益气解毒方主要三萜类化合物抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖效应的比较

目的 研究比较益气解毒方4种主要三萜类化合物齐墩果酸、熊果酸、茯苓酸、黄芪甲苷抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖的效应。方法 实时无标记细胞功能分析技术（real-time unlabeled cell function analysis technique,RTCA）动态监测不同浓度的4种益气解毒方三萜类化合物对体外培养的人鼻咽癌CNE2细胞生长的影响,高通量细胞成像多功能检测系统Cytation5（C5）监测不同化合物对鼻咽癌CNE2细胞形态的影响,Western Blot法检测不同化合物对鼻咽癌CNE2细胞增殖相关蛋白表达的影响。结果 RTCA结果显示齐墩果酸、熊果酸、茯苓酸、黄芪甲苷均能够不同程度地抑制鼻咽癌细胞增殖,呈剂量依赖性,不同单体发挥最佳药效的时间不同。茯苓酸和黄芪甲苷起效较快,茯苓酸在处理后24 h达到最佳药效,IC₅₀值为7.51 μmol/L,黄芪甲苷持续作用36 h,抑制效果达到最佳,熊果酸在刺激28 h后IC₅₀值最低,为0.70 μmol/L,齐墩果酸后期作用效果较好,且所需浓度低。C5结果显示,与对照组相比,4种三萜类化合物在作用36 h后,CNE2细胞数量及形态均发生明显变化。Western Blot结果显示,与对照组相比,齐墩果酸、熊果酸、茯苓酸、黄芪甲苷能明显抑制CNE2细胞中增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达。结论 益气解毒方主要三萜类化合物均能抑制鼻咽癌细胞增殖,降低增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达水平,但药物的作用时间和浓度均有差异。     

益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响

目的 研究益气解毒方抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖的效应。方法 采用实时无标记细胞功能分析技术（real-time unlabeled cell function analysis technique, RTCA）动态监测不同浓度（0.125、0.250、0.500、1.000 mg/mL的益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响;采用CCK-8法检测不同浓度益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖能力的影响;通过高通量细胞成像多功能检测系统Cytation5监测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖形态的影响;采用Western Blot技术检测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA表达的影响。结果 RTCA 和 CCK-8 法实验结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物可以明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,而且随着益气解毒方水提物的作用时间越长,其抑制效应越显著（P<0.05）;Cytation5结果显示,与空白对照组比较,不同浓度益气解毒方水提物处理CNE2细胞后,细胞形态发生了明显变化,且浓度越高,作用时间越长,细胞膜皱缩,细胞核质浓缩、破碎更明显;Western Blot结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物能明显抑制CNE2细胞中增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达（P<0.05）。结论 益气解毒方水提物能明显抑制鼻咽癌细胞增殖,该效应与其抑制增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达有关。     

鼻咽癌中EB病毒的原位杂交检测

目的：在分子水平探讨ＥＢＶ在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：采用ＥＢＶｅｎｃｏｄｅｄｓｍａｌＲＮＡ（ＥＢＥＲ）原位杂交对２８例鼻咽癌和７例慢性鼻咽炎组织进行了检测。结果：２８例鼻咽癌组织中有２３例阳性,７例慢性鼻咽炎均是阴性。鼻咽高分化鳞癌、低分化鳞癌和未分化癌均存在ＥＢ病毒感染,不同分化程度的肿瘤组织间ＥＢＥＲ阳性率差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：在鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用。鼻咽活检组织中有ＥＢＶＲＮＡ片段的检出,对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值     

低剂量与高剂量顺铂联合5-氟脲嘧啶及平阳霉素治疗晚期鼻咽癌的疗效比较

目的：比较低剂量与高剂量顺铂（ＤＤＰ）联合５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）、平阳霉素（ＢＬＭ）（简称ＰＦＢ方案）对晚期鼻咽癌的疗效及毒性反应。方法：经病理学确诊的放疗后复发或有远处转移的晚期鼻咽癌３８例,随机分为单次高剂量ＤＤＰ组（ＨＤ－ＤＤＰ组）１７例与低剂量ＤＤＰ连续５ｄ静滴组（ＬＤ－ＤＤＰ组）２１例。ＨＤ－ＤＤＰ组予ＤＤＰ１００ｍｇ／ｍ２,第１天静脉输入,配合水化;ＬＤ－ＤＤＰ组予ＤＤＰ２０～３０ｍｇ／ｍ２第１～５天静脉输入,不予水化。两组同时联合５－Ｆｕ、ＢＬＭ,每３～４周重复。结果：总有效率（完全缓解＋部分缓解）：ＨＤ－ＤＤＰ组５２．９％,ＬＤ－ＤＤＰ组４７．６％（Ｐ＞０．０５）。对不同转移部位有效率以肺转移疗效较好（５８．３％、６０％）,肝转移无效。毒性反应：Ⅱ度以上呕吐发生率ＨＤ－ＤＤＰ组９０．４％,明显高于ＬＤ－ＤＤＰ组的４８．１％（Ｐ＜０．００１）;ＨＤ－ＤＤＰ组与ＬＤ－ＤＤＰ组的白细胞降低发生率分别为５２．３％、３３．３％（Ｐ＞０．０５）;肾毒性发生率分别为７．１％、５．５％（Ｐ＞０．０５）。结论：低剂量ＤＤＰ连续５ｄ静滴的ＰＦＢ方案疗效与高剂量ＤＤＰ的ＰＦＢ方案疗效接近,毒性反应轻微,应用简便     

Pin1真核表达载体的构建及鼻咽癌稳定表达细胞的鉴定

目的 构建Pin1真核表达载体并筛选鼻咽癌稳定表达细胞株.方法 提取HEK293细胞RNA行逆转录,扩增Pin1基因编码区,将其克隆到真核表达载体pcDNA6B中,菌液PCR鉴定并测序;将成功克隆的质粒转染至CNE1细胞,杀稻瘟素筛选和Western Blot鉴定稳定表达Pinl细胞.结果 成功扩增Pin1编码区,并克隆至真核表达载体pcDNA6B中;Pin1过表达载体转染至CNE1细胞并筛选稳定表达细胞后,Western Blotting检测结果显示Pinl表达水平明显增加.结论 成功构建Pin1过表达载体并筛选出鼻咽癌稳定表达细胞,可用于后续研究.     

鼻咽癌组织中微血管及肥大细胞数量与转移的关系

本文用因子Ⅷ相关抗原免疫组化（Ｓ－Ｐ）方法观察了转移及非转移鼻咽癌组织的微血管，并用甲苯胺蓝法观察了其肥大的细胞数量，结果表明，转移组微血管数目，肥大细胞的数量均高于非转移组（Ｐ〈０．０５，Ｐ〈０．０１）肿瘤局部肥大细胞数量与新生血管数目呈正相关关系（ｒ＝０．９０５），结果提示：鼻咽癌组织内血管生成与其转移密切相关，肥大细胞数量与肿瘤血管生成关系密切。     

鼻咽组织免疫组化标记——Ⅰ.上皮性标记

本文采用多种上皮性标记物的免疫组织化学技术,对非肿瘤性鼻咽上皮的抗原表达特性进行研究。结果表明鼻咽部所有上皮均表达角蛋白,但性质不同的上皮所表达的分子量不同。采用商品化癌胚抗原多克隆抗血清可能存在非特异性反应,至于上皮膜抗原则见于鼻咽部所有上皮成分。对上皮性标记物在鼻咽部组织表达的规律及意义作了探讨。     

鼻咽癌细胞株CNE1转染EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)后对放射敏感性的影响

目的：研究EB病参LMP1对鼻咽癌高分化细胞株CNE1放射敏感性的影响。方法：用电转染技术将带有EB病毒LMP1基因的真核表达质粒导入鼻咽癌高分化细胞株CNEl，用免疫组化法及Western blot检测LMPl的表达；LMP1对CNEl细胞放射敏感性的影响采用^60钴治疗仪照射后集落形成实验进行观察。结果：CNE1细胞抹转染LMP1基因后LMPl蛋白呈阳性表达，对照放射敏感性比未转染株的细胞存活事低(P＜0．01)。结论：LMPl能增加鼻咽癌细胞的放射敏感性，这种作用可能与LMP1的促细胞转化，抑分化有关。     

EBV感染对人鼻咽癌细胞株形态参数和DNA含量的影响

目的：观察ＥＢＶ体外感染对不同分化不同分化状态鼻咽癌细胞株形态参数和ＤＮＡ含量的影响。方法：应用ＰＣＲ法检测ＥＢＶ基因、免疫组化和图像分析仪分别检测了ＥＢＶ和ＥＢＶ＋ＴＰＡ对ＣＮＥ－１和ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｃｋｐａｎ表达及形态参数和ＤＮＡ含量的影响。结果：（１）ＥＢＶ在体外可感染ＣＮＥ－１细胞；（２）ＥＢＶ感染ＣＮＥ－１细胞使其Ｃｋｐａｎ表达降低，胞面积籴小和核浆比升高及ＤＮＡ含量明显减少（Ｐ〈０．０