TGEV-N-cDNA;对猪传染性胃肠炎(TGE)的病料进行RT-PCR鉴定,可检测出TGEVN基因片段。结果表明建立的RT-PCR方法对TGEV的检测敏感性高、特异性强,可用于TGEV感染的诊断和流行病学调查。     

Direct Costs of Bovine Spongiform Encephalopathy Control Measures in Germany

On 26 November 2000, the first autochthonous case of bovine spongiform encephalopathy (BSE) was detected in Germany. Since then, a total of 413 BSE cases have been confirmed, resulting in the culling and destruction of 17 313 heads of cattle. In view of the possible risks for human and animal health, Germany has adopted EU regulations along with some additional requirements concerning active surveillance and response measures after detecting a BSE‐positive animal. In this study, we used a stochastic model to estimate the costs incurred by the ensuing legislative amendments responding to BSE between November 2000 and December 2010. The total costs were estimated to range between 1847 and 2094 million Euros. They peaked in 2001 (about 394 million Euros) and declined since. About 54% of the costs (approximately 1000 million Euros) were incurred by the extension of the feed ban for animal protein to all farmed livestock. Active surveillance accounted for 21% (405 million Euros), the incineration of animal protein for 13% (249 million Euros) and the removal of specified risk material for 11% (225 million Euros). Only 1% of the costs was related to response measures after detecting a BSE‐positive animal, including indemnity payments for culled cattle and confiscated carcasses at the slaughterhouse.     

猪传染性胃肠炎病毒四川株的分离鉴定及其S基因的克隆和序列分析

通过核酸类型试验、脂溶性敏感试验，鉴定了1株分离自四川某猪场腹泻病猪粪便的猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）。经电子显微镜观察，可以看到大小约90nm的病毒粒子；通过中和试验，将病毒细胞液与TGEV超免疫血清进行中和反应，显示较高的中和抗体效价。根据GenBank中的TGEV序列，设计了1对包含TGEVS基因1760bp部分片段的引物，经RT-PCR扩增获得了1条约1．8kb的条带，通过低熔点琼脂糖凝胶纯化回收该片段后，将其连接在pMD18-T载体上，转化DH5a大肠埃希氏菌。用双酶切和PCR对重组质粒进行鉴定并测序，经用DNAStar软件进行同源性分析和多重序列比较，TGEV四川株（SC-A）与国外报道的部分TGEV分离株具有高达98．8％的同源性。     

检测猪传染性胃肠炎病毒Taq Man荧光定量RT-PCR方法的建立与初步应用

据GenBank登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因的保守区序列设计合成了引物和探针,对荧光定量RT-PCR的反应条件进行了优化,建立了一种特异、灵敏、快速的TaqMan荧光定量RT-PCR方法来检测TGEV。与国外进口的An imal Genetics公司生产TGEV抗原快速检测试剂盒进行比较,符合率达到100%;与常规RT-PCR检测方法相比,灵敏度高100倍。用该方法对辽宁、山东、福建等地的送检疑似病料进行了检测,结果阳性率为24%。试验证明,所建立方法适用于猪传染性胃肠炎病毒的分子诊断、流行病学调查等相关研究。     

基于网络药理学探究乌梅散加减方治疗猪传染性胃肠炎的作用机制

【目的】 借助网络药理学手段探究乌梅散加减方治疗猪传染性胃肠炎（TGE）的作用机制。【方法】 利用中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）、Swiss TargetPrediction获取乌梅散加减方的活性成分与作用靶点，应用公共比较毒理基因组学数据库（CTD）获取TGE的相关靶点，使用STRING数据库绘制乌梅散加减方与TGE交集靶点的蛋白互作（PPI）网络图，利用DAVID对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析，探究乌梅散加减方治疗TGE的作用机制。【结果】 从乌梅散加减方中共筛选到槲皮素、山柰酚、芒柄花素等125种活性成分和JUN原癌基因（JUN）、肿瘤坏死因子（TNF）、信号传导与转录激活因子3（STAT3）等58个作用靶点。GO功能富集分析显示，共得到生物过程138个条目，涉及免疫反应、血管内皮因子生成、RNA聚合酶Ⅱ启动子对pri-miRNA转录的正调控等；细胞组分13个条目，涉及胞外区、细胞外空间、膜筏等；分子功能32个条目，涉及细胞因子活性、生长因子活性、白细胞介素2（IL2）受体活性等。KEGG通路富集分析显示，共得到135条信号通路，其中IL17信号通路、Th17细胞分化、TNF信号通路、HIF-1信号通路是乌梅散加减方治疗TGE的主要信号通路。【结论】 乌梅散加减方主要通过槲皮素、山柰酚、芒柄花素等多个活性成分调控JUN、TNF、STAT3等靶点，通过参与IL17信号通路、Th17细胞分化等治疗TGE。