减毒鸡白痢沙门菌△aroA株的构建与致病性分析

以鸡白痢沙门氏菌c79-3强毒株为亲本,通过λ-red同源重组系统构建鸡白痢沙门菌aroA基因缺失株△aroA,并进行了测序验证和毒力试验。结果表明,aroA基因缺失株的生长速度较亲本株缓慢,且该缺失株具有良好的遗传稳定性;相比野生菌株,aroA基因缺失株的毒力发生了下降,雏鸡攻毒死亡率较亲本株低。本研究获得的减毒鸡白痢沙门氏菌aroA基因缺失株△aroA,为进一步研究鸡白痢沙门氏菌aroA基因的功能和后续减毒活疫苗开发奠定了基础。     

鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌基因组消减文库的构建

为了解鸡白痢沙门氏菌与鸡伤寒沙门氏菌的基因组差别,筛选鸡白痢沙门氏菌特有的序列,利用SSH对鸡白痢沙门氏菌C79-13（实验方）与鸡伤寒沙门氏菌Sg9（驱动方）基因组进行了比较。选择四碱基内切酶Rsa I将C79-13与Sg9基因组DNA酶切,酶切的C79-13基因组DNA分成两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR ,得到消减混合物, 将其与PCR?2.1克隆载体连接,转化感受态E.coli DH5α建立消减文库。结果共获得400个阳性克隆;筛选240个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100～2000 bp大小的片段。差异DNA消减文库的构建为进一步筛选、克隆鸡白痢沙门氏菌特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。     

饲喂乳杆菌雏鸡对鸡白痢菌感染的影响

雏鸡饲喂乳杆菌培养物后,人工感染鸡白痢沙门氏菌,观察雏鸡盲肠主要正常菌群定植及雏鸡抵抗力情况。研究结果表明：人工感染鸡白痢沙门氏菌后,饲喂乳杆菌组同未饲喂乳杆菌组相比,雏鸡盲肠内正常菌群有一定变化,大肠杆菌数明显降低（Ｐ＜００１）,双歧杆菌和乳杆菌数明显增加（Ｐ＜００１）,而且死亡率降低２０％。     

重组鸡β-防御素6基因的表达和生物学特性的研究

目的为开发中药防治畜禽沙门氏菌病,根据沙门氏菌病中兽医辩证进行中药组方,为今后畜禽养殖减抗限抗的替代疗法提供参考。方法采用倍比稀释法检测复方板蓝根口服液对鸡白痢沙门氏菌的最小抑菌质量浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),扫描电镜观察菌体形态变化。试验选取150羽1日龄雏鸡,随机取出30羽做空白组,其余120羽人工感染鸡白痢沙门氏菌,制备雏鸡感染模型。将感染雏鸡随机分为模型组、中药治疗组、西药治疗组和中药预防组,每组30羽。观察雏鸡的发病率及死亡率。于治疗后1、3和5 d检测血清中IL-1β和TNF-α的含量;实时荧光PCR检测禽β-防御素6 (avian beta-defensin 6,AvBD6) 和鸡Toll样受体15 (chicken toll-like receptor 15,ChTLR15) 在雏鸡小肠中的转录水平。结果体外试验结果显示：MIC和MBC分别为62.5和125 mg/mL;扫描电镜下可见菌体出现溢缩,断裂形成许多残体,形状不规则。中药预防组可降低雏鸡的发病率及死亡率。与模型组相比,中药预防组和中药治疗组均可降低IL-1β和TNF-α含量。而ChTLR15和AvBD6在感染初期表达量高,治疗后期趋于正常。结论复方板蓝根口服液对鸡白痢沙门氏菌有明显的抑制作用,其杀菌机制是通过改变菌体的形态结构使细菌丧失活性。试验证实复方板蓝根口服液可有效预防雏鸡沙门氏菌感染,并能有效降低体内炎性因子水平,减轻炎症反应。     

肉鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定

2009年5月,北京郊区某肉鸡养殖户的2 000只7日龄雏鸡出现拉白色稀粪,肝脏有黄色结节等症状和病变的疾病。为探索该病病因及制定有效防治措施,对病鸡样品进行了细菌学检验。通过细菌分离、生化试验、PCR及16 S rRNA基因测序鉴定出1株鸡白痢沙门菌。该分离株感染试验鸡能复制出与其临床表现一致的病例并能引起死亡。表明鸡白痢沙门菌是危害北京郊区该养殖户肉鸡的病原。     

头孢噻呋对实验性感染鸡白痢沙门氏菌病的药效学研究

研究了头孢噻呋对实验性感染鸡白痢沙门氏菌的防治效果。结果显示,头孢噻呋体内疗效良好,治疗组与预防组的治愈率、有效率、相对增重率均不同程度高于感染对照组（P〈0.05或P〈0.01）;头孢噻呋的治疗效果高剂量组与中剂量组无显著差异（P〉0．05）,高剂量组与低剂量组差异显著（P〈0．05）;头孢噻呋的中剂量组与头孢曲松、氨苄西林组的疗效相比均差异显著（P〈0．05或P〈0．01）。实验结果表明,头孢噻呋按0．1mg／只的剂量肌肉注射,每日一次,可对鸡白痢沙门氏菌病起到有效的防治效果。     

Inductive expression of the NOD1 signalling pathway in chickens infected with Salmonella pullorum

1. The aim of this study was to describe the role of Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1 (NOD1) receptor signalling in chicken.

2. Tissue-specific expression analysis of NOD1, receptor-interacting serine-threonine kinase 2 (RIPK2), nuclear factor kappa B (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase 11 (MAPK11 or p38) by quantitative real-time PCR (qRT-PCR) revealed their wide distribution in various organs and tissues.

3. Salmonella pullorum infection activated NOD1 receptor signalling in vivo and in vitro, resulting in significant induction of downstream signalling molecules RIPK2, NF-κB/p65, MAPK11/p38 and the effector molecules IL-1b and IL-8.

4. Activation of NOD1 by its agonist bacterial γ-D-glutamyl-meso-diaminopimelic acid (iE-DAP) in HD11 cells induced the adapter molecular RIPK2 and activated the NF-κB/p65 and MAPK11/p38 pathways, resulting in an increase in IL-8 but not IL-1β. Additionally, inhibition of NOD1 using NOD1-shRNA resulted in downregulation of RIPK2, MAPK11 and IL-8, while NF-κB/p65 and IL-1β were unaltered.

5. These results highlight the important role of NOD1 receptors in eliciting the innate immune response following pathogenic invasion in chicken.     

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同,设计和合成了等位基因特异性PCR引物,建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法,并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示,该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌,检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定,鉴定出33株鸡白痢沙门菌,符合率为94．3％。表明,建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。