爱滋病毒抗原(P_(24))检测马传染性贫血病毒的研究

本研究通过基因工程技术生产了爱滋病毒的Ｐ２４抗原,并且运用于马传贫病毒的血清学检查,与传统方法所制备的马传贫抗原对照检测军马２５２４匹以及本实验室保留的各种马传贫阳性血清２２４份。结果显示马传贫血清能够免疫沉淀爱滋病毒（ＨＩＶ）的Ｐ２４,表明它们之间有着共同的抗原决定簇,且Ｐ２４检测法检测率高,检测周期仅３～４ｈ,明显优于传统法,可用于马传贫的快迅检测。     

鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析

用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。     

辽宁省消灭马传染性贫血关键技术研究

经农业部消灭马传染性贫血达标考核验收,辽宁省于2013年2月达到了消灭马传贫部颁标准。取得这一重大进展的创新性技术,关键在于科学地整合和配套应用马传贫琼脂免疫扩散检测技术、马传贫弱毒疫苗科学化免疫技术及马传贫强弱毒抗体鉴别诊断技术。探究和总结这一创新性技术成果,对于现阶段开展其他动物疫病的防控乃至净化,具有重要借鉴和指导意义。     

当归及其炮制品对血虚鸡血液生理指标的影响

为探究当归及其不同炮制品对鸡造血功能的影响,本试验用环磷酰腹腔注射制造雏鸡血虚模型,然后分别用2mL/kg的生当归、酒当归、土当归、油当归和当归炭水煎剂连续灌服7d,随后采血测定红细胞数和血红蛋白等血液生理指标,并与健康对照组和血虚不用药模型组进行比较。结果表明,各种当归炮制品均有较好的补血作用,其中油当归补血作用较强,当归炭最弱。     

马传染性贫血病毒弱毒疫苗S2基因在体内变异分析

为研究马传染性贫血病毒(EIAV)驴白细胞弱毒疫苗EIAVDLV121的S2基因在马体内的变异规律,本研究选用4匹成年马,其中2匹(#1、#2)接种EIAVDLV121,另外2匹作为对照.免疫后监测马体温、血小板含量以及病毒载量结果显示,免疫马未出现马传染性贫血体征.通过RT-PCR方法检测病毒S2基因在感染马体内不同时期的基因序列,结果显示,免疫马体内EIAVDLV121 S2蛋白的突变主要发生在氨基酸第17位、22位、39位、41位、51位和55位.另外,#1马免疫后70 d以及#2马免疫后第14 d和第28 d检测疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121亲缘关系较近,而#1马免疫后第42 d、第112 d和第140 d的疫苗毒S2蛋白序列与EIAVDLV121的致病性亲本强毒株EIAVDN40亲缘关系最近.本研究结果有助于对EIAV及EIAV疫苗株在马体内感染进程的研究.     

鸡传染性贫血病毒VP1和VP2基因共表达载体的构建

根据GenBank中收录的鸡传染性贫血病毒(CIAV)基因组序列,设计了扩增CIAV VP1和VP2基因的特异性引物,运用PCR技术从发病鸡肝组织DNA中扩增得到VP1、VP2基因,并将其克隆至pMD18-T载体.核苷酸测序结果显示,其序列与发表的序列同源性达到99.8%.将VP2基因克隆到pMD18-T载体,并对Vp3基因起始密码子进行定点突变,得到突变基因mVP2.将mVP2、VP1先后克隆至pIRES载体,并转化大肠埃希菌JM109,提取质粒通过酶切鉴定显示,成功获得了共表达质粒pIRES-VP1/mVP2.     

鸡传染性贫血病毒VP1基因的克隆表达及抗原性分析

参考已发表的鸡传染性贫血病毒（CIAV）VP1基因序列，设计并合成了2对引物，经PCR扩增获得了2个基因片段。将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体中，成功构建了克隆载体pGEM—CIAVVP1A和pGEM—CIAVVP1B。将上述重组质粒和原核表达载体pMXB10分别用NdPⅠ＋EcoRⅠ、NdeⅠ十X^0I双酶切，并将纯化的2个基因亚克隆至pMXB10中，构建出原核表达载体pMXB10-VP1A和pMXB10-VPIB。在0．3mmol／L IPTG诱导下，目的基因在大肠杆菌ER2566中以分泌型得到了大量表达。Western—blot分析发现，表达蛋白具有CIAV抗原性。表达蛋白经纯化后作为包被抗原，用间接ELISA鉴定，与CIAV阳性血清均能发生特异性反应。2组蛋白免疫SPF鸡后，用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性，表明2组蛋白均可诱发机体产生抗CIAV的抗体。     

肉种禽网状内皮增生症、鸡传染性贫血和禽白血病血清学调查

对不同种鸡场不同周龄肉种鸡进行REV、CAV和ALV（A、B亚群）抗体检测。在572份血清样品中，除了一个8．1周龄和15周龄鸡群CAV抗体阳性率分别为13．3％和75％外，其它鸡群无论是否进行CAV疫苗免疫，抗体阳性率均为100％。在212份血清样品中，REV抗体阳性率在16．7％～62．5％之间；ALV（A、B亚群）抗体阳性率在0％～75％之间。本研究结果表明，所检测种鸡群中存在3种免疫抑制性病毒的感染或混合感染。     

鸡传染性贫血病毒vp3基因的原核表达及其免疫学活性分析

将鸡传染性贫血病毒(CIAV)Vp3基因克隆入表达载体pET-28a中,然后转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导,vp3基因以融合蛋白的形式高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白分子量约为18Ku。Westernblot分析表明,该蛋白可与CIAV阳性血清特异性反应。     

鸡传染性贫血病胶体金快速诊断试纸条的研制——鸡传染性贫血血清抗体的制备、纯化及检测

[目的]为建立鸡传染性贫血病(CIA)诊断方法奠定基础。[方法]对15周龄SPF鸡进行4次免疫后,制备鸡传染性贫血病血清抗体并对其进行纯化,测定抗原最佳包被浓度和血清的最佳稀释度,研究纯化后血清抗体的蛋白含量和效价。[结果]阳性血清和阴性血清的最佳稀释度为1∶100,病毒包被抗原最佳包被浓度为5μg/ml。血清抗体蛋白含量为13.2 mg/ml,血清抗体效价为1∶12 800。[结论]该研究为制备CIA胶体金快速诊断试纸条奠定了基础。