不同发育时期鼠胚对一步细管内冷冻一解冻耐受性的研究

本试验采用一步添加防冻剂（１０％甘油）、１２．５％蔗糖一步细管内脱除甘油，３７℃温水快速解冻法，对３９３枚处于不同发育时期的优良胚胎做了冷冻研究，旨在探索不同发育时期的胚胎对一步细管内冷冻解冻耐受性存在的差异，为哺乳动物胚胎冷冻和移植提供资料。解冻后体外培养结果表明，晚期桑椹胚（包括致密桑椹胚和致密后桑椹胚两个阶段）的抗冻能力最强，体外发育率致密桑椹胚为８０．０％（３２／４０）、致密后桑椹胚为７８．０％（３２／４１）；早期桑椹胚和早期囊胚次之，体外发育率为６２．２％（２８／４５）和６６．１％（３９／５９）；囊胚和扩展囊胚的抗冻能力最低，体外发育率仅为５１．６％（３１／６０）和５４．５％（１８／３３）。     

冰鲜和解冻鲫鱼的导电特性

运用伏安法测定了不同频率下冰鲜和解冻鲫鱼的阻抗 ,分析了其阻抗随频率变化的特点。结果表明 :冰鲜和解冻鲫鱼的阻抗均随频率增大而减小 ,频率从 1kHz增大到 16kHz时 ,冰鲜 1,3,10d鲫鱼的阻抗相对变化值为 5 1% ,4 8 5 %和 33 9% ,冷冻 1,3,10d后的解冻鲫鱼的阻抗相对变化值为 16 0 % ,14 3%和 14 4 % ;冰鲜鲫鱼的阻抗相对变化值明显大于解冻鲫鱼。依据阻抗相对变化值 >2 0 %或 <2 0 %可以区分冰鲜和解冻鲫鱼。     

东方田鼠精子及冷冻复苏精子体外受精的研究

本文采用Nakagata法,对东方田鼠精子及冷冻复苏后的精子进行体外培养、体外受精,结果显示:东方田鼠精子浓度约为106～108个·μL-1,精子活力冷冻前约为20%～80%,冷冻后约为1%～50%,精子经冷冻复苏后的体外受精率为10%～50%,与冷冻前的体外受精率80%～95%相比,差异显著。     

小鼠冻胚分割试验

研究了分割所用溶液、冷冻前胚胎发育时期和分割后将半胚是否装入透明带对冻胚分割效果的影响。结果证明:①将解冻囊胚分割后,无论是否将半胚装入透明带对冻胚分割的效果均无显著影响(P>0.05);②在PBS中分割解冻桑椹胚和囊胚的效果无显著差异(P>0.05);③与分割解冻桑椹胚相比,在蔗糖液中分割解冻囊胚可显著提高冻胚分割效果(P<0.05)。将在蔗糖液中分割冻囊胚获得10对半胚移植于5只受体,结果有2只妊娠,共获得半胚仔鼠6只,其中2对为同卵双生。     

海藻糖替代部分甘油对延边黄牛冻融精子质量的影响

【目的】探讨是否可以通过补充海藻糖来降低冷冻保护剂中甘油的浓度,从而提高冻融精子的质量。【方法】分别用6%甘油(Ⅰ组)及3%甘油+0、50、100和150 mmol/L海藻糖(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组)处理精子,用精子-微生物动(静)态图像检测分析系统(CASA)检测冻融精子的活力、质膜完整性和顶体完整性及动力学相关参数,筛选出最佳海藻糖处理浓度用于后续试验。通过Western blotting方法检测精子蛋白酪氨酸磷酸化水平评价精子获能状态,Hoechst 33342/PI/JC-1联合染色法检测精子的活率及线粒体膜电位,色霉素A₃(CMA₃)染色法检测精子DNA的完整性,部花青540(M540)和Yo-Pro-1染色检测精子膜脂质紊乱水平。【结果】与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子的活力、质膜完整性、顶体完整性以及曲线速度(VCL)和直线率(STR)均显著下降(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组组精子的活力、VCL、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、直线性运动(LIN)和STR均显著升高(P<0.05)。因此,后续试验选用100 mmol/L海...     

猪冷冻附睾精子与体外成熟卵母细胞的体外受精

研究了不同解冻温度（39－41℃，58-60℃,69-71℃)和解冻方式（干解冻、湿解冻）对猪冷冻附睾精子解冻后的活力、存活指数以及受精能力的影响。结果表明，采用同一种解冻方式，经高温解冻的精液，虽然解冻后的活力较好，但活力却下降很快，精子的存活时间和存活指数均不如低温解冻的精液。采用同一种解冻温度，湿解冻所需的解冻时间相对短，解冻后精子活力相对低，但存活时间和存活指数相应优于对应的干解冻试验组。经低温解冻的精子，受精能力最强，精子的受精能力与解冻时间呈显著正相关（r=0.91613,P=0.0103).使用改良TCM199培养液，猪受精卵和颗粒细胞单层共培养能发育至早期桑椹胚。     

草鱼贮藏过程中导电特性变化规律的研究

运用物理特性-伏安法测定了不同频率下冰鲜和解冻草鱼的阻抗,分析在不同贮藏时间下阻抗的相对变化值(Q值)的变化特点。结果显示:从1 kHz增大到10 kHz,冰鲜和解冻草鱼的阻抗均随着频率的增大而减小,冰鲜草鱼的阻抗相对变化值(Q值)明显大于解冻草鱼。冰鲜草鱼在第1、2、4、7、10天的阻抗相对变化Q值分别为:28.89%、25.10%、17.01%、11.65%、10.37%,而冷冻7、14、30 d后解冻草鱼的最大Q值分别为4.34%、4.18%、4.63%。结果表明:以Q值10%为界限,快速鉴定冰鲜草鱼和解冻草鱼是基本可行的。     

黄芩苷、川芎嗪对小鼠体外培养胚胎冷冻-解冻及移植效果的研究

将中药有效成分黄芩苷(Baicalin,Bai)和川芎嗪(Ligustrazine,Lig)添加到小鼠2-细胞胚胎培养液中进行体外培养,比较其体外发育能力,并将体外发育的桑椹胚、囊胚进行2种程序常规冷冻.解冻后形态正常的桑椹胚、囊胚分别培养8～14 h、6～8 h,比较各组胚胎的冷冻-解冻发育效果及冷冻胚胎移植妊娠率和产仔率等.结果各试验组胚胎孵化率,Bai组(80.6%)、Lig组(78.3%)极显著高于对照组(51.8%)(P＜0.01).孵化胚胎细胞计数结果显示, Bai组(81.9±6.2)和Lig组(83.9±7.7)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P＜0.01);程序1和2的桑椹胚解冻囊胚发育率,以Bai、Lig组显著高于对照组;其囊胚解冻存活率,2个试验组均好于对照组.受体妊娠率、产仔率以及初生仔鼠、离窝仔鼠平均体重、离窝成活率等指标,各组间均无显著差异(P＞0.05),但以中药有效成分各组别均好于对照组.结果表明中药有效成分Bai和Lig能显著地提高小鼠 2-细胞胚胎体外发育能力,并有利于提高冷冻-解冻后移植胚胎的发育潜力.     

Rapid Multiparameters Approach to Differentiate Fresh Skinless Sea Bass (Dicentrarchus labrax) Fillets from Frozen-Thawed Ones

Food authenticity is one of the major issues in the mind of today’s consumers. The sale of frozen-thawed fish fillets under the “fresh fillet” label is considered as a commercial fraud. However, their close sensory properties complicate the differentiation. This study focused on analyzing the composition of exudate (pressured flesh juice) in order to rapidly differentiate between fresh and frozen-thawed skinless fillets of sea bass (Dicentrarchus labrax). Protein concentration, α-D-glucosidase specific activity, nucleotides and related compounds (NRCs) concentration, and free calcium concentration were measured in exudates corresponding to fresh or frozen-thawed sea bass fillets. Significant increases of these four parameters were observed in exudates from frozen-thawed fillets, especially with a twofold increase in NRCs and free calcium concentrations. These results suggest that NRCs and free calcium concentrations can be promising indicators to rapidly detect mislabeling of fresh fillets.     

冻存牛体外受精胚融解后生存率与染色体分析

体外受精后7～9天的牛胚胎用10%甘油(Glycerol)冷冻保存,融解48h后,胚胎生存率表明,7～8天的囊胚的生存率明显高于9天的囊胚生存率(P＜0.05).染色体分析表明,冷冻保存7天的囊胚卵裂球数和平均分裂像明显低于相同天数的新鲜囊胚(P＜0.05).染色体异常发生率较高,但与新鲜囊胚之间无明显差异.