抗李斯特菌特异单抗试剂的研制及应用

用１％福尔马林灭活单核细胞增生李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）Ｇ１９５１３０ｍｉｎ制成免疫原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，获得３株高度特异的针对单核细胞增生李斯特菌、无害李斯特菌和格氏李斯特菌的单克隆抗体，分别命名为ＬＪ１０Ａ、ＬＢ５、ＬＭ１１。选择其中１株ＬＪ１０Ａ作为包被抗体和酶标抗体，建立了快速、敏感、特异的检测该菌的单抗夹心ＥＬＩＳＡ方法。该方法对单核细胞增生李斯特菌的最小检出量为５×１０５，模拟样品能检出５００ｃｆｕ／ｋｇ样品，且４０ｈ内能报告结果。通过检测２４０份肉样和８５０份奶样并与常规方法平行相比较，该方法的敏感性和特异性分别达到１００％和９６．９％。     

老化秸秆生物炭对诺氟沙星吸附特性的研究

为研究老化秸秆生物炭的性质及对水中诺氟沙星的吸附特性,本研究将新鲜生物炭进行自然老化、冻融循环老化和高温老化,通过元素分析、扫描电镜和红外光谱分析老化前后生物炭的组成和结构特性变化,研究老化生物炭对诺氟沙星的吸附机理以及pH、离子类型和离子浓度对吸附效果的影响。结果表明：不同老化方式均使生物炭的C元素含量降低,O元素含量显著增加,极性增加,芳香性降低,其中高温老化影响最大。高温老化使生物炭表面的—OH和C=C明显减少,冻融循环老化使—OH数量增加,自然老化对生物炭表面官能团影响较小。老化使生物炭表面破损、孔道塌陷,生物炭上的吸附点位被阻塞,不利于对诺氟沙星的吸附。老化前后生物炭对诺氟沙星的吸附更符合准二级动力学模型,等温吸附拟合发现,Langmuir模型能更好地拟合诺氟沙星在生物炭上的吸附过程。自然老化、冻融循环老化和高温老化分别使生物炭的吸附量降低了5.50%、7.70%、14.80%;在背景液pH 3.0~11.0范围内,老化前后生物炭对诺氟沙星的吸附量随pH增大先升高再降低,当pH为7.0时,吸附量达到最大值。阳离子价态越高,离子浓度越大,老化后生物炭对诺氟沙星的吸附量越小。研究表明,老化对生物炭的理化性质和吸附抗生素的能力均有影响,因此在使用生物炭去除目标污染物时需要考虑环境因素的影响。     

蔬菜中克百威残留的ELISA法测定技术研究

以合成人工抗原复合物免疫新西兰大白兔,制备了特异性的兔抗BFNH多克隆抗血清。用间接ELISA法测得抗体血清的最高效价可达1:32000。并以BFNH-卵清蛋白(OVA)复合物,作为抗原包被96孔板,建立了间接竞争ELISA法,用于蔬菜中的克百威残留分析。通过实验确定该方法的工作条件和标准曲线,并测定了抗体血清与其它各种氨基甲酸酯类农药的交叉反应率。实验结果表明,抗体血清对其它氨基甲酸酯类农药的交叉反应率均小于10%。该方法对克百威纯品的检测限为0.1μg·ml-1,线性检测范围为102～10-3μg·ml-1。该方法测定结果与高效液相色谱测定结果相一致。     

免疫禽脑脊髓炎弱毒疫苗后肉种鸡琼扩抗体的动态变化

为探讨肉种鸡免疫禽脑脊髓炎(AE)弱毒疫苗的抗体变化规律及其与后裔雏鸡对禽脑脊髓炎病毒(AEV)易感性的相互关系，本研究用琼脂扩散试验对14周龄免疫禽脑脊髓炎(AE)弱毒疫苗的5群艾维茵父母代肉种鸡，其中1群于34周龄加免AE油乳剂灭活苗，从20至60周龄对其AE抗体进行动态监测。结果发现：1)单免弱毒疫苗的4群种鸡，其AE抗体阳性率呈双低谷曲线变化规律，32周龄之前较高，为95％～83.4％；36～40周龄降至67.5％～71．1％，最低可至56．7％；44周龄转而升至80％以上，48～52周龄再度降至59．1％～67．5％：56周龄以后又呈上升(84．2％)。2)AE抗体低谷期间种鸡产蛋率明显降低，其后裔雏鸡AE母源抗体明显降低，而且衰减快。14日龄颈部皮下注射AEV Van Roekel，50％的雏鸡在攻毒后13d发生AE。有些雏鸡在14～21日龄自然发生AE。3)加免AE油乳剂灭活苗可避免种鸡AE抗体低谷期的出现。以上结果表明，在我国养鸡实际生产中种鸡开产前免疫1次AE弱毒疫苗，不足以为整个产蛋期提供有效保护，AE弱毒疫苗和灭活油苗联合应用是预防AE的有效措施。     

安徽省猪伪狂犬病毒的分离鉴定及其主要毒力基因分子特征

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒(porcine pseudorabies virus,PRV)引起的一种急性、热性传染病。自2011年底以来,PRV发生了变异,传统的PRV弱毒疫苗已不能对PRV变异株提供完全保护,这给我国PR防控带来了巨大挑战。为了解安徽省PRV流行特征及其主要毒力基因遗传变异情况。利用PCR技术、细胞接种试验、电子显微镜观察、间接免疫荧光试验及兔体接种试验等方法,对安徽省临诊病例中疑似PRV感染的病猪进行病原检测及PRV分离鉴定,并通过设计6对特异性引物对PRV分离株主要毒力基因(gE、gI、TK、gB、gC、gD)进行克隆及测序分析。2016—2018年安徽省临诊病例中共分离鉴定15株PRV;PRV分离株主要毒力基因序列均与2011年后国内PRV变异株同源性较高;与2011年前国内PRV经典株序列比对,PRV分离株gE、gB、gC及gD基因存在多个位点的一致性替换、插入或缺失,且gE、gC基因多位点突变位于其重要的抗原表位区。本研究分离的15株PRV均为变异株,变异株已成为安徽省主要的流行毒株。15株PRV分离株的gI、TK基因序列较为保守,而gE、gC蛋白抗原表位区域氨基酸的突变可能导致其毒力及抗原性发生改变。部分PRV分离株与邻近地区PRV序列同源性均为100%,可能与频繁跨省调运生猪、跨区引种等原因有关。     

南方古树腐朽菌的鉴别及治理

文章描述了中国南方15种古树腐朽菌子实体的形态特征,为园林工作者对病原菌的鉴定和防治提供参考.     

IBV S1蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

采用RT-PCR方法,以IBVM41毒株的S1基因为模板扩增出了大小为468bp的目的片段(命名为poly156S1),该片断保守性、抗原性较好。将获得的目的基因定向克隆到表达载体pET-32a-c(+)中,获得了重组质粒pET-32a-c(+)-poly156S1。将该重组质粒转入表达菌Origami(DE3)中,用IPTG进行诱导表达,获得了大小约为34KD的重组蛋白poly156S1。Western-blot证实该重组蛋白能与IBV阳性鸡血清发生特异性反应。用纯化好的重组蛋白poly156S1免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行单克隆抗体的制备,成功获得了针对M41S1蛋白的3株单克隆杂交瘤细胞8D2、8D6、10F9,其IgG亚类分别为IgG1、IgG2a、IgG2b,轻链均为κ型。按常规方法对各株单克隆杂交瘤细胞进行了小鼠腹水单抗的制备与纯化,并用以重组蛋白poly156S1为包被抗原的间接ELISA对纯化后的腹水单抗进行了效价测定,及其与重组蛋白poly156S1亲和力的分析。结果表明:腹水单抗8D2、8D6、10F9的ELISA效价分别达到1.78×218,1.37×221,1.31×216;单抗8D6与重组蛋白poly156S1的亲和力最高。Western-blot进一步证实单抗8D6与重组蛋白poly156S1具有良好的反应性。     

茶尺蠖核型多角体病毒多克隆抗体的制备及检测应用

以纯化的茶尺蠖核型多角体病毒(Ectropis obliqua nucleopolyhedrovirus,EcobNPV)作为抗原免疫大耳白兔,获得多克隆抗体,Indirect-ELISA效价为1∶51 200;工作浓度分别为EcobNPV 1∶1 600、兔抗血清1∶3 200。用所制备的多克隆抗体对提纯的多角体进行Western-blot分析表明制得的抗体对茶尺蠖核型多角体病毒有良好的特异性。应用于不同来源茶园昆虫多角体病毒分离株的检测,取得了理想的检测效果。     

矿物药超高压射流粉碎可行性研究

利用超高压射流技术对自然铜、滑石、龙骨、龙齿进行粉碎,测定超细粉平均粒径、比表面积、分布宽度(SPAN)、分散稳定性、休止角及松密度。与常规粉比较发现超细粉平均粒径减小了89.15%～93.72%,松密度减小了28.57%～40.40%,比表面积增大了4.282～11.160倍,休止角增大了0.072～0.458倍,滑石超细粉在羧甲基纤维素钠(CMC-Na)中的分散性较好。利用超高压射流技术粉碎矿物药是可行的,为该技术在粉碎领域的应用提供了依据。     

液相阻断ELISA在奶牛A型口蹄疫抗体水平检测中的应用

用液相阻断ELISA(酶联免疫吸附试验)方法对奶牛进行A型口蹄疫抗体水平进行调查,液相阻断ELISA方法在现实应用中对亚洲I型口蹄疫已经成熟,用同样的方法对A型口蹄疫抗体检测,探寻奶牛体内抗体消长规律,制定合理的免疫程序,从而指导奶牛A型口蹄疫的免疫。根据以往免疫经验来看,结果发现90日龄首免后,抗体滴度开始回升,免后21d回升到最高1:324(1:128),之后开始下降,28d后免疫抗体滴度回落至1:204,说明首免抗体维持时间较短,需要进行2免,2免后免疫抗体保护率可维持4个月,再进行3免,抗体滴度又很快回升,且维持较长时间。说明A型口蹄疫间隔28d进行2免,再间隔4个月进行3免,以后每隔4个月免疫1次。适时地加强免疫有利于牛群抵抗A型口蹄疫;FMD疫苗对育成、青年和成年期都有理想的免疫效果。