A three‐dimensional cell culture system as an in vitro canine mammary carcinoma model for the expression of connective tissue modulators

In this study, derived complex carcinoma (CC) and simple carcinoma (SC) cell lines were established and cultured under two‐dimensional (2D) and three‐dimensional (3D) conditions. The 3D was performed in six‐well AlgiMatrix? (LifeTechnologies®, Carlsbad, CA, USA) scaffolds, resulting in spheroids sized 50–125 µm for CC and 175–200 µm for SC. Cell viability was demonstrated up to 14 days for both models. Epidermal growth factor receptor (EGFR) was expressed in CC and SC in both systems. However, higher mRNA and protein levels were observed in SC 2D and 3D systems when compared with CC (P < 0.005). The connective tissue modulators, metalloproteinases‐1, ‐2, ‐9 and ‐13 (MMPs), relaxin receptors 1 and 2 (RXR1 and RXR2) and E‐cadherin (CDH1) were quantitated. All were upregulated similarly when canine mammary tumour (CMT)‐derived cell lines were cultured under 3D AlgiMatrix, except CDH1 that was downregulated (P < 0.005). These results are promising towards the used of 3D system to increase a high throughput in vitro canine tumour model.     

移动WAP技术在高校图书馆中的应用现状及分析

移动WAP技术是当前通讯行业的主流发展方向,在互联网技术的影响下也取得了较快发展且趋于成熟稳定。从高校图书馆的角度出发,分析移动WAP技术在图书馆中的作用和应用的现状,并提出一些改进建议。     

可变剪接体WNT4-β对山羊卵泡颗粒细胞增殖和激素分泌的影响

旨在研究WNT4的一个可变剪接体（WNT4-β）对山羊卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取4~6月龄健康母羊20只,采集双侧卵巢,体外分离卵泡颗粒细胞进行培养。通过免疫荧光染色技术确定WNT4-β的表达位置;在山羊颗粒细胞中过表达或干扰WNT4-β后,利用RT-qPCR、Western blot检测WNT4-β和WNT信号通路中关键标记因子ROA1、RHOA及颗粒细胞增殖标记基因cyclin-D2、CDK4的表达变化;CCK-8技术检测颗粒细胞增殖情况;并通过ELISA分析颗粒细胞中生殖激素水平的变化。免疫荧光染色结果显示,WNT4-β只在山羊卵泡颗粒细胞中表达,在卵母细胞不表达;过表达WNT4-β后,WNT4-β和颗粒细胞增殖因子cyclin-D2、CDK4的mRNA相对表达量极显著增加（P<0.01）,蛋白表达水平显著增加（P<0.05）;WNT信号通路标记因子ROA1、RHOA mRNA表达水平显著增加（P<0.05）,β-catenin蛋白表达水平显著增加（P<0.05）;干扰WNT4-β后,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4、ROA1和RHOA 的mRNA表达显著降低（P<0.05）,WNT4-β、cyclin-D2、CDK4及β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.05）。CCK-8结果显示,过表达WNT4-β促进颗粒细胞增殖（P<0.05）;ELISA结果显示,过表达WNT4-β后,颗粒细胞中雌二醇（estradiol,E₂）水平显著增加（P<0.05）,孕酮（progesterone,P₄）水平升高但不显著（P>0.05）;干扰WNT4-β后则结果相反,颗粒细胞增殖受到抑制（P<0.05）,E₂和P₄的水平显著降低（P<0.05）。综上所述,WNT4可变剪接体WNT4-β通过调控WNT信号通路促进山羊卵泡颗粒细胞增殖及类固醇激素分泌,本研究为解析WNT4调控山羊颗粒细胞增殖的潜在分子机制提供理论基础。     

猪外周血单核细胞来源的树突状细胞体外诱导培养

[目的]建立猪外周血单核细胞来源的树突状细胞(MoDC)体外培养模型.[方法]从猪外周新鲜血液中分离外周血单核细胞(PBMC),通过贴壁法获得树突状细胞前体细胞,采用重组猪的集落共刺激因子(rpGM-SCF)和重组猪的白细胞介素4(rpIL-4)双因子诱导及脂多糖(LPS)刺激成熟法,收集不同时间段的细胞,利用扫描电子显微镜观察其形态,流式细胞分析仪检测表面分子表达率及其对FITC-dextran的吞噬能力,混合淋巴细胞反应检测细胞对同种异体T细胞的刺激能力.[结果]经体外诱导的DC具有典型的树突状形态;LPS刺激的DC表型分子CDla、CD80、CD86、SLAⅡ、CD172a与LPS未刺激的DC有明显增高,其吞噬能力有所下降,刺激同种异体T淋巴细胞的能力有所增强.[结论]该试验成功建立了猪MoDC的体外诱导培养方法,为进一步研究猪MoDC在机体免疫调节和抗病毒感染中的作用奠定了基础.     

A spontaneously occurring malignant ovarian Sertoli cell tumor in a young Sprague Dawley rat

Primary ovarian tumors are generally uncommon in rats used in toxicologic studies. A malignant Sertoli cell tumor was present in the ovary of a 19-week-old female Sprague Dawley rat. Macroscopically, the mass was white and firm, 10 × 13 × 17 mm in size, and located in the right ovary. Histopathologically, the mass was composed of nests of pleomorphic cells, which formed seminiferous-like tubules separated by a thin fibrovascular stroma. The tubules were lined by tumor cells, which had basally located nuclei and abundant eosinophilic and vacuolated cytoplasm. In some areas, the tumor cells were arranged in a retiform growth pattern, mimicking a rete testis/ovarii. Disseminated metastases to the surfaces of the mesentery, spleen and liver were also present. Immunohistochemically, many tumor cells were strongly positive for vimentin, estrogen receptor α and Ki 67. Some tumor cells were positive for pancytokeratin and inhibin α. These findings closely resemble those of an ovarian-derived human malignant Sertoli cell tumor. From our review of the literature, we believe this is the first report of a spontaneous malignant Sertoli cell tumor in the ovary of a young laboratory rat. This case might provide useful historical control information for rat toxicity studies.     

马铃薯干腐病病原镰孢菌体内产细胞壁降解酶特性研究

干腐病是马铃薯窖储期的主要病害,病原菌往往通过薯块表面的机械擦伤入侵块茎并破坏块茎的薄壁细胞而进行侵染,其中病菌的进一步扩展需要降解寄主细胞壁,因此,针对干腐病病原镰孢菌产酶特性的研究具有重要意义。以接骨木镰孢菌（Fusarium sambucinum）、燕麦镰孢菌（Fusarium avenaceum）、拟丝孢镰孢菌（Fusarium trichothecioides）、黄色镰孢菌（Fusarium culmorum）、拟枝孢镰孢菌（Fusarium sporotriodides）为试验菌种,以克新1号为寄主材料,对5种镰孢菌体内产细胞壁降解酶特性及温度对这些致病菌的产酶特性的影响进行了研究。结果表明,当5种镰孢菌接种在马铃薯薯块上后,均可以产生羧甲基纤维素酶（Cx）、β-葡萄糖苷酶、多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果胶甲基半乳糖醛酸酶（PMG）,其中Cx的活性在侵染后期最高,PMG在侵染前期较高,且Cx活性低于PMG。在温度对镰孢菌活体内产细胞壁降解酶的影响试验中发现,相对于不接菌对照,Cx、PMG的活性在25℃时较高,β-葡萄糖苷酶在20℃下活性较高,PG在20℃和25℃的活性都较高。以上结果说明：镰孢菌侵染马铃薯时会产生大量的细胞壁降解酶,Cx活性在侵染后期较高,PMG活性在侵染前期较高,且低温不利于真菌细胞壁降解酶的产生。     

黄颡鱼外周血细胞显微结构研究

对黄颡鱼外周血细胞常规Ｗｒｉｇｈｔ’ｓ法染色并进行显微观察,可见以下血细胞：红细胞、未成熟红细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、小淋巴细胞、大淋巴细胞、单核细胞和血栓细胞,并分别对其显微结构进行了描述。     

盐度对绿色杜氏藻生长速率、叶绿素含量及细胞周期的影响

在不同盐度梯度下,进行了盐度对绿色杜氏藻Dunaliellaviridis的生长、叶绿素含量和细胞周期影响的试验。结果表明:1)绿色杜氏藻在盐度为10时,生长速率和单位水体叶绿素含量最低,分别为0 121个/d和908 27μg/L;在盐度为60时,生长速率和单位水体叶绿素含量最高,分别为0 381个/d和1192 41μg/L。2)不同盐度下单位细胞叶绿素含量呈现高-低-高的变化趋势,盐度60时,单位细胞叶绿素含量最低,叶绿素a为2 32×10-6μg/个,叶绿素总量为3 31×10-6μg/个。3)盐度为60时,绿色杜氏藻的细胞周期S期最短,为36 9%,G2期为0 8%;盐度80时,绿色杜氏藻的G2期最短,为0 3%,S期为43 6%,即绿色杜氏藻在盐度为60～80时,S期、G2期最短,细胞进入分裂期所用时间最短。本试验结果表明,培养绿色杜氏藻以盐度60～80的水体最为适宜。     

糖分含量对番茄叶片Pst DC3000抗性的影响及其机理

研究糖代谢对番茄叶片细菌性叶斑病(Pst DC3000)抗性的影响及其可能的生理生化机制,为抗病番茄新品种的选育提供参考.以糖代谢特征不同的早上取样叶片(早8:00取样)和晚上取样叶片(晚6:00取样)为材料,测定离体接种后不同时期(0、24、48 h)上述两种叶片在Pst DC3000抗性、细菌密度、可溶性糖和淀粉含...     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的 表达水平与生长行为

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4 d nanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示，MEF饲养层上培养4d的ES-D3 nanog基因含量高；nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低；而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示：不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d，集落形态仍然很规则，细胞间紧密，集落表面少见大细胞，AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞，集落界限清晰，AKP染色显示，集落大部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为弱阳性，可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3，集落隆起不明显，集落界限不清晰，大部分集落形态不太规则，AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为全阴性，集落表面有较少的大细胞，集落周围有伸出的成纤维细胞。