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21.
AIM:To establish the monoclonal antibody against human B lymphocyte stimulator (hBLyS) by DNA immunization and analyse its characterization. METHODS:The 858 bp DNA fragment of hBLyS was cloned into pcDNA3 plasmids. The cloned insert was identified by both sequence analysis and double digestion of the recombinant plasmid with restriction enzymesXho Iand EcoR I. After the splenocytes from BALB/c mice immunized with the recombinant plasmid of pcDNA3/hBLyS were fused with myeloma cells SP2/0,the hybridoma which can produce monoclonal antibodies against hBLyS were obtained. The specificity of anti-BLyS monoclonal antibody from hybridoma was verified by ELISA, Western blot and flow cytometry. RESULTS:The recombinant mammalian cell expression vector of pcDNA3/hBLyS was constructed,the sequence of the insert gene was identified to be the sequence encoding hBLy S antigen. The culture supernatants of hybridoma 9c10 were tested to be the monoclonal antibody with specificity against hBLyS on human peripheral blood CD3+T cell activated by hIFN-γ by ELISA,Western blot and flow cytometry.CONCLUSION:The monoclonal antibodies against hBLyS with high activity and specificity have been established successfully, and will be an useful tool in the studies of relationship between hBLyS and human autoimmunity diseases. 相似文献
22.
D. Boscia H. Zeramdini M. Cambra O. Potere M.T. Gorris A. Myrta B. Di Terlizzi V. Savino 《European journal of plant pathology / European Foundation for Plant Pathology》1997,103(5):477-480
A monoclonal antibody to an Albanian isolate of plum pox potyvirus (PPV) was obtained (MAbAL), that specifically recognized strain M of this virus. The specificity of MAbAL, assessed by comparative ELISA on 130 PPV isolates of different geographical origin, 22 of which were also tested by comparative IC-PCR, gave consistent and highly reproducible results. MAbAL seems to be elicited by a stable surface determinant that makes it particularly suitable for successful use under a wide range of conditions. MAbAL is an useful addition to the panel of PPV-specific MAbs available to date. 相似文献
23.
重组鸡IL-2增强鸡四联灭活苗免疫效果的研究 总被引:10,自引:2,他引:10
使用在原核表达系统中表达的重组鸡白细胞介素 2 (IL 2 )蛋白 ,经过初步的分离纯化 ,与鸡新城疫 禽流感 法氏囊 传染性支气管炎四联油乳剂灭活苗同时使用 ,检测其对疫苗的免疫增强效果。试验共分 5组 ,每组 1 0只鸡。其中对照组只注射四联油乳剂灭活苗 ;4个试验组 ,在注射疫苗的同时分别注射重组鸡IL 2蛋白 0 0 5mg、 0 0 1mg、 0 1 5mg、 0 2 0mg。试验组与对照组同时各注射新城疫等多联油苗 0 5mL。采用HA、HI试验测定鸡新城疫、禽流感抗体滴度。结果表明 :重组鸡IL 2对该四联油乳剂灭活苗有较强的免疫增强作用。以第 3、 4组的增强效果较为明显 ,其中对鸡新城疫病毒和禽流感抗原的抗体效价 ,与对照组相比分别提高 2 42 8和 2 2 3 0个滴度。重组鸡IL 2在使用的过程中 ,没有发现任何毒副作用 ,证明是一种安全高效的免疫增强剂。 相似文献
24.
研究选择21周龄新扬州鸡种公鸡135只,随机分成9组。采用两因子析因设计,分别设粗蛋白质水平为17%、14%和11%,钙水平为3.3%、2.3%和1.3%,构成9种日粮处理。比较在繁殖期全程饲喂不同粗蛋白质和钙水平日粮对种公鸡新城疫水平的影响,结果表明:日粮粗蛋白质水平对免疫后15、30天公鸡体内的抗体水平有显著影响(P<0.05),对免疫90天的水平有极显著影响(P<0.01);日粮钙对免疫后30天的抗体水平有极显著的影响(P<0.01);二者的交互作用对它影响不显著(P>0.05);低蛋白低钙组抗体水平显著高于高蛋白高钙组(P<0.05)。 相似文献
25.
细胞松弛素B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
目的 探讨细胞松弛素 B浓度对小鼠卵母细胞去核效果的影响。方法 常规超排 KM小鼠获卵母细胞 ,将有明显第一极体的卵母细胞放入含有 5× 10 - 3、1× 10 - 2 、2× 10 - 2 g/ L CB的成熟培养液中孵育 15 min,采用盲吸法去核 ,去核后的卵母细胞放入含 5× 10 - 3g/ L Hoechst33342的成熟培养液中染色 15 min,在荧光显微镜下检查去核的效率。结果 CB组去核率可达 88.2 % ,而对照组去核成功率仅达 2 9.7% ,两者的去核效果统计学上有显著差异 ;同时 CB的浓度过高会影响去核的效果 ,使卵母细胞的破溃率升高。结论 CB有利于去核 ,同时卵胞膜可以借助磷脂双层的游动性而很快得到修复 ;高浓度的 CB对卵胞膜作用过于强烈 ,细胞骨架严重破坏 ,磷脂双层结构的弹性和粘性减弱 ,修复能力降低 ,影响胚胎的构建。 相似文献
26.
从鼠的肝脏组织中提取总 RNA,采用 RT- PCR获得了鼠层粘蛋白 ( laminin)α5链的 E3 ( L G4 - 5)、L G4 和 L G5等 3个基因片段 ,与 NCBI数据库参考序列相比 ,同源性在 99%以上。将 E3 ( L G4 ,5)、L G4 和 L G5定向克隆到原核高效表达载体 Pet- 2 8a中 ,构建 Pet- 2 8a- E3 、Pet- 2 8a- L G4 、Pet- 2 8a- L G5等 3个原核表达质粒。将表达质粒转化表达受体菌 BL2 1中 ,IPTG诱导表达。收集菌液进行 SDS- PAGE电泳、Western- blotting分析 ,结果显示 ,这 3段基因在原核细胞中成功表达 ,薄层扫描显示表达蛋白占细胞总蛋白的 2 0 %以上。大量提取包涵体 ,纯化后免疫家兔 ,8周后得多克隆抗体 ,间接 EL ISA在抗体稀释到 1∶ 1 2 80 0时仍为阳性 相似文献
27.
The present study examines the contribution of the nucleus to meiotic competence in mouse oocytes that were reconstructed using nuclear transfer. Three types of reconstructed oocytes were produced: MP‐GV, by transplanting the male pronucleus (MP) into germinal vesicle (GV) stage oocytes; 3T3‐GV, by transplanting the nucleus of a National Institute of Health (NIH) 3T3 cell into a GV stage oocyte; and 3T3‐MII, by transplanting the nucleus of an NIH 3T3 cell into a metaphase II (MII) stage oocyte. The fusion rates differed, but not significantly, in the MP‐GV, 3T3‐GV, and 3T3‐MII groups (77, 63, 56%, respectively). Then, meiotic competence was compared in MP‐GV, 3T3‐GV and non‐manipulated GV stage oocytes as a control. Nuclear envelope breakdown occurred in all the reconstructed oocytes, as well as the control ones. The percentage of first polar body extrusion differed between the MP‐GV (100%), 3T3‐GV (72%), and control (67%) groups. DNA staining with Hoechst 33342 revealed that in the MP‐GV‐group oocytes that had reached MII stage, the chromosomes were condensed and aligned in a regular array similar to the normal metaphase plate. By contrast, in 3T3‐GV group oocytes, the condensed chromosomes were irregularly scattered in the cytoplasm. These results suggest that the donor nucleus affects meiotic competence in reconstructed oocytes. 相似文献
28.
29.
30.