芝麻SRAP反应体系的建立与优化

以芝麻幼叶提取的DNA为试验材料,通过对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 + 、Taq酶、随机引物及模板DNA进行优化,建立了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系：dNTPs（10mmol／L）0.30μl,Mg2 +（25mmol／L）1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer 1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础。     

植物抗病过程中的细胞程序性死亡

细胞程序性死亡是由某些特定基因调控的,在细胞生长发育或对外界刺激的反应过程中表现出来的一种生物学过程,伴随着细胞形态学及分子生物学等方面的特征.其中,植物过敏性反应是细胞程序性死亡的重要表现形式之一,表现为植物在不亲和病原菌侵染下受侵细胞及邻近细胞的快速死亡,从而导致病原菌生长受抑制,HR过程对于植物抗病性有重要意义.目前,关于抗病过程中的PCD和HR的研究已成为植物病理学的重点和热点之一.本文综述了植物抗病过程中PCD及HR的研究进展,重点对植物HR特征、可能的信号传导因子、检测方法、产生的分子机制等方面进行了分析和总结,并对林木抗病中的PCD研究进行了展望.     

胃肠道恶性肿瘤中Runx3基因甲基化研究

目的：通过检测胃肠道恶性肿瘤细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化状态及Runx3基因表达情况,探讨Runx3基因启动子区域甲基化及表达在胃肠道恶性肿瘤中发生和发展过程中的意义。方法：采用DNA甲基化特异性PCR（MSP）技术分别对9种胃癌细胞系和11种结直肠癌细胞系中Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测Runx3mRNA的表达情况。结果：在7种胃癌细胞系和6种结直肠癌细胞系中,Runx3基因启动子区域过度甲基化;RT—PCR结果显示,在20种胃肠道恶性肿瘤细胞系中有15种细胞系Runx3基因未表达。结论：Runx3基因启动子区域甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃肠道恶性肿瘤的发生发展密切相关,可作为胃肠道恶性肿瘤早期诊断的分子标记物及分子治疗的靶点。     

芝麻SRAP反应体系的建立与优化

通过对芝麻SRAP反应体系主要影响因素进行优化,建立最佳反应体系.以芝麻幼叶提取的DNA为实验材料,对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 、Taq酶、随机引物及模板DNA设置不同梯度实验.得到了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系为:dNTPs(10mmol/L)0.30μl,Mg2 (25mmol/L)1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础.     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

水稻细菌性褐条病病原的鉴定

为明确从褐条病稻苗上分离出来的病原细菌并与西瓜果斑病菌相区分, 对该病原特性进行了研究。分离获得6株褐条病致病菌,其中4株经主要细菌学特性、菌落形态、致病性、Biolog、脂肪酸分析（FAME）、电镜观察、Nested PCR鉴定及与3株水稻细菌性褐条病标准菌株和2株西瓜果斑病标准菌株的比较,证实了该病是由单极鞭革兰氏阴性细菌〖WTBX〗Acidovorax avenae〖WTBZ〗 ssp. 〖WTBX〗avenae〖WTBZ〗引起的。FAME将水稻细菌性褐条病菌误鉴定为西瓜果斑病菌,而用Biolog和nested-PCR鉴定能得到准确的鉴定结果。     

连锁超市生鲜商品进口采购及品质控制的系统分析

连锁超市的生鲜商品直接进口采购为连锁超市开辟了一条新的采购渠道,对增强连锁超市的竞争力及商品特色具有十分重要的现实意义。但生鲜商品直接进口采购对采购的方法、商品的选择、物流和品质控制相关的操作环节要求很高。因此,做好生鲜商品直接进口,采购人员应当尽快熟悉和掌握这一相对复杂的采购特点,并且采取积极有效的措施才能促进其扩大在连锁超市采购中的作用。     

不同绵羊品种脂肪组织中挥发性脂肪酸的组成分析

【目的】研究绵羊品种对其脂肪组织中挥发性脂肪酸(C4~C10)组成的影响,为深入研究羊肉膻味的形成机理奠定基础。【方法】采用同时蒸馏萃取和气相色谱技术,对小尾寒羊、滩羊和同羊皮下脂肪组织中的挥发性脂肪酸进行了定量分析。【结果】采用同时蒸馏萃取和气相色谱技术可在绵羊脂肪组织中检测到对羊肉膻味贡献较大的4-甲基辛酸和4-甲基壬酸。小尾寒羊、滩羊和同羊的总挥发性脂肪酸含量分别为261.109,169.124和271.898mg/kg;其中直链脂肪酸含量分别为217.792,143.036和229.059 mg/kg,支链脂肪酸含量分别为43.317,26.088和42.839 mg/kg。4-甲基辛酸和4-甲基壬酸是对羊肉膻味贡献较大的挥发性脂肪酸,其在小尾寒羊、滩羊、同羊脂肪组织中的含量分别为20.317和9.772,14.150和5.597,12.835和6.403 mg/kg。【结论】应用此方法可以检测到对羊肉膻味有主要作用的挥发性脂肪酸,且不同绵羊品种对其脂肪组织中挥发性脂肪酸的组成有一定影响,小尾寒羊脂肪组织中4-甲基辛酸和4-甲基壬酸含量有大于滩羊和同羊的趋势。     

小鼠Ii基因克隆、表达及其抗体制备

为了获取小鼠Ii编码基因,利用原核表达系统进行诱导表达,提取纯化目的蛋白并制备其相应抗体,应用RT-PCR获取小鼠Ii编码基因;插入pGEX-4T-1表达载体,SDS-PAGE分析蛋白表达;纯化融合蛋白,免疫家兔,制备抗血清.结果扩增出了与预期大小相同的700 bp的特异性基因条带,其与GenBank登录的鼠Ii基因同源性高达99.2%～99.8%;SDS-PAGE检测到大小约49.5 ku的特异性蛋白条带;应用琼脂双向免疫扩散、间接ELISA、Western-blot、间接免疫荧光法等进行抗体活性鉴定,证明获得了特异性强、具有良好生物活性的抗体.成功克隆了小鼠Ii编码基因,有效进行了诱导表达,并制备了具有良好免疫学活性的特异性抗Ii抗体.