上海PMWS并发PRRS自然病例的病理组织学观察

对上海5例5～13周龄断奶仔猪多器官衰竭综合征（PMWS）并发猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）自然病例进行了病理组织学观察。结果：5例病猪均出现坏死性淋巴结炎、间质性肺炎以及不同程度的坏死性脾炎、间质性肾炎和肝炎。2例病猪出现心肌炎，表现为心肌纤维断裂、溶解和心肌间质中淋巴细胞局灶性浸润。2例病猪出现脑炎，在大脑白质区出现神经胶质细胞结节。     

2009-2010年云南部分猪场猪主要传染病血清流行病调查

为了探查2009-2010年云南部分猪场对猪主要传染病疫苗接种后的免疫效果,本试验主要通过ELISA方法对样品进行血清流行病调查。结果表明,猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)抗体阳性率为84.33%(1211/1436);猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体阳性率为74.84%(803/1073);猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)抗体阳性率为0.00%(0/80);猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)抗体阳性率为62.26%(287/461);猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)抗体阳性率为54.25%(83/153);日本乙型脑炎抗体阳性率为63.33%(76/120)。提高PRRSV、PRV、PPV和乙脑疫苗的使用效果是云南省内猪场解决母猪流产的有效途径。     

猪捷申病毒与猪圆环病毒2型双重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立可同时检测猪捷申病毒（PTV）与猪圆环病毒2型（PCV2）的双重PCR方法,本研究根据GenBank登录的相关病毒基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上2种病毒的PCR诊断方法,扩增片段长度分别为187bp（PTV）、120bp（PCV2）。通过实验证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性,对PTV、PCV2核酸检测最低浓度分别为2．8×10^-2ng和6．6×10^-3ng。应用该方法对43份临床样品进行检测发现,PTV阳性率为23％,PCV2阳性率为38％,PTV与PCV2共感染率为16％。该方法的成功建立,为快速高效地检测以上2种病毒提供有力手段。     

Regulatory effect of Panax notoginseng saponins on the oxidative stress and histone acetylation induced by porcine circovirus type 2

Porcine circovirus type 2 (PCV2) exists widely in swine populations worldwide, and healthy PCV2 virus carriers have enhanced the severity of the infection, which is becoming more difficult to control. This study investigated the regulatory effect of Panax notoginseng saponins (PNS) on the oxidative stress and histone acetylation modification induced by PCV2 in vitro and in mice. In vitro, PNS significantly increased the scavenging capacities of superoxide anion radicals (O₂^•-) and hydroxyl radicals (^•OH) and reduced the content of hydrogen peroxide (H₂O₂) induced by PCV2 in porcine alveolar macrophages (3D4/2). In addition, PNS decreased the protein expression level of histone H4 acetylation (Ac-H4) by increasing the activity of histone deacetylase (HDAC) in PCV2-infected 3D4/2 cells. In vivo, PNS enhanced the scavenging capacities of ^•OH and O₂^•− and reduced the content of H₂O₂ in the spleens of PCV2-infected mice. PNS also reduced the protein expression level of histone H3 acetylation (Ac-H3) by reducing the activity of histone acetylase (HAT) and increasing the activity of HDAC in the spleens of PCV2-infected mice. PCV2 infection activated oxidative stress and histone acetylation in vitro and in mice, but PNS ameliorated this oxidative stress. The research can provide experimental basis for exploring the antioxidant effect and the regulation of histone acetylation of PNS on PCV2-infected 3D4/2 cells and mice in vitro and in vivo, and provide new ideas for the treatment of PCV2 infection.     

抗猪输血传播病毒1型Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为制备抗猪输血传播病毒1型(TTV1) Cap蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用PCR法扩增TTV1ORF1 (1501nt～2475nt)编码重组Cap蛋白的C末端截短序列,将PCR产物克隆于pGEX-6P-1载体中,并在大肠杆菌Rosetta (DE3)菌株中诱导表达,获得含GST标签的重组蛋白(rCap),经SDS-PAGE和western blot鉴定表明rCap约为64.0.ku,以包涵体形式存在.用纯化的rCap免疫BALB/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术获得8株稳定分泌抗rCap蛋白的杂交瘤细胞株,MAb亚类均为IgGl/κ型;western blot鉴定表明有7株MAbs与rCap产生特异性反应,另1株MAb呈阴性.为验证8株MAbs与真核表达的Cap蛋白的免疫反应性,将全长与截短的TTV1ORF1基因片段克隆于pcDNA3.1载体,转染293T细胞进行蛋白瞬时表达,采用免疫过氧化物酶单层细胞染色法检测表明,这8株MAbs均能够与瞬时表达的全长rCap产生特异性反应,其中6株与截短表达的rCap反应.本研究表达的rCap蛋白及制备的MAbs,为该病毒检测方法的建立及抗原表位的鉴定奠定了基础.     

恩诺沙星在猪组织中残留消除规律研究

在常规饲养条件下,对健康猪按2.5 mg/kg体重的剂量肌肉注射2.5%恩诺沙星注射液,每日2次,连续注射3 d.停药后第2、4、6、8、10、12、14天分别屠宰4头猪.分别采取每头猪的肌肉(注射部位)、脂肪(腹脂)、肝和肾脏等4种组织,用高效液相色谱法进行残留量测定.结果表明:残留在肌肉、脂肪组织中的药物消除较快,第8天总残留量(恩诺沙星 环丙沙星)已下降至检测限(20μg/kg)以下;肝和肾脏组织中的药物消除缓慢,第14天测得猪肾中药物总残留量为40μg/kg.     

联合肌注猪IL2真核质粒对PPV VP2-PCV2 ORF2核酸疫苗免疫效果的影响

将猪IL2基因和PPV VP2基因、PCV2 ORF2截短基因克隆至真核表达载体pCI-neo,构建了重组质粒pCI-ORF2-VP2和pCI-IL2,用脂质体介导法将pCI-ORF2-VP2质粒转染PK15细胞,采用间接免疫荧光法检测在体外的表达情况。并以小鼠为动物模型,将pCI-IL2和pCI-ORF2-VP2质粒联合肌注免疫小鼠,相同剂量免疫2次,间隔2周,同时设立pCI-ORF2-VP2、pCI空载体、猪细小灭活苗、圆环亚单位苗对照,检测免疫小鼠脾脏淋巴细胞的转化功能,外周血T淋巴细胞亚群的动态变化及血清抗体的滴度。结果显示,pCI-ORF2-VP2在PK15细胞中能正常表达,联合免疫组在第28天能够检测到PPV和PCV2抗体,第21~42天诱导淋巴细胞转化和CD4+、CD8+细胞的数量高于或显著高于pCI-ORF2-VP2质粒组。结果表明,猪IL2质粒联合肌注可以提高VP2/ORF2核酸疫苗的免疫效果。     

表达猪生长激素基因的重组腺病毒的构建及对猪生长的促进效果观察

利用复制缺陷型重组腺病毒作为基因表达载体,将猪生长激素（pGH）基因直接转导到猪体内细胞,研究猪生长激素基因在猪体内的促生长作用.用同源重组的方法,构建含pGH基因的重组腺病毒（Ad-pGH）.将其感染293细胞和PK-15细胞,均可检测到pGH.用1 mL此重组腺病毒（1010TCID50）一次性肌肉注射60日龄的杂交长白猪.结果表明,试验组的猪平均增重比对照组的猪增加37%（注射后第4周）和19%（注射后第6周）;饲料报酬提高28%（注射后第4周）和18%（注射后第6周）.试验结果证明,由重组腺病毒表达的pGH具有生物学活性,在猪体内起到明显的促进生长的作用.重组腺病毒介导的pGH基因在猪体内的表达可维持约4周.     

环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验

利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法.该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45 min即可完成反应.最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性.以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果.通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR.     

基于猪丁型冠状病毒重组M蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用

猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)是近年新发现的一种猪肠道病原体,主要感染仔猪并引起仔猪腹泻甚至死亡,针对该病建立快速、准确的血清学检测方法尤为重要.本研究以PDCoVHNZK-04毒株为模板扩增M基因并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,构建了重组质粒pET-32a-P...