犬瘟热病毒N蛋白基因融合蛋白原核表达条件的优化与蛋白纯化

[目的]提高犬瘟热病毒N蛋白基因在大肠杆菌中表达可溶性GST融合蛋白的含量.[方法]研究诱导剂(IPTG)的最佳加入时间、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间以及不同温度条件对GST - CDV N融合蛋白表达的影响,获得在大肠杆菌中的最佳的表达条件,然后再在最佳条件下大量的表达,用GST - Sepharose 4B亲和层析柱对GST - CDV N融合蛋白进行纯化,得到最大量的可溶性融合蛋白,并对蛋白含量进行测定.[结果]大肠杆菌BL21 (DE3)转化菌在37℃培养3.5 h(OD600 =1.314)时,加入IPTG使终浓度为1 mmol/L,然后在27℃诱导8h,GST - CDV N融合蛋白可溶性表达量最高,达到0.862 mg/mL.[结论]确定了犬瘟热病毒N蛋白基因的优化表达条件,为犬瘟热病毒分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础.     

基于转录组鉴定楸子叶片和根系干旱响应基因

利用RNA-Seq技术研究楸子根、叶组织响应干旱胁迫的差异表达基因(DEGs),为探讨苹果砧木不同组织的抗旱分子机制提供理论依据.结果 表明,与对照相比,在干旱胁迫下根、叶组织的基因表达数被抑制.叶片得到2211个DEGs,其中1128个上调,1083个下调;根系得到4996个DEGs,其中1810个上调,3186个下...     

甘蔗线虫病抗性基因的PCR检测研究

以38份未经线虫病常规鉴定的甘蔗种质资源为供试材料,根据番茄抗根结线虫病基因和甜菜抗胞囊线虫病基因的保守序列区域,分别设计了2条上游引物、2条下游引物,对设计的引物进行组合后,应用PCR特异扩增从中分别筛选出各1对特异引物。用抗根结线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约460 bp大小的特异片段;用抗胞囊线虫基因设计的特异引物进行扩增最终获得了1条大约690 bp大小的特异片段,进一步进行了PCR-Southern杂交,确认了该2条特异引物的真实性。     

蛋鸡禽腺病毒与沙门菌混合感染的诊断

为明确江苏省高邮市某鸡场商品蛋鸡感染疾病情况,对患病商品蛋鸡病料进行禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)、马立克病毒(Marek’s disease virus, MDV)、禽白血病病毒(avian leukosis virus, ALV)核酸检测和细菌分离鉴定。结果显示：该鸡场患病商品蛋鸡为禽腺病毒(D种血清11型)和沙门菌混合感染;沙门菌分离株对利福平、恩诺沙星、链霉素、庆大霉素、氨苄西林和多西环素耐药,对环丙沙星、氟苯尼考、头孢曲松、阿米卡星、四环素、磷霉素、头孢噻肟、卡那霉素、新霉素、呋喃唑酮、氯霉素和大观霉素敏感。     

青钱柳实时荧光定量PCR内参基因的筛选

为筛选适用于青钱柳(Cyclocarya paliurus (Batal.) Iljinskaja)不同组织器官的稳定内参基因,本研究利用青钱柳花芽的转录组测序数据,选取Actin、CYP、EIF、GAPDH、TUB、TEF和18S rRNA共7个看家基因作为候选内参基因;以根、茎、叶、雌花和雄花为材料,通过实时荧光定...     

2005-2020年转Bt基因棉花抗虫性变化及其与产量性状的相关性分析

为了给转Bt基因棉花在科研和生产上多世代可持续利用提供依据,以转Bt基因棉花品种银山8号为试验材料,从2005年开始,连续16年进行跟踪研究。结果表明,随种植世代的增加,生物测定银山8号第2～4代棉铃虫幼虫校正死亡率、铃期叶片和铃期小铃杀虫蛋白表达量均有不同程度的线性上升趋势,同时皮棉产量线性回归也呈增长趋势;苗期叶片、蕾期叶片和蕾期小蕾杀虫蛋白表达量呈线性下降趋势。相关性分析表明,抗虫棉的抗虫性与皮棉产量间均呈正相关,株铃数和衣分是构成皮棉产量的重要因子,与皮棉产量的相关性分别达到极显著和显著水平。外源Bt基因转入棉花后能稳定遗传给后代,通过卡那霉素鉴定和系统选择可以持续保持转Bt基因棉花多世代的抗虫性,甚至通过提纯复壮逐年优选,可实现转Bt基因抗虫棉特定生育时期或部分棉花器官抗虫性的提高。     

PCR-RFLP技术检测新嘉兴黑猪氟烷基因

本试验随机抽取嘉兴地区部分猪场新嘉兴黑猪血样,通过PCR-RFLP技术进行氟烷基因检测,结果表明,37头新嘉兴黑猪基因型均为NN,未出现Nn和nn基因型。检测结果为新嘉兴黑猪品种资源保护及合理开发利用提供理论依据。     

鸽载脂蛋白B基因多态性与生长性状相关性分析

利用PCR-SSCP技术和DNA测序方法检测两群体鸽apoB基因编码区序列的单核苷酸多态性,最小二乘分析表明,A57G突变位点导致的3种基因型对石岐肉鸽屠体率及灰色肉鸽屠体重、腹脂率、肝脏重有显著影响(P<0.05);对灰色肉鸽活重、腹脂重、肝脏率及石岐肉鸽活重和全净膛率有一定影响(P<0.2).多重比较显示,石岐肉鸽群体中,BB基因型个体的屠体率高于从基因型个体.灰色肉鸽群体中,BB基因型个体的屠体重、肝脏重、腹脂率均为最大.     

优质节粮小型蛋鸡与海兰褐蛋鸡对比试验

作为体型小、耗料少、培育成本低的小型蛋鸡,能够生产蛋个小、品质优的土鸡蛋。为验证其经济效益和社会效益。设计了节粮小型蛋鸡w系与海兰褐蛋鸡饲养对比试验。结果表明：试验组比对照组经济效益多11．16元／只;抗病力强,成活率高1．6％;全程节约饲料8kg以上。由于少消耗饲料可减少粪便排放,因此减少了对环境的污染。     

鸡肠炎沙门氏菌外膜蛋白F的原核表达及免疫原性分析

根据GenBank中收录的鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌辽宁分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌OmpF基因,用IEDB Analysis Resource在线预测分析,该基因可能存在15个线性B细胞抗原表位;同时将该基因克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-OmpF,转入大肠杆菌BL21中,获得OmpF重组蛋白。Western-blot检测结果表明,该重组蛋白的分子质量约为66 kD(含标签蛋白),能被鸡沙门氏菌阳性血清识别,初步证实该蛋白具有免疫原性,为鸡肠炎沙门氏菌亚单位疫苗的进一步研究和开发奠定了理论基础。