抑制素研究进展

抑制素是一种主要由性腺分泌的糖蛋白激素,对ＦＳＨ起负反馈调节物作用。由于其具免疫原性,外源抑制素通过免疫调节可降低体内抑制素的生物活性,导致ＦＳＨ浓度升高,使排卵率和产仔数增加,近年来其作为多胎疫苗的角色已越来越为人们所重视。本文介绍了抑制素的生物学特性,还回顾了抑制素的几种主要测定方法,着重综述了抑制素对雌、雄动物生殖机能的调节作用。     

抑制素基因免疫对小鼠生殖的影响

用编码抑制素α（1－32）的基因与pcDNA3.1真核表达质粒进行重组，构建抑制素基因疫苗NH。将30只2周龄ICR小鼠随机分为3组（每组10只），试验Ⅰ，Ⅱ组分别经脂质体介导肌肉注射iINH15μg()0μL,25μg(100μL)，对照组注射免疫空载体pcDNA3.115μg(100μL)。首次免疫后间隔3周加强免疫1次。小经pINH基因免疫后，用ELISA可从血浆中检测到抑制素抗体，表明pINH可在活体肌细胞内表达，表达产物具有制素抗原性，能激活免疫系统产生抑制素抗体。抑制素抗体P／N＞2视为阳性，阳性率为30％（6／20）。抑制素抗体阳性小鼠与阴性小鼠的产仔数，初生重和窝重等没有显著差异（P＞0．05）。抗体阳性组首次免疫后，雌鼠血浆FSH浓度略有升高，经过加强免疫后显著升高（P＜0．05）。由此可以看出，抑制素基因免疫可以诱导产生抗抑制素抗体，并促进促卵泡素的分泌。     

牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质的诱导表达及鉴定

为表达纯化出免疫原性良好的牛Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,本试验通过对菌液IPTG诱导时间、温度以及诱导浓度的摸索确定了蛋白诱导最佳表达条件,利用重组蛋白小量表达确定目的蛋白以可溶性或包涵体蛋白存在,重组蛋白大量表达纯化出大量目的蛋白,通过Western blot鉴定目的蛋白免疫原性。结果表明：使用1MIPTG,18℃诱导表达18h可诱导表达出重组抑制素蛋白,经重组蛋白小量表达确定目的蛋白以可溶性形式存在,Western blog试验表明重组蛋白有较高的免疫原性。本试验诱导表达出可溶性、免疫原性较高的Inhibin pET32a-matpeptide重组蛋白质,为后续制备抗抑制素α亚基抗体奠定了基础。     

抑制素主动免疫对大鼠生殖激素及卵巢发育的影响:Montanide和Freund’s佐剂效应比较

本研究采用新疆细毛羊抑制素成熟区序列重组融合蛋白(roINH)作为免疫原,以Montanide (MON)和Freund's (FA)作为佐剂,主动免疫SD大鼠,测定生殖激素及卵巢发育情况,评价佐剂效应.选用72只9～10周龄性成熟雌性SD大鼠,随机分为3组,分别皮下注射生理盐水(对照组)、roINH+ MON(MON组)和roINH+FA (FA组).各组大鼠每20 d免疫1次,连续免疫3次.结果,MON组产生的抗体滴度显著高于FA组(P＜0.05);与对照组相比,注射roINH+MON和roINH+FA均可极显著提高大鼠血清FSH平均含量(P＜0.01),显著提高P峰值(P＜0.05),而FSH及P平均含量及峰值在2个免疫组间无显著差异(P＞0.05);LH含量和峰值在2个试验组间无显著差异(P＞0.05); MON和FA组成熟卵泡数无显著差异(P＞0.05),但均显著高于对照组(P＜0.05);MON组脓包直径及炎症反应小于FA组.结果表明,应用roINH作为免疫原并配以MON或FA佐剂免疫大鼠均能取得较好的免疫效果,且MON佐剂炎症反应小于FA佐剂.     

抑制素基因疫苗的构建

使用猪抑制素α亚基上的第1－32位所基酸所对应的DNA片段作为目的基因，并与乙肝表面抗原基因串联，插入原核表达质粒（pUC18)中，构建重组原核表达质粒，经过在大肠杆菌中扩增后提取目的基因片段，手稿真核表达质粒(pcDNA3.0）中，构建重组真核表达质粒，经过扩增和提取，并经过测定获得了抑制素基因疫苗。     

抑制素对雄性动物生殖的影响

抑制素主要是由雄性动物的睾丸支持细胞和雌性动物的卵泡颗粒细胞所分泌的一种糖蛋白。它由2个二硫键将1个α亚基和1个β亚基连接而成,分子量3.1万～10万。不同种属动物的抑制素,其分子结构极为相似。公畜抑制素主要是选择性地抑制FSH的分泌,并与睾酮具有协同作用。     

猪卵泡抑制素α模拟肽基因在大肠杆菌中的融合表达

克隆了猪抑制素 α1 - 3 2 基因 (简称抑制素基因 ,INH) ,与 p ET- 32 c载体的 Thioredoxin基因重组 ,表达的 INH-Thioredoxin融合蛋白相对分子质量约 140 0 0 ,在 E.coli DH5α中表达效率较高。在 IPTG浓度为 0 .34 0 m mol/L、诱导16 .8h条件下 ,有最大表达量 ,电泳扫描净灰度达 38.78%。     

抑制素主动免疫提高山羊排卵率

将８只关中奶山羊（白羊）和８只山东青山羊（青羊）分为２组，每组含有白羊和青羊各４只。试验组山羊以抑制素α亚单位１～３２片段人血清白蛋白偶合物为抗原进行主动免疫，对照组山羊则以人血清白蛋白为抗原进行免疫。３次免疫注射时间间隔分别为２０ｄ和３０ｄ。在末次免疫注射后１个月和２个月时，用腹腔镜检查试验羊卵巢上的黄体数。试验组白羊和青羊平均每只羊分别有１．８个黄体和２．４个黄体，对照组分别有１．６个黄体和２．２个黄体，说明抑制素主动免疫可以提高山羊的排卵率。     

抑制素免疫对羊生殖的影响

抑制素是一种主要由动物性腺（睾丸的支持细胞和卵巢的颗粒细胞）分泌的一种异二聚体糖蛋白激素,由两个二硫键连接两个不同的亚单位（α和β）构成。抑制素对垂体ＦＳＨ的分泌和／或合成具有选择性地抑制作用。抑制素免疫中和技术能特异性地刺激ＦＳＨ分泌,进而促进配子生成,提高动物繁殖力。西方把抑制素免疫对羊排卵率、产羔数、初情期、超数排卵和公羊繁殖性能的影响作一综述。     

Polymorphism of inhibin βB gene and its relationship with litter size in sheep

The inhibin β_B (INHBB) gene was studied as a candidate gene for the prolificacy of Small Tail Han and Hu sheep. According to the sequence of exon 1 and 2 of bovine INHBB gene, six pairs of primers were designed to detect single nucleotide polymorphisms of exon 1 and 2 of INHBB gene in both high (Small Tail Han and Hu sheep) and low prolificacy breeds (Dorset, Texel and German Mutton Merino sheep) by polymerase chain reaction‐single strand conformation polymorphism (PCR‐SSCP). Three pairs of primers (primers 1‐1, 1‐2 and 1‐3) were used to amplify the exon 1, and others (primers 2‐1, 2‐2 and 2‐3) to the exon 2. Only the products amplified by primer 2‐3 displayed polymorphism. For primer 2‐3, three genotypes (AA, AB and BB) were detected in Hu sheep and only AA genotype in other breeds. In Hu sheep, frequency of AA, AB and BB genotypes was 0.636, 0.046 and 0.318, respectively. Sequencing revealed 276A > G mutation (based on the amplification region of primer 2‐3) which did not cause any amino acid change because it lay in the 3′ untranslated region. The ewes with genotype BB had 0.58 (P < 0.01) lambs more than those with AA in Hu sheep.