SMAD2介导的Activin A信号对人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞诱导分化的促进作用

【目的】研究SMAD2在Activin A促进人胚胎干细胞向限定性内胚层诱导分化中的作用。【方法】在人胚胎干细胞中转染SMAD2基因siRNA或者过表达质粒后,收集经Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96和120 h的细胞各100 ng/mL,采用实时定量PCR检测SMAD2 与内中胚层共同前体标记Brachyury和内胚层标记Sox17的表达,进一步通过Western-blot分析Activin A诱导中SMAD2和磷酸化SMAD2（p-SMAD2）表达的变化。【结果】在Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层细胞分化的过程中,干扰SMAD2 后48 h时才检测到Brachyury强表达,而单纯Activin A处理组24 h就检测到强表达;Sox17的表达始终较单纯Activin A处理组明显降低,因此,干扰SMAD2直接抑制了Activin A的诱导作用。而过表达SMAD2,Brachyury和Sox17的表达水平较单纯Activin A处理组明显增加,促进了限定性内胚层的发生;并且在Activin A诱导过程中,p-SMAD2的表达水平明显提高,而SMAD2的表达没有明显改变。【结论】SMAD2作为关键因子,介导了Activin A诱导人胚胎干细胞向限定性内胚层的分化,并转录调控Brachyury和Sox17的表达;SMAD2的磷酸化,激活并介导了Activin A诱导的信号转导通路。     

秦川牛胎儿骨骼肌卫星细胞的分离培养

【目的】探索胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、鉴定及基因转染的方法。【方法】分别采用Ⅰ型胶原酶消化、Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化及链霉蛋白酶消化法对胎牛骨骼肌卫星细胞进行培养,比较了3种不同分离方法所得细胞数及其存活率的差异;利用差速贴壁法和Percoll密度梯度离心相结合的方法纯化骨骼肌卫星细胞,对纯化后的细胞进行myostatin基因RT-PCR以及结蛋白(Desmin)免疫细胞化学染色鉴定,最后通过电转染法对纯化的骨骼肌卫星细胞进行EGFP基因转染研究。【结果】3种消化培养方法中,以链霉蛋白酶消化法分离得到的胎牛骨骼肌卫星细胞数显著高于其它2种方法(P0.05),但细胞存活率较低(P0.05);而采用Ⅰ型胶原酶与胰蛋白酶二步消化法可以得到相对较高的细胞数及存活率。利用差速贴壁和Percoll密度梯度离心相结合的方法可以得到纯化的骨骼肌卫星细胞;电转染法适用于骨骼肌卫星细胞的基因转染。【结论】建立了胎牛骨骼肌卫星细胞分离、培养、纯化、鉴定及基因转染的方法,为通过转基因方法改良秦川牛产肉性能研究奠定了基础。     

粉菠萝体细胞植株再生体系的研究

以粉菠萝冠芽、幼叶为外植体材料,采用外加不同梯度浓度激素的完全培养基(MS)进行组织培养研究。结果表明,MS+BA1.0 mg.L-1+IBA0.1 mg.L-1为最佳丛生芽养基;MS+BA0.2 mg.L-1+NAA 0.1 mg.L-1为最佳芽增殖培养基;1/2 MS+NAA0.5 mg.L-1为最佳生根培养基。通过对再生植株的分子标记研究表明,基因组没有发生变化,表明通过粉菠萝体细胞植株再生苗同粉菠萝原生苗没有明显的差别。     

牛病毒性腹泻病毒与宿主细胞的相互作用研究

自1946年Olafson等首次在美国纽约州发现牛病毒性腹泻病毒(BVDV)以来,该病毒在世界各地广泛流行和传播,尤其对一些畜牧业发达国家的奶业和牛肉业造成了巨大损失.了解牛病毒性腹泻病的致病机理,研制出更加安全可靠有效的疫苗,对控制该病的发生和蔓延尤为重要.对BVDV的病原学、生物学特性以及对宿主细胞的相互作用等进行了阐述,以期为BVDV的预防及治疗奠定基础.     

Ca2+浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响

采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同Ca2+浓度对罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergi)感光细胞中Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响.结果表明,对于光适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.51、2.13和0.93.对于暗适应组,在高Ca2+溶液、生理溶液和低Ca2+溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是3.01、1.08和0.47.这些表明了罗氏沼虾感光细胞中Gq蛋白α亚基在暗适应条件下同时分配在感杆束和细胞质中.在光照和细胞质内Ca2+浓度适度升高的条件下,膜结合的Gq蛋白α亚基进而转化为可溶性的Gq蛋白α亚基.     

水分对脐橙果实体积增长的影响

于7—9月脐橙果实膨大期,连续达10 d晴天,进行树盘灌水,调查果实体积增长量和株产量。结果表明:灌水处理果实净增量曲线波动较未灌水处理的小,而且曲线高峰与低谷出现的时间和谷值有区别;8月上中旬,灌水处理曲线快速升高,而对照曲线逐步下降;平均株产量灌水处理(17.17 kg)大于对照(12.57 kg)。     

不同培养条件下欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞的生长优势

为建立欧洲鳗鲡病毒性疾病分离、鉴定的细胞模型,以欧洲鳗鲡胸鳍细胞人工培养适应株(第21代)为试验材料,采用人工培养基体外传代培养的方法,探讨欧洲鳗鲡胸鳍传代细胞体外培养的最适条件。观察比较不同培养基(L-15、RPMI-1640、高糖型DMEM)、血清成分(BS和FBS)及其浓度(5%、10%、15%、20%)对欧洲鳗鲡胸鳍细胞生长状态的影响。结果表明:含有10%胎牛血清(FBS)的L-15培养基最适合欧洲鳗鲡胸鳍细胞的生长。     

胶体金免疫层析法检测猪瘟(强弱毒区分)抗体研究

以原核表达的重组猪瘟病毒E2蛋白为弱毒抗原,以猪瘟病毒(HCV)强毒株细胞培养物为强毒抗原,利用胶体金标记技术国内首次建立了HCV抗体检测(强弱毒区分)的免疫层析试纸条(双抗原夹心法)。研究结果表明,检测时只需将80μL待检测猪血清加于加样端20 min后观察结果即可。若观察区上端仅1条红色条带,即为HCV抗体阴性;2~3条条带即为HCV抗体阳性;若出现2条条带的位置为观察区上端和中间部位,即为HCV弱毒抗体阳性;若出现2条条带的位置位于观察区上端和下端部位,则为HCV强毒抗体阳性;若出现3条条带则HCV强弱毒抗体均为阳性。本试纸可很好地避免因试验操作造成的假阳性、假阴性,且操作简单、快速、简便、灵敏度高、特异好、不需特殊设备、价格低廉,20 min即可判断结果,且可区分强弱毒感染,适于基层实验室和现场检测。     

串珠镰刀菌粗毒素对玉米根系细胞膜的影响

为了明确串珠镰刀菌毒素对玉米根系的致病机制,采用串珠镰刀菌粗毒素处理抗、感品种玉米幼苗根系,测定根系的细胞膜透性、丙二醛和可溶性糖含量,结果表明:抗病品种玉米对毒素的耐受能力强,细胞膜透性、丙二醛含量低于感病品种,而可溶性糖含量高于感病品种。抗病品种3个指标之间的相关性较高,而感病品种的3个指标相关性较低。表明抗、感品种玉米对串珠镰刀菌毒素的耐受能力不同。