牛冠状病毒4H12/1D4单链基因片段在大肠杆菌中的表达

用ＥｃｏＲＩ酶切ＰＲ５Ｂ４质粒，采用“Ｖ”字形内槽电洗脱法回收约０．８０４Ｋｂ牛冠状病毒基因工程抗体４Ｈ１２／１Ｄ４单链基因片段，并将其插入载体质粒ＰＥＴ－１７ｂ的ＥｃｏＲＩ位点构成重组质粒ＰＥＴ－Ｄ４，将重组质粒转化ＤＨ５α感受态细胞，在ＩＰＴＧ的诱导下表达，细菌裂解物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳筛选，发现含ＰＥＴ－Ｄ４细菌经诱导新增一条约２８ＫＤα蛋白带，该蛋白带与设计基因工程抗体的大小相符，经光密度扫描，表达量约占菌体总蛋白的１４％     

猪转录因子Nanog高效表达、多克隆抗体制备及其应用

多能转录因子Nanog可维持干细胞的自我更新和多向分化潜能.为深入研究猪(Sus scrofa)Nanog在多能性调控网络的作用,本研究制备了鼠抗猪源Nanog多克隆抗体.首先,从猪肾脏中克隆Nanog基因CDS,再将CDS连接到pET32a质粒上,构建重组表达载体pET32a-Nanog.将重组载体转化大肠杆菌(Escherichia coli) Rosetta (DE3),经异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,优化最佳诱导时间、温度和IPTG浓度等表达条件,获得分子量为57 kD的Nanog重组蛋白.将纯化的Nanog蛋白,免疫C57BL/6小鼠(Mus musculus),6周后获得阳性抗血清,通过Western blot和免疫荧光检测其抗体效价及其特异性.结果显示,在28℃、8 mmol/L IPTG、诱导2.5 h的条件下,可获得高效Nanog重组表达;制备的鼠抗猪Nanog多克隆抗体能特异性识别猪诱导多能干细胞表达的Nanog蛋白.研究结果为猪多能性干细胞的研究提供了有力工具.     

可乐定ELISA检测试剂盒的研制及其性能评价

本研究通过制备可乐定完全抗原,免疫新西兰大白兔,得到特异性多克隆抗体,并和HRP标记的羊抗兔,构建间接ELISA检测法试剂盒,并进行性能测试评价。结果表明,吸光度百分比值与赛庚啶质量浓度的对数在0.1-8.1μg/L呈线性关系,相关系数R₂为0.977,半数抑制浓度(IC₅₀)为0.675μg/L,检测限为0.2μg/L,回收率为81% ～109%,具备良好的特异性,可用于动物尿样、血清和组织中的可乐定残留检测。     

小鼠急性缺氧后心肌肥大细胞的变化

应用组织化学方法对对照组、缺氧组、雌激素预处理缺氧组小鼠心肌肥大细胞的数量、活性及组化性质作了研究.结果表明,缺氧组小鼠肥大细胞和脱颗粒数目均极显著地高于同期对照组和雌激素预处理缺氧组(P<0.01),随着急性缺氧时间的延长,缺氧组小鼠肥大细胞和脱颗粒也呈直线上升趋势.雌激素预处理缺氧组小鼠的肥大细胞和脱颗粒极显著地低于同期缺氧组(P<0.01),而显著高于同期对照组(P<0.05).AB-S染色显示,心肌肥大细胞多数为黏膜肥大细胞,少数为结缔组织肥大细胞.试验结果为:肥大细胞参与急性缺氧造成心肌损伤的病理过程,雌激素对心肌缺氧损伤有保护作用.     

Effects of Monoclonal Antibody Against Porcine 40-kDa Adipocyte-Specific Membrane Protein on Endocrine Secretion in Pigs

The present study was to investigate the effect of monoclonal antibody against porcine 40-kDa adipocyte-specific membrane protein on endocrine secretion in pigs, in order to provide the evidence for application of this antibody to reduce excessive fat deposition in pig production. 40 Landrace×Saba pigs were randomly divided into 8 groups： 2 control groups were given saline with 10 mL, respectively, and the 6 treatment groups were given monoclonal antibody against porcine 40-kDa adipocyte-specific membrane protein with 0.1, 0.5, and 1.0 mg ·kg^-1 body weight at 15 or 60 kg body weight, respectively, all treatments were performed by intraperitoneal injection. The results showed that this monoclonal antibody could significantly reduce serum insulin level and increase levels of serum growth hormone （GH）, insulin-like growth factor-1（IGF-1）, triiodothyronine （T3）, and tetraiodothyronine （T4） either at 15 or 60 kg body weight injection. However, more marked effect was observed at 15 kg body weight treatment. Moreover, the dose-dependent effect of this monoclonal antibody on endocrine secretion was also observed. This result revealed that this monoclonal antibody increased secretion of hormones regulating fat lysis and reduced secretion of hormones regulating fat synthesis, suggests the reduction of porcine excessive fat deposition by this monoclonal antibody was carried out through affecting hormones regulating fat metabolism.     

热应激小鼠胚胎着床模型的建立

模拟夏季高温环境对孕鼠的应激作用,建立热应激影响昆明白小鼠胚胎着床的模型。试验设为对照组(23℃±2℃)、40℃和42℃应激组(小鼠妊娠1～4d,分别应激2h),比较观察妊娠5、6、7d小鼠胚胎着床数及子宫状况和产仔数。结果表明,与对照组相比40℃和42℃应激组妊娠5d(11.00±2.65、10.00±2.12vs15.00±1.58,P0.05)、6d(11.40±3.21、10.60±2.30vs 15.00±0.71,P0.05)、7d(11.00±2.55、11.00±1.58vs 15.60±1.67,P0.05)胚胎着床率显著下降,产仔数(8.60±1.14、8.40±1.82vs 11.40±1.82,P0.05)也显著下降;且相比对照组其着床位点均较少且分布失衡。40℃和42℃应激组之间无显著差异,以42℃应激组影响相对较大。可见,胚胎着床前孕鼠连续4d40℃、42℃应激2h,可显著影响小鼠的繁殖能力。42℃可作为影响小鼠胚胎着床的热应激模型。     

小鼠鼻粘膜接种伤寒杆菌Fe-SOD的抗体应答

目的：观察小鼠鼻腔接种伤寒杆菌的Fe—SOD后血液和粘膜系统的抗体应答。方法：用IL-1作为佐剂,将伤寒杆菌的Fe—SOD经鼻腔接种小鼠,检测小鼠血液及肠液中的抗体应答。结果：当用IL-1作为佐剂时,经鼻腔接种伤寒杆菌Fe—SOD的小鼠血液和肠液中可产生高水平特异性IgG和IgA类抗体;而腹腔注射仅在血液中产生高水平特异性IgG抗体。结论：用IL-1作为佐剂,伤寒杆菌Fe—SOD经鼻腔接种后可引起小鼠粘膜系统和血液中的抗体应答。     

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体

酶标抗原Dot－ELISA检测鸭肝炎病毒抗体@杨奎@陈溥言...