禽流感高免卵黄抗体的研制与应用

用禽流感Ｈ９亚型油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡,获得高免蛋,并禽流感高免卵黄液,在发病初期给禽流感病鸡肌注高免卵黄液,获得了满意的治疗效果。     

荞麦蛋白复合物对糖尿病小鼠降血糖作用的研究

采用不同剂量四氧嘧啶制备糖尿病小鼠模型,造模后测定小鼠血糖值,确定小鼠最佳四氧嘧啶腹腔注射给药量为100 mg/(kg·d).以不同剂量的荞麦蛋白复合物灌胃糖尿病模型小鼠并检测小鼠空腹血糖及血浆胰岛素,确定荞麦蛋白复合物最佳灌胃剂量为0.534 g/(kg·d),此剂量对糖尿病小鼠的降血糖作用最为明显.     

禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒（AIV）抗原的双抗体夹心ELISA方法。经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件：兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1：8000（浓度为3.531μg/ml）,抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1：800,酶标二抗的工作浓度为1：4000。与其他禽易感病毒（NDV、IBV、EDS-76V）等均没有交叉反应。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可应用于AIV的检测和流行病学调查。     

禽毒菌净对小白鼠免疫功能的影响

禽毒菌净是由中药经过精细加工提取而制成的中药冲剂 ,具有抗菌、抗病毒作用。采用常规方法研究了不同剂量的禽毒菌净对小白鼠免疫功能的影响。结果表明 :高剂量组小白鼠血清凝集素 (血清抗体稀释度为 19 10± 1 85 )与对照组 (10 80± 1 75 )比较差异极显著 (P <0 0 1) ,中剂量组 (16 0 0± 1 5 6 )与对照组(10 80± 1 75 )比较差异显著 (P <0 0 5 ) ;高剂量组血清中溶血素含量 (2 5 4 0± 6 7)U/mL与对照组 (139 0±2 9)U/mL比较差异极显著 (P <0 0 1) ,中剂量组 (2 4 5 0± 4 8)U/mL、低剂量组 (2 0 3 0± 3 7)U/mL与对照组 (139 0± 2 9)U/mL比较差异均显著 (P <0 0 5 ) ;对小白鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能 ,吞噬率高剂量组(76 0± 5 8) %与对照组 (33 0± 2 7) %比较差异极显著 (P <0 0 1) ,中剂量组 (6 1 0± 4 9) %与对照组比较差异显著 (P <0 0 5 )。禽毒菌净对大白鼠血浆蛋白 3个剂量组均高于对照组 ,高、中剂量组γ 球蛋白含量与对照组比较差异显著 (P <0 0 5 )。     

家蚕GATA转录因子BmGATA6的克隆、多克隆抗体制备及组织细胞定位

【目的】克隆家蚕（Bombyx mori）GATA转录因子BmGATA6,将其在原核细胞中进行表达,纯化重组蛋白,多次免疫小鼠获得BmGATA6多克隆抗体,为进一步分析BmGATA6在家蚕变态发育中的功能提供抗体条件。【方法】解剖家蚕获得5龄第3天的各组织及4眠至熟蚕整个时期的中肠组织,在液氮中研磨为粉末,利用Trizol法提取RNA,体外反转录得到cDNA。基于家蚕BmGATA6的基因编码序列设计全长特异引物,并以BmActin3作为内参,进行家蚕5龄第3天各组织及4龄眠期至熟蚕期各时期的RT-PCR检测。设计原核表达引物,扩增原核表达片段连接到pET32a载体上,构建原核表达载体,转化至BL21(DE3) Escherichia coil表达菌株。加入IPTG至终浓度分别为0.4、0.6、0.8、1.0 mmol·L^-1。在16℃条件下培养20 h和37℃条件下培养5 h分别进行BmGATA6蛋白诱导表达。选取最佳诱导条件进行BmGATA6蛋白的大量诱导,用镍柱亲和层析法纯化家蚕BmGATA6蛋白,经多次免疫昆明小鼠后,最终获得BmGATA6多克隆抗体。利用ELISA法测定鼠抗BmGATA6蛋白多克隆抗体的效价,通过Western blot检测BmGATA6抗体的特异性。以家蚕5龄第6天中肠的石蜡切片作为样本,通过免疫荧光对家蚕中肠组织中的BmGATA6蛋白进行亚细胞定位。【结果】家蚕GATA转录因子BmGATA6的cDNA全长4 011 bp,ORF长为1 974 bp,编码657个氨基酸,包括205 bp的5′非翻译区序列（5′UTR）和1 832 bp的3′非翻译区序列（3′UTR）。该基因位于15号染色体上,基因全长12 326 bp,为多外显子基因,共含有8个外显子和7个内含子,具有2个典型的GATA锌指结构域,分别位于第470-521和531-582氨基酸区域。RT-PCR结果显示BmGATA6在5龄第3天家蚕中肠中显著高量表达,其次在马氏管中有少量表达,而在其他组织中没有检测到BmGATA6的表达。同时RT-PCR结果显示BmGATA6在4龄眠期到熟蚕期的中肠组织中持续高表达。构建BmGATA6 原核表达载体,通过不同温度与IPTG浓度诱导发现,BmGATA6重组蛋白在16℃诱导主要存在于上清中,在37℃诱导主要存在于包涵体中。在0.6 mmol·L^-1的IPTG、16℃下诱导20 h为最佳条件,利用镍柱亲和层析法获得较纯的BmGATA6重组蛋白,并利用纯蛋白多次免疫昆明小鼠制备多克隆抗体,用ELISA法对抗体效价进行了检测,显示BmGATA6抗体效价均高达1﹕128 000。Western blot结果显示BmGATA6抗体能特异地识别家蚕BmGATA6蛋白,其大小约为75 kD,与预测大小相符。免疫荧光结果显示BmGATA6蛋白在家蚕中肠的各类细胞中均有较高表达,且定位于中肠细胞的细胞核中。【结论】成功制备了BmGATA6多克隆抗体,分析了其在中肠组织中的亚细胞定位情况,推测BmGATA6在家蚕中肠的生理变化过程中扮演着重要调控角色,为进一步探索BmGATA6在家蚕中的功能奠定了基础。     

长期口服阿卡波糖对SAMP8小鼠背海 马synaptotagminⅠ的影响

利用免疫组化法检测长期口服阿卡波糖对SAMP8小鼠背海马突触蛋白synaptotagminⅠ（SytⅠ）表达的影响。结果显示,SytⅠ在背海马CA1、CA3区和齿状回各层均有表达。老年对照组小鼠背海马各区SytⅠ的相对含量显著高于青年对照组（Ps<0.05）。阿卡波糖处理组小鼠背海马各区SytⅠ的相对含量显著低于同龄对照组（Ps<0.05）。上述结果提示长期口服阿卡波糖可减轻SAMP8小鼠背海马年龄相关性SytⅠ增加的水平。     

抗鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及其对应抗原表位分析

以纯化的原核表达的鸡贫血病毒结构蛋白为抗原，免疫6-8w的雌性Balb/c鼠, 经过三次免疫后，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，以纯化的蛋白为抗原进行ELISA检测，将阳性细胞孔经过三次有限稀释，共获得6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株。间接免疫荧光试验证实6株单抗可以与鸡贫血病毒感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应，Western blot结果显示单抗与杆状病毒表达的VP1重组蛋白可以发生特异性反应。利用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒进行亚型鉴定，结果表明6株单抗均为IgG1亚型，且所有单抗的轻链均为κ链。用单克隆抗体对分段表达的VP1蛋白进行免疫印迹分析，初步鉴定了筛选出的单抗所对应的抗原表位，其中有四株单抗识别的表位位于VP1 218-274位氨基酸之间，另外两株单抗识别的表位分别位于275-301位、324-369位氨基酸之间。     

斑马鱼SAA蛋白原核表达、抗体制备及菌结合试验

通过构建斑马鱼(Danio rerio)SAA原核表达载体,在大肠杆菌(E.coli)TB1中诱导表达并纯化获得了斑马鱼SAA融合蛋白,将纯化的斑马鱼SAA蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了特异性多克隆抗血清,并研究了斑马鱼SAA融合蛋白与细菌的结合能力及检测了抗体效价。结果表明,纯化的斑马鱼融合SAA蛋白能够与5种细菌直接结合,血清效价达到1∶2 000以上。     

脱落酸结合蛋白的纯化及抗体制备

以脱落酸（ＡＢＡ）为配基，分别通过其Ｃ１位和Ｃ４位偶联的亲和层析对玉米根尖中的膜ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＢＰ）进行了纯化，其中，用Ｃ１偶联的亲和柱具较高的纯化效率，对比了以尿素和硫氰化钾（ＫＳＣＮ）为解吸附剂的洗脱效果，发现使用后者（３ｍｏｌ／Ｌ）能得到纯净的ＡＢＢＰ；放射性配合结合分析（ＲＬＢＡ）结果表明，经过亲和纯化后的ＡＢＢＰ具有受体的基本特性－专一结合ＡＢＡ的能力，以Ｃ１－ＡＢＢＰ和Ｃ４－ＡＢ     

EM制剂对海兰蛋鸡免疫和蛋品品质的影响

用微生态制剂将饲料充分发酵,发酵料按20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%的比例与未发酵料混合全过程饲喂海兰蛋鸡,并设只饲喂未发酵料的对照组。分别在免疫传染性喉气管炎疫苗和新城疫Ⅳ系苗后测定T细胞在淋巴细胞中的比例和抗体水平。在此次试验中对照组与试验组及试验组间免疫器官重量差异不显著,这一点与以往的试验结果有所差异,但是T细胞在淋巴细胞中的比例和抗体水平上试验组与对照组却存在显著差异,这方面与以往试验结果相符。另外发现各处理组鸡蛋中脂肪含量和胆固醇含量差异显著,发酵饲料占总饲料量80%~100%时胆固醇含量下降到最低;对鸡蛋内蛋白质、干物质重和蛋重进行了测定,结果各处理组间其含量差异不显著;发酵饲料的脂肪含量和胆固醇含量都显著下降。但是随着发酵饲料比例的增大,蛋鸡的生产性能降低,全部饲喂发酵饲料的产蛋率比对照组下降了40%,甚至有的鸡只不产蛋,同时有较多的啄羽现象出现。