葡萄皮多酚调节LC3-Ⅱ表达及抑制视网膜色素上皮细胞损伤

研究葡萄皮多酚类化合物是否具有保护RPE细胞免受对脂褐素损伤的作用,并且探讨这种保护作用是否与维持自噬活性相关。脂褐素沉积是细胞衰老标志之一,当脂褐素在视网膜色素上皮细胞(RPE)中累积到一定水平,将增加年龄相关性黄斑变性(AMD)的风险。但是,脂褐素在RPE细胞内的作用机制尚不清晰。目前尚无有效预防、治疗AMD的手段,通过抗氧化剂清除自由基,维持细胞自噬活性可能会成为预防AMD的新策略。采用化学合成脂褐素主要荧光基团Nretinyledin-N-retinylethanolamin(A2E)建立RPE细胞累积脂褐素模型,用共聚焦显微镜和液相色谱-质谱联用检测A2E在RPE细胞中累积。细胞活力及凋亡检测结果表明A2E对细胞活性具有抑制作用。Western blotting结果表明A2E提高自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的累积,并且自噬阻断剂bafilomycin A1和A2E共同处理RPE细胞条件下LC3-Ⅱ表达量较单独用A2E处理条件下没有显著性差异,说明A2E能够阻断自噬流。此外,葡萄皮提取物能够减少A2E诱导的LC3-Ⅱ累积,提示葡萄皮多酚化合物对自噬流的保护作用。并且,葡萄皮提取物能够抑制A2E诱导RPE细胞凋亡,这种抑制作用在一定程度上归因于对自噬流的保护作用。     

昆明小鼠早期胚胎体外发育阻滞原因分析

为了分析小鼠早期胚胎在体外发育阻滞的原因 ,建立早期胚胎体外培养系统 ,应用几种不同的培养系统对昆明小鼠单细胞胚胎在体外培养了 96～ 12 0 h。结果表明 ,小鼠单细胞胚胎在 M1 6 和 BWW培养液中卵裂均受到阻滞 ,且两者之间差异不显著 (P>0 .0 5 ) ;CZB和 HTF培养液能有效地克服小鼠胚胎的 2 -细胞发育阻滞 ,与 M1 6 和 BWW相比 ,2 -细胞卵裂率和囊胚率均存在显著性差异 (P<0 .0 1) ;在 M1 6 培养液中添加牛磺酸对早期胚胎发育有促进作用 (P<0 .0 1) ;小鼠早期胚胎在 CZB和牛输卵管上皮细胞 (COEC)共培养体系中的卵裂率较对照组明显提高 (P<0 .0 5 )     

7日龄小鼠生精上皮单细胞冷冻保存

在DMEM中添加10％小牛血清（NBS），并分别添加不同浓度的抗冻剂二甲基亚砚（DMSO）、丙二醇（PG）、乙二醇（EG）及甘油（G），对7日龄小鼠生精上皮单细胞进行冷冻保存，复苏后台齿蓝染色测定细胞复苏率。结果：当冻存液中DMSO分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为77．1％、88．2％、86．5％、73．5％、65．5％，其中10％和15％DMSO组细胞复苏率最高，与其作各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中PG分别为5％、10％、15％、20％、25％时，细胞复苏率分别为66．2％、84．3％、72．1％、69．9％、47．5％，其中10％PG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中EG分别为5％、10％、15％、20％时，细胞复苏率分别为64．9％、81．6％、60．9％、44．7％，其中10％EG组细胞复苏率最高，与其余各组间均差异极显著（P＜0．01）。当冻存液中G分别为5％、10％、20％、25％时，细胞腹苏率均低于10％。10％DMSO组细胞复苏率与10％PG组和10％EG组之间均差异显著（P＜0．05）或极显著（P＜0．01）。结果表明，10％DMSO、10％PG及10％EG均适宜冷冻保存小鼠精原细胞，以及10％DMSO的冻存效果最好，而则不适宜冷冻保存。在含10％DMSO的冻存液中，二步慢速冷冻，液氮储存，37C水浴复苏小鼠精原细胞，是一种具有较高细胞复苏率的冷冻保存方法。     

感染MDV鸡羽髓组织中CyP、LASP1和PCBP1蛋白的表达分析

本实验室前期的蛋白质组学研究显示,鸡羽髓组织中亲环素蛋白(CyP)、LIM和SH3蛋白1(LASP1)和多聚胞嘧啶结合蛋白1(PCBP1)3种蛋白为马立克氏病病毒(MDV)感染过程中差异表达蛋白。为进一步检测这3种蛋白在病毒感染过程中的表达水平,本研究以MDV GA强毒株感染SPF鸡,应用荧光定量PCR和westernblot检测病毒感染14 d和21 d后这3种蛋白在羽髓组织中的表达水平。检测结果表明,病毒感染14 d后,羽髓组织中这3种蛋白的mRNA和蛋白表达水平均有不同程度的下调,其中LASP1 mRNA和PCBP1蛋白分别下调62%和48%(p<0.05);在21 d,除CyP蛋白表达基本不变外,其他mRNA和蛋白均不同程度下调,其中LASP1蛋白下调达到46%(p<0.05)。结果表明在两个不同的MDV感染时期,MDV均可以不同程度的抑制羽髓组织中这3种蛋白的表达,本研究为进一步阐释MDV与羽髓组织的相互作用机理提供有价值的参考。     

Experimental early pathogenesis of Streptococcus agalactiae infection in red tilapia Oreochromis spp.

Streptococcus agalactiae causes a severe systemic disease in fish, and the routes of entry are still ill‐defined. To address this issue, two groups of 33 red tilapia Oreochromis spp. each of 10 g were orally infected with S. agalactiae (n = 30), and by immersion (n = 30), six individuals were control‐uninfected fish. Three tilapias were killed at each time point from 30 min to 96 h post‐inoculation (pi); controls were killed at 96 h. Samples from most tissues were examined by haematoxylin–eosin (H&E), indirect immunoperoxidase (IPI) and periodic acid‐Schiff; only intestine from fish infected by gavage was evaluated by transmission electron microscopy. The results of both experiments suggest that the main entry site of S. agalactiae in tilapia is the gastrointestinal epithelium; mucus seems to play an important defensive role, and environmental conditions may be an important predisposing factor for the infection.     

反刍动物瘤胃上皮的结构特点

反刍动物的胃是复胃,与单胃动物的胃不同。反刍动物主要以瘤胃中发酵产生的短链脂肪酸（SCFA）作为机体的能量物质,而绝大部分的SCFA又通过瘤胃上皮直接吸收,为宿主供能。因此,深入了解瘤胃上皮结构特点有助于对其吸收功能进行深入的研究。笔者主要对瘤胃上皮的解剖学特点、细胞学特点及超微结构进行了综述。     

鸡源大肠杆菌1型菌毛菌株粘附鸡呼吸道上皮的电镜观察

用电子显微镜观察了鸡大肠杆菌 (O78) 1型菌毛在不同温度中的表达情况。细菌在营养肉汤中 37℃培养 4 8h可表达大量的菌毛 ,而 18℃培养 4 8h则缺乏菌毛。扫描电镜观察结果 ,37℃培养的鸡大肠杆菌可大量粘附鸡呼吸道上皮粘膜 ,而 18℃培养的同种菌则不能粘附 ,表明鸡大肠杆菌粘附鸡呼吸道上皮的过程由 1型菌毛介导     

鼻咽组织免疫组化标记——Ⅰ.上皮性标记

本文采用多种上皮性标记物的免疫组织化学技术,对非肿瘤性鼻咽上皮的抗原表达特性进行研究。结果表明鼻咽部所有上皮均表达角蛋白,但性质不同的上皮所表达的分子量不同。采用商品化癌胚抗原多克隆抗血清可能存在非特异性反应,至于上皮膜抗原则见于鼻咽部所有上皮成分。对上皮性标记物在鼻咽部组织表达的规律及意义作了探讨。     

EB病毒感染体外培养人胚鼻咽上皮细胞对c-myc和p53表达的影响

目的：观察体外培养的人胚鼻咽上皮（HENE）被EB病毒（EBV）感染后，c－myc和p53表达的变化，以探讨EBV和这些癌基因在鼻咽癌发生发展中可能起的作用。方法：体外培养的人胚鼻咽上皮用EBV或EBV加TPA感染（简称E和ET组），分别用抗补体免疫荧光法（ACIF）和磁性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（APAAP）检测EBV核抗原（EBNA）及癌基因c－myc和p53的表达。结果；体外培养10例入胚鼻咽上皮细胞波EBV感染后，EBNA全部阳性，c－myc、p53总表达和p53突变型的表达明显增加，E组阳性细胞分别为（39．4±16．8）％、（18．6±11．0）％和（11．6±2．0）％，ET组为（458±16．9）％、（7.4±2.4）％和（8．0±3．5）％，与不受病毒感染的对照组〔（0．0±0．0）％、（3．8±2．3）％和（3．6±2．1）％〕的差别，除ET组p53总表达外均有显著的统计学意义（P＜0．01或P＜0．05）。结论：提示EBV感染鼻咽上皮，可导致某些癌基因的活化和表达增强，可能在鼻咽癌的发生和发展中起一定作用。