羊驼卵巢卵泡系统的观察

首次对５只成年羊驼的１０个卵巢进行了组织学观察，目的在于揭示羊驼繁殖率低的原因。结果表明：①羊驼卵巢中原始卵泡数平均为２０３３７个，左侧与右侧差异不大，但个体差异较大（范围４０９４－３８９１４）。②羊驼正常卵泡的平均直径为２．１６ｍｍ，卵母细胞核平均直径１１．８３±１．８３μ。③羊驼１０个卵巢中正常卵泡和萎缩卵泡总数为左侧８３个，右侧９２个，说明卵巢活性右侧强于左侧，其中右侧卵巢中萎缩卵泡共５９个，占同侧卵泡的６４．１％，左侧３４个，占４１．５％。④羊驼卵巢发育不良比例为２０％。其中没有发现原始卵泡，但有３－４个发育正常的卵泡，与奶牛，水牛的报导相近。但发育不良卵巢的对侧卵巢含有较多正常卵泡和萎缩卵泡，说明卵巢机能有代偿作用。本研究为羊驼繁殖提供了形态学基础资料。     

绵羊卵泡卵体外成熟的研究

本研究主要探讨了不同激素、卵母细胞形态及入培前时间对绵羊卵泡卵体外成熟效果的影响.结果表明:卵母细胞在添加FSH LH(均为10IU/mL)、HCG(4IU/mL)及不加激素的m—TCM199 10％FCS(V/V)培养液中培养24h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为87.68％、96.00％和42.11％;卵母细胞的形态是影响其成熟的重要因素,A、B、C三级卵培养24h后的成熟率分别为91.77％、57.10％和25.84％,入培前时间间隔为2、4、8h时,其成熟率分别为80.24％、77.42％和 77.83％,相互间差异不显著(P>0.05).     

黔北麻羊RARRES1基因的克隆表达及功能初步研究

旨在对黔北麻羊视黄酸受体应答蛋白1（retinoic acid receptor responder 1,RARRES1）基因的功能进行初步探究。本研究首先利用PCR扩增克隆得到黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列,应用生物信息学方法分析黔北麻羊RARRES1蛋白理化性质、高级结构、疏水性、氨基酸同源性及亚细胞定位,并构建系统进化树,同时应用qRT-PCR法检测RARRES1基因在单、多羔黔北麻羊不同组织中的表达水平,随后构建目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1 RNA干扰载体,并转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞,利用qRT-PCR法从细胞水平检测并分析目的基因真核表达载体与RNA干扰载体对目的基因RARRES1及多胎性状候选基因BMPR-IB mRNA表达的影响。qRT-PCR结果显示,RARRES1 mRNA在卵巢中的表达量最高,单羔组黔北麻羊卵巢组织中的表达量极显著高于多羔组（P<0.01）。生物信息学分析表明,黔北麻羊RARRES1基因共编码289个氨基酸,RARRES1是一种定位在细胞质中的亲水性蛋白,蛋白质二级结构分析显示,其主要是由α-螺旋与无规则卷曲构成,三级结构预测与二级结构分析一致;同源性以及系统进化树结果显示,黔北麻羊RARRES1基因序列与绵羊、牛的同源性高、遗传距离近,与鸡的同源性最低、遗传距离最远。经双酶切、测序验证后,表明目的基因pEGFP-N3-RARRES1真核表达载体与pGPH1/GFP/Neo-RARRES1干扰载体构建成功。将各载体转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞后,与空白对照相比,重组质粒pEGFP-N3-RARRES1能极显著提高RARRES1与BMPR-IB的表达量（P<0.01）。在各干扰载体中,重组质粒pGPH1/GFP/Neo-RARRES1-4的抑制效率最好,能够显著与极显著下调RARRES1与BMPR-IB mRNA在卵泡颗粒细胞中的表达量（P<0.05,P<0.01）。本研究克隆了黔北麻羊RARRES1基因编码的完整序列并进行了生物信息学分析。将重组质粒pEGFP-N3-RARRES1、pGPH1/GFP/Neo-RARRES1成功转染至黔北麻羊卵泡颗粒细胞并验证其表达变化。结果表明,RARRES1可能对山羊多胎性状具有促进作用,为进一步探究RARRES1基因对山羊多胎性状的调控机理提供依据。     

BMP-15 activity on in vitro development of collared peccary (Pecari tajacu Linnaeus, 1758) preantral follicles

This study investigated the effects of BMP-15 on the in vitro development of preantral follicles of collared peccaries. Ovarian fragments were cultured for 1 or 6 days in Tissue Culture Medium 199 (TCM199⁺) supplemented with BMP-15 at rates of 0, 1, 25 or 50 ng/ml. The fragments were analysed histologically by evaluating follicular morphology, activation and growth as well as the potential for proliferation of granulosa cells. Our results show the addition of 25 ng/ml BMP-15 in the medium provided the greatest percentage of normal follicles (79.67% ± 0.69) when compared to other treatments (p < .05); however, this result is similar to 1 ng/ml BMP-15 (74.00% ± 1.90, p > .05). Moreover, 25 and 50 ng/ml of BMP-15 promoted follicular activation. BMP-15 supplements did not affect oocyte and follicular growth. All concentrations of BMP-15 increased the number of nucleolus organizer regions (NORs) after 1 day of culture when compared to fresh fragments or the control samples (p < .05). However, at the end of the experiment, the number of NORs in follicles cultured in all treatments was higher than that observed in the fresh control (sample taken prior to culturing) (p > .05). In summary, the addition of 25 ng/ml BMP-15 to the culture medium of collared peccary preantral follicles maintained a high number of morphologically healthy follicles and stimulated the activation of primordial follicles after 6 days in culture.     

辽宁绒山羊卵泡中FSHR基因表达研究

以β-Actin作为内源性内标,采用RT-PCR技术,研究了辽宁绒山羊不同发育时期卵泡FSHR基因mRNA的表达丰度。结果表明:辽宁绒山羊和本地山羊相同发育阶段卵泡FSHR基因表达水平差异不显著(P>0.05),随着卵泡发育,其表达水平的变化趋势也相一致;辽宁绒山羊直径<1mm卵泡和直径为3～4mm卵泡的颗粒细胞FSHR基因mRNA表达水平显著高于膜细胞。     

番鸭(Cairina moschata)甲状腺的显微与亚微结构

番鸭甲状腺实质由大小不一、近似球形的滤泡组成,其上皮细胞呈低立方形至扁平形.电镜下的滤泡上皮细胞,胞质内存在多量由被吞饮的胶状质与溶酶体相结合的胶质滴,线粒体外围有以核糖体规律排列的粗面内质网,网腔内多被低密度的无定形内容物所扩大.番鸭甲状腺实质存在滤泡旁细胞(C细胞).经Ehrlich苏木素染色的滤泡旁细胞呈球形、体积大、染色较浅,单个散在或2个并列位于滤泡外围的结缔组织内,不与滤泡腔接触,可明显与滤泡上皮细胞相区别.     

中华绒螯蟹卵黄发生期卵母细胞和卵泡细胞超微结构观

通过透射电镜技术观察了中华绒螯蟹第二次卵巢发育过程中卵巢的超微结构变化。结果表明：（1）中华绒螯蟹第二次卵巢发育过程中卵黄发生期可分为初期和后期;（2）卵黄发生初期（雌蟹第一次排卵后的16 d内）,卵黄生成以卵母细胞内源性合成为主,此时卵母细胞胞质中存在大量内质网囊泡、高尔基体和线粒体,这些细胞器参与胞内卵黄物质的合成。内源性合成后期,卵母细胞膜形态多样,呈现触手状、波浪状和断裂状,为外源合成期做准备。此期卵泡细胞还未向卵母细胞靠近,两类细胞间存在着由淋巴细胞吐出的絮状物;（3）卵黄发生后期,首先为卵泡细胞与卵母细胞的结合阶段（排卵后16~21 d）,此后,卵泡细胞胞质中含有大量内质网囊泡、卵黄颗粒和脂滴,卵母细胞与卵泡细胞膜变为链珠状便于物质交换,卵母细胞的卵黄合成能力减少,转由卵泡细胞进行外源性物质吸收和卵黄物质合成（21~36 d）;（4）卵黄发生结束后,双层卵膜形成,卵黄体和脂肪滴均匀分布在卵母细胞胞质中。     

不同生理阶段边鸡卵巢转录谱的构建及卵泡发育相关基因的分析

本研究通过分析不同生理阶段边鸡卵巢转录表达谱,旨在找出与卵泡发育相关的基因并进行验证,以揭示边鸡就巢性强的遗传机制.构建代表不同生理期即70日龄(70 d,卵巢发育期)、165日龄(165 d,开产期)、220日龄(220 d,产蛋高峰期)和330日龄(330 d,就巢期)的边鸡卵巢基因表达谱,用转录组表达定量(RSE...     

PMSG及GnRH类似物对鸡卵泡闭锁的调节作用

本文利用激素诱导的鸡卵泡闭锁模型,探讨了激素在卵泡闭锁中的作用。     

鸡卵泡颗粒层组蛋白H3K4me3和H3K27me3的表达研究

卵母细胞成熟过程受组蛋白H3K4me3(trimethylation of lysine 4 on histone 3)和H3K27me3(trimethylation of lysine 27 on histone 3)及其相关的甲基化和去甲基化酶的调控，因此考虑对鸡的卵泡发育也存在一定的影响。选取“苏禽3号”配套系第一母本为研究对象，采用Western blot法探究组蛋白H3K4me3和H3K27me3在鸡卵泡不同发育阶段颗粒层中蛋白的表达模式。结果表明：在苏禽3号卵泡颗粒层中，组蛋白H3K4me3在卵泡发育不同阶段表达模式呈降低→升高→降低→升高的波浪形趋势，波浪变化较为平缓，在F5、F2和F1 3个表达高点的表达量与SWF(small white follicle)、LWF(large white follicle)、SYF(small yellow follicle)和F3 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。组蛋白H3K27me3在不同发育阶段表达模式亦呈波浪形表达趋势，波浪变化起伏较明显，在SWF、SYF和F33个表达高点的表达量与F5、F4、F1和F2 4个表达低点的表达差异显著（P<0.05）。相关性分析显示，组蛋白H3K4me3与H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒细胞中的表达呈较强的负线性相关(R=-0.808，P=0.000)。结果提示：组蛋白H3K4me3和H3K27me3在不同发育阶段卵泡颗粒层中的表达具有组织差异性，呈负相关的动态修饰性，可能共同协调卵泡生长过程中各基因的表达与功能，研究结果为鸡繁殖性状调控机理提供了理论依据。