棉花肉桂醇脱氢酶基因GhCAD6的克隆及正义、反义与RNAi干扰载体的构建

肉桂醇脱氢酶(CAD)催化木质素单体合成的最后一步反应,将肉桂醛还原生成相应的肉桂醇.采用PCR方法从棉花中克隆了GhCAD6基因1 569 bp的基因组序列,序列分析表明GhCAD6基因由5个外显子和4个内含子组成.为了研究GhCAD6基因的功能,构建由棉纤维组织特异性启动子E6驱动的GhCAD6基因正义、反义表达载体;同时克隆了GhCAD6基因的一段417 bp高度保守的NBD区序列,构建了GhCAD6基因的RNAi干扰载体,并将上述载体转入农杆菌菌株LBA4404中.为通过转基因技术深入研究GhCAD6基因在棉纤维发育和木质素代谢途径中的作用创造条件.     

甜菜固态发酵生产酒精的条件优化

本文对甜菜发酵生产酒精的条件进行了研究,采用了固态发酵的方法,对发酵条件进行优化,实验结果表明编号为1308-1的南阳混合酿酒酵母菌菌种发酵效果最好。发酵的最佳条件是先对发酵的培养基灭菌,发酵液pH控制在5~5.5之间,接种量为15 ml,发酵时间为48 h,在此条件下,残糖含量最低,酒精浓度最高。     

酒精试验对水牛乳品质评价的可应用性探讨

通过测定水牛乳的滴定酸度、乳成分及64%、66%、68%、70%（V/V）酒精试验,分析酸度及乳成分对水牛乳酒精阳性发生率的影响,探讨酒精试验用于水牛生乳计价及拒收依据的可行性。结果表明,64%的酒精更适用于水牛乳,但仅能作为初步或辅助的品质评价手段;通过分析乳成分对不同酒精浓度下低酸度酒精阳性乳发生率的影响,表明蛋白质、乳糖加灰分含量越高,低酸度酒精阳性乳发生率越高,但脂肪含量对低酸度酒精阳性乳的发生无显著影响。     

山苦茶多糖的分离和含量测定

用石油醚和95％乙醇分别浸提山苦茶叶,以去除其中脂溶性成分和单糖、低聚糖、苷类等杂质,再用水提醇沉法提取分离山苦茶多糖,最后采用Sevag试剂法和蛋白酶酶解法去除茶多糖中的蛋白质。以葡萄糖为标准,蒽酮-硫酸比色法测定山苦茶多糖含量。考察了乙醇浓度对山苦茶多糖沉淀量的影响。结果表明,采用Sevag试剂法和蛋白酶酶解法相结合去除蛋白质效果较好。采用80％乙醇浓度沉淀山苦茶多糖效果最佳,测定波长为604 nm,山苦茶中多糖含量为1.012％,方法回收率96.7％,RSD为2.45％,多糖提取液4 h内显色稳定。该试验方法测定茶多糖准确快速,显色稳定且精密度好。     

醚菊酯中间体β,β-二甲基苯乙醇的制备

[目的]以溴苯为起始原料,经格式反应制备β,β-二甲基苯乙醇（c）。[方法]以溴苯为起始原料制备α,α-二甲基苄醇（a）,再以氯化亚砜为氯代试剂,由a制备α,α-二甲基氯化苄（b）。最后再通过（b）制备的格氏试剂与多聚甲醛反应,制备目标化合物——β,β-二甲基苯乙醇（c）。[结果]该制备方法可较好的制备目标化合物,收率达64.7%。[结论]此合成路线原料易得,工艺简单,收率较好。     

杨树肉桂醇脱氢酶基因序列和表达模式分析及CAD4酶活性检测

应用生物信息学方法从杨树基因组数据库中筛选出19个杨树肉桂醇脱氢酶基因,它们聚为3类.序列分析表明,杨树CAD基因家族主要通过全基因组加倍和串联复制的方式进行扩张.杨树和拟南芥CAD家族共6对旁系同源基因,在较强的净化选择压力下进化.19个基因在杨树不同组织中均有表达,表达量较高的是PoptrCAD17、PoptrCA...     

不同产地人参中4种脱氢酶活力比较

为了给人参的培育和优选提供理论依据,采用中性缓冲液提取粗酶液,应用分光光度法对15个不同产地的人参中苹果酸脱氢酶(Malate Dehydrogenase MDH),乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase, LDH),乙醇脱氢酶(Alcohol Dehydrogenase, ADH),葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(Glucose-6-phosphate Dehydrogenase, G6PDH）4种脱氢酶活力进行比较。结果表明不同产地人参脱氢酶活力差别明显,同一产地4种脱氢酶活力趋势基本相同。其中安图县万宝镇的人参样品的MDH、LDH、G6PDH 3种酶活力均是最高值,分别为124.58U/(g?Fw)、129.88 U/(g?Fw)、109.84U/(g?Fw);黑龙江2个产地的4种酶活力普遍比较低。运用SPSS13.0软件对15批样品进行系统聚类分析,将样品分为4类。MDH、LDH、ADH、G6PDH的活力可以作为人参培育和优选提供理论依据。     

酿酒酵母ADH2基因沉默表达载体的构建

利用重叠延伸PCR获得酿酒酵母基因沉默组件SADH2,经酶切与酿酒酵母穿梭质粒pYES2.0连接,构建酿酒酵母ADH2基因沉默表达载体。经酶切及测序鉴定成功构建了ADH2基因沉默表达载体pSADH2。     

Artificial neural network analysis of lipase-catalyzed synthesis of sugar alcohol ester

Artificial neural network (ANN) analysis of immobilized Candida antarctica lipase B-catalyzed esterification of palmitic acid with xylitol was carried out. Temperature, time, amount of enzyme, amount of molecular sieve, substrate molar ratio and volume of solvent were the six important parameters used as the inputs of the network trained by Levenberg-Marquardt (LM) algorithm. After evaluating different ANN configurations, the best network was found to be consisted of two hidden layers with six and seven neurons in the first and second layers respectively, using a hyperbolic tangent sigmoid transfer function. The coefficient of determination (R²) and mean square error (MSE) values between the actual and predicted responses were 1 and 1.5025e−24 for the training and 0.97239 and 0.03259 for the testing datasets. The results indicate the good generalization performance of the neural network model and its capability to predict the conversion of the substrates.     

结缕草肉桂醇脱氢酶基因家族全基因组序列鉴定和表达分析

肉桂醇脱氢酶(cinnamyl alcohol dehydrogenase, CAD, EC 1.1.1.195)是植物木质素合成途径的关键酶,通过消耗NADPH,将松柏醛等复杂醛转化成相应的醇单体,在植物生长发育过程和逆境应答中起到重要作用。本研究从结缕草基因组中鉴定获得了16个肉桂醇脱氢酶(ZjCAD)基因,对其进行了系统进化与基因结构的生物信息学分析。半定量PCR分析显示5个ZjCAD基因在叶片中特异表达,木质素染色结合不同种源材料ZjCAD基因的表达分析进一步表明ZjCAD6的表达与叶片木质素含量正相关,提示ZjCAD6可能为控制结缕草叶片木质素合成的关键基因。ZjCAD6基因全长2736 bp,有3个内含子和4个外显子,开放阅读框为1074 bp,编码357个氨基酸。ZjCAD6蛋白含有两个Zn²⁺结合位点与一个NADP(H)结合结构域,与已报道的其他植物具催化活性的CAD蛋白特征一致。上述结果为进一步研究结缕草叶片木质素含量及其机械强度等性状形成的分子机理提供了重要的参考。