奶牛乳腺上皮细胞的原代培养

1材料与方法 1．1材料 1．1．1乳腺组织。从屠宰场选取健康的泌乳期奶牛,无菌手术切取乳腺实质组织,置于DMEM／F12完全培养液（含10％胎牛血清、100IU／ml青霉素和链霉素）中,尽快运回实验室。     

胞壁酰二肽对体外奶牛乳腺上皮细胞生长及胞内NOD2 mRNA表达的影响

【目的】奶牛乳房炎是奶牛养殖业中最为常见,同时也是带来经济损失最为严重的疾病之一,其主要病因是细菌感染。奶牛乳腺的固有免疫是抵抗病原菌入侵的第一道防线。NOD2是机体固有免疫模式识别受体核苷酸结合寡聚域(nucleotide-binding oligomerization domain,NOD)蛋白家族中的重要一员,通过识别其特异性配体胞壁酰二肽(muramyl dipeptide,MDP)——一种广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁中的成分,而参与抵抗多种病原菌入侵。奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMEC)除泌乳以外,还是奶牛乳腺的免疫屏障。本试验欲探究MDP对BMEC体外生长状态及胞内NOD2表达量的影响。【方法】选取健康泌乳中期荷斯坦奶牛乳腺腺泡为组织原材料,采用胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离BMEC;使用上皮细胞特异性表达的角蛋白-18(cytokeratin-18,CK-18)及成纤维细胞特异性表达的波形蛋白(Vimentin)抗体,通过免疫荧光技术对纯化后获得的细胞进行鉴定;将BMEC设为6个处理组,分别添加浓度为0(空白对照组)、1、5、10、15及20μg·mL~(-1)的MDP,24 h后显微镜下观察细胞状态,同时提取细胞RNA并反转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测BMEC中NOD2的表达量。【结果】(1)胶原酶Ⅰ消化法结合梯度浓度胰蛋白酶纯化法分离得到的细胞CK-18免疫荧光结果为阳性,而Vimentin反应为阴性;细胞生长状态良好。(2)空白对照组、1、5及10μg·mL~(-1) MDP刺激组的BMEC生长状态良好,无任何肉眼可见变化;15μg·mL~(-1) MDP刺激组可见少量的BMEC脱落;而20μg·mL~(-1)MDP刺激组可见大量BMEC脱落,漂浮,且即使仍贴壁的细胞,其形态也发生了变化。(3)与空白对照组相比,各刺激组细胞NOD2 mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,即刺激时间为24 h时,随着MDP浓度的增加,BMEC中NOD2受体mRNA的表达量逐渐增加(P0.05)。【结论】成功获得了纯度较好的BMEC,该细胞生长状态良好,可以用于后续试验;虽然BMEC中NOD2受体mRNA的表达量与MDP的刺激浓度呈正相关,但在保持BMEC生长状态正常的前提下,MDP体外刺激浓度应控制在10μg·mL~(-1)以下。这些结果提示我们:当病原菌入侵乳腺时,BMEC可以通过NOD2受体途径参与免疫防御反应,但这种防御能力受细菌数量或毒力强度的影响。即在一定的细菌数量或毒力范围内,随着细菌数量的增加或毒力的增强,奶牛乳腺的免疫防御反应也增强,进而清除外来病原菌;而当细菌数量或毒力强度超过一定范围时,乳腺组织受到严重损伤,免疫防御屏障也随之崩溃,奶牛乳腺局部甚至全身将呈现出明显的临床症状。     

生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响

将泌乳期大鼠分为对照组、CS组和SS组,利用RT-PCR法对大鼠乳腺组织斯钙素基因进行检测,分析生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响。结果表明:乳腺中有STC1表达,无STC2表达。生长抑素对泌乳期大鼠乳腺斯钙素基因表达起下调作用,半胱胺作用相反。以上结果提示生长抑素和半胱胺可能参与乳腺钙代谢的调节,且通过STC1发挥作用。     

中华蟾蜍蝌蚪变态过程中甲状腺的组织学变化

【目的】研究中华蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪在不同发育阶段甲状腺的组织学变化。【方法】以处于变态高峰前后5期（28,33,38,42,46期）的中华蟾蜍蝌蚪为试验材料,用Motic BA300光学显微镜对各个发育时期蝌蚪的甲状腺进行组织学观察,测定蝌蚪的全长、体质量和肝质量等形态指标,并分析这些形态指标与甲状腺直径、滤泡平均直径及最大直径的线性相关性。【结果】在28期时,中华蟾蜍蝌蚪甲状腺出现但无分泌甲状腺激素的功能;33期时,甲状腺具备了分泌甲状腺激素的能力;此后甲状腺进一步发育,在蝌蚪前肢展开期甲状腺活性达到最强;至尾完全吸收期,甲状腺机能减弱。蝌蚪全长、体质量及肝质量与甲状腺直径及滤泡直径呈正线性相关。【结论】具有分泌机能的甲状腺出现的发育时期,与两栖动物变态类型相关;分泌高峰期出现的发育时期与幼体持续时间密切相关。中华蟾蜍蝌蚪的全长可以直观地反映其甲状腺的机能活性。     

日本海马(Hippocampus japonicus)脑垂体的组织学观察

本文应用组织学方法对日本海马(Hippocampus japonicus)脑垂体的形态结构和激素分泌细胞的鉴别作了研究。结果表明日本海马脑垂体属前后型。由腺垂体和神经垂体构成。腺垂体分为前腺垂体(RPD),中腺垂体(PPD)和后腺垂体(PI)。用O.F.G染色,腺垂体内可鉴别出七种激素分泌细胞,其中RPD内两种:促肾上腺皮质激素(ACTH)分泌细胞和催乳激素(PRL)分泌细胞;PPD内三种:生长激素(GH)分泌细胞、促甲状腺激素(TSH)分泌细胞和促性腺激素(GTH)分泌细胞;PI内两种:促黑激素(MSH)分泌细胞和一种机能不明的细胞。神经垂体狭窄,长带状位于整个腺垂体的背上方。     

陆地棉和野生斯特提棉种间异源六倍体的合成与性状鉴定

陆地棉(Gossypiumhirsutum)是世界上重要的栽培棉种,野生斯特提棉(G.sturtianum)含有陆地棉所缺乏的许多优质基因。本研究通过陆地棉和斯特提棉的远缘杂交和染色体加倍,获得了自交可育的后代植株,对其进行流式细胞倍性检测和花粉母细胞减数分裂观察,筛选出2株染色体组完整的异源六倍体植株。统计鉴定表明,六倍体和亲本及三倍体比较,叶形介于双亲之间,叶面积增大,保卫细胞中叶绿体数明显增多;远缘杂种与亲本在花的表型性状方面差异明显,六倍体的花粉粒直径大于亲本和三倍体;六倍体棉纤维为白色,长度小于母本陆地棉,父本斯特提棉的种子腺体延缓发育性状在异源六倍体中得到表达。这些结果证明通过远缘杂交和加倍成功获得了陆地棉与斯特提棉间可育的异源六倍体新种质,为棉花遗传育种研究提供了有价值的材料。     

锯缘青蟹促雄腺发育的组织学研究

采用组织切片技术，以OlympusBH-2型显微镜对锯缘青蟹(Scylla serrata)促雄腺的发育进行观察。结果显示，促雄腺附着于射精管近末端，发育过程可分为4期：Ⅰ期促雄腺短小，腺细胞数量少；Ⅱ期促雄腺呈明显的索状；Ⅲ期促雄腺体积达到最大，一些部位膨大增生；Ⅳ期促雄腺不再生长，腺体急剧退化。腺细胞具有2种类型：A型细胞，核圆、异染色质少、胞质染色浅；B型细胞，核扁平、异染色质多，细胞染色深、界限不清晰，有时细胞质消失。促雄腺发育过程中，A、B型细胞数量、比例发生变化。B型细胞为A型细胞完成分泌后的存在形式，B型细胞比例反映了促雄腺分泌活动的状况。锯缘青蟹促雄腺发育和精巢成熟具有一定的相关性。     

地衣芽孢杆菌对热应激公兔甲状腺和甲状旁腺组织的影响

将成年塞北兔公兔随机分成3组:常温组、热应激组(基础日粮)和地衣芽孢杆菌组(基础日粮+1 000 mg/kg地衣芽孢杆菌),常温组温度为20?25℃,其他2个组人工模拟夏季温度.在试验期间测定血浆皮质醇含量.试验结束后测定甲状腺质量,计算甲状腺指数;观察光镜下甲状腺组织、透射电镜下甲状腺滤泡上皮细胞和甲状旁腺嗜酸性细胞...     

魁蚶亲贝控温促熟试验

首次研究了魁蚶亲贝性腺室内控温促熟技术，３月中旬亲入池，人工控温，强化饲育２５－２８天，４月中下旬性腺成熟，排放精卵，比自然界提前３个月左右，水温１６℃以上是魁蚶亲贝性腺成熟的迅速期。１９９１年１１月专家鉴定认为，本研究属国内首次，居国内先进水平。     

转基因技术在动物营养学中的应用及发展前景

转基因技术的研究和应用已渗透到生命科学的各个领域,动物营养学的发展需要在分子水平上分析及解释营养物质对动物机体的变化调控,如生长发育、新陈代谢、遗传变异、免疫与疾病等。本文综述了转基因动物在动物营养学中的应用:改善生产性状,提高生产性能;建立遗传性疾病、肿瘤和其它疾病的实验动物模型;增强抗病力;利用转基因动物生产药用蛋白质。