Global spread and evolution of viral haemorrhagic septicaemia virus

Viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV) is a rhabdovirus that infects over 48 species of teleosts and is lethal in many. VHSV threatens marine and aquatic fisheries. VHSV was first discovered outside Europe in 1988 in fish from the Pacific coast of North America. In 1994, VHSV was discovered in Newfoundland. In 2003, VHSV was isolated from fish in Lake St. Clair (Michigan and Ontario). In this study, we used 46 nucleotide sequences for the glycoprotein gene from 12 studies and 150 nucleotide sequences for the nucleoprotein gene from nine studies. We combined phylogenetics and a geographic information system to visualize the transmission paths of VHSV lineages. We also reconstructed the spread of VHSV lineages through optimization of geographic data for viral isolates on phylogenetic trees. We demonstrate that VHSV was transmitted from the North Atlantic Ocean and/or Baltic Sea to the Atlantic coast of North America and Japan in independent events. From the Atlantic coast, the virus was transmitted independently to the Laurentian Great Lakes and the Pacific coast of Canada and the contiguous United States. From the Pacific Northwest, the virus was transmitted to Asia and Alaska in independent events. These results clarify the debate ongoing in the literature on the geographic spread of VHSV.     

用点杂交方法定量检测植物病毒RNA负荷量

用RNA点杂交与用放射性成像仪直接读取放射性活度相结合的方法定量测定植物病毒RNA相对负荷量 ,检测了 0 0 0 1～ 1 0ppm浓度范围内二氢茉莉酸丙酯(PDJ)对烟草组织中烟草花叶病毒 (TMV)RNA的影响。结果表明 :在PDJ处理 3d时 ,与对照相比低浓度 ( 0 0 0 1ppm)PDJ处理的TMVRNA病毒负荷量无明显差异 ,但随着浓度的升高 ,PDJ对TMVRNA的复制和积累具有促进作用 ;浓度越高 ,促进作用越显著。同时用传统的枯斑接种法验证了上述结果。两种方法相比 ,点杂交结合放射性成像仪读取放射性活度的方法所受的人为误差干扰较小 ,能够相对精确地定量测定植物组织中病毒RNA负荷量。     

番茄不孕病毒BJ株系基因组测定与侵染性克隆

番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)可侵染包括藜科(Chenopodiaceae)、茄科(Solanaceae)等在内的24个双子叶家族和3个单子叶家族的100多种植物,是具有重要经济价值的植物病毒之一.为研究TAV BJ株系(Tomato aspermy virus,TAV-BJ)的基因组功能,本实验对TAV-BJ基因组克隆测序,并构建侵染性克隆.以TAV-BJ侵染心叶烟(ic otiana glutinosa)的总RNA为模板,RT-PCR获得其RNA2和RNA3;以TAV-BJ的dsRNA为模板,RT-PCR获得全长RNA1,目的片段PCR产物克隆测序获得TAV-BJ基因组全序列信息.RNA1全长3 409 nt,编码994个氨基酸的1a蛋白;RNA2全长3 023 nt,含2个开放阅读框(open reading frame,ORF),2a ORF编码829个氨基酸的2a蛋白,2b ORF编码78个氨基酸的2b蛋白;RNA3全长为2 216 nt,包含2个ORF,3a ORF编码247个氨基酸的3a蛋白,外壳蛋白(coat protein,CP)ORF 编码219个氨基酸的CP蛋白(TAV-BJ基因组RNA1、2和3 GenBank登录号分别为HQ424163,HQ424164和HQ424165).TAV-BJ基因组cDNA克隆体外转录成RNA并接种于心叶烟上,结果表明转录产物在寄主上的症状反应和TAV-BJ病毒粒子RNA的接种相一致,TAV-BJ基因组cDNA侵染性克隆具有活性.由TAV-BJ各个基因片段与缺失2b基因的黄瓜花叶病毒Fny株系(Cucumber mosaic virus,CMV-Fny△2b)构建的假重组病毒接种于心叶烟,结果显示TAV-BJ的RNA2和RNA3能恢复CMV-Fny△2b在寄主上症状反应.嵌合型RNA3F3aTcp和RNA3T3aFcp的症状反应结果表明,F1F2△2bRNA3 T3aFcp在寄主上产生花叶症状与F1 F2△2bT3相一致.本研究获得TAV-BJ的基因组序列,成功构建侵染性克隆,同时发现TAV-BJ的3a基因具有CMV-Fny的2b基因的某些功能.     

罗汉果种子传播小西葫芦黄化花叶病毒的检测

为了解小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchini yellow mosaicvirus,ZYMV）是否能通过罗汉果种子传播。本研究通过取ZYMV阳性的罹病罗汉果植株种子700粒,400粒直接播种于防虫网室中,300粒经表面消毒处理后播种于MS培养基上。最终获得213棵罗汉果实生苗。对所获得实生苗进行生物学鉴定及ZYMV特异性RT-PCR检测,均未检测到ZYMV阳性植株。结果表明ZYMV不能经罗汉果种子传播,或其传播率很低。     

库尔勒香梨的苹果茎痘病毒cDNA探针检测技术研究

 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对 2种总RNA提取方法进行了比较研究 ,从中行筛选出了适合库尔勒香梨的提取方法 ;并利用RT PCR反应体系成功合成了生物素标记的cDNA探针 ,在此基础上 ,对影响杂交灵敏度的主要因素进行了试验研究 ,结果表明 ,当探针浓度为 4 0 0ng·ml-1,甲酰胺浓度为 4 5 % ,4 2℃杂交反应 6h ,可获得最高灵敏度。进口硝酸纤维素膜的灵敏度最好 ,基本无背景。Tween2 0的封闭效果比牛血清白蛋白好。对不同组织和不同提取方法提取的总RNA进行了杂交检测 ,结果表     

鸭病毒性肝炎的发生和病理形态学观察

本文根据流行病学、临床症状和病理变化观察表明:鸭病毒性肝炎一般发生于3周龄以内的雏鸭,死亡高峰集中在10～14d 龄之间;临床上表现为发病突然,传播迅速,死后呈典型的角弓反张姿态;眼观病变主要是肝脏肿大和斑驳状出血;组织学检查,见肝细胞高度脂肪变性和坏死,以及胆管上皮增生和不同程度的炎性细胞浸润。电镜观察:在肝细胞核内发现有类圆形颗粒,直径为40nm,疑为病毒样粒子。     

应用A蛋白夹心酶联免疫吸附法鉴定黄瓜花叶病毒血清组

根据Ａ蛋白夹心酶联免疫吸附法（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）试验结果可以将我国分离的１６个黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）分离物及４个ＣＭＶ标准毒株（Ｆｎｙ、Ｌｎｙ、Ｍ、ＷＬ）区分为２个血清组．１４个分离物及标准毒株Ｆｎｙ、Ｍ属ＤＴＬ血清组，２个分离物及标准毒株Ｌｎｙ、ＷＬ属ＴｏＲＳ血清组     

斜纹夜蛾核型多角体病毒的分离及感染力测定

对福建农业大学生物技术中心采集分离的斜纹夜蛾核型多角体病毒进行了致病过程和形态大小的观察、感染力测定以及小菜蛾和菜青虫对该病毒的敏感性等方面的初步研究．斜纹夜蛾核型多角体病毒形状不规则,大小不一,直径为１．０～２．５μｍ,平均直径为１．６５μｍ．以斜纹夜蛾、小菜蛾和菜青虫为靶标害虫,对该病毒的感染力及杀虫特异性进行了测定．结果表明：在测定的浓度范围内,斜纹夜蛾幼虫感病死亡率随多角体浓度和虫龄而变化,在２５℃下,３龄幼虫的致死中浓度为１×１０５．１４ＰＩＢｍＬ－１;浓度相同时,幼虫死亡速度随龄期增大而减慢;对小菜蛾和菜青虫幼虫的致病死亡率为０．可见,此多角体病毒对斜纹夜蛾具有较高的毒力,且专化性强．     

一株鹅源高致病力禽流感病毒分离株血凝素基因的分析

禽流感病毒（AIV）的表面结构蛋白血凝素（HA）在决定病毒致病力、受体结合特性、宿主范围等方面起着关键作用。本研究初步鉴定为高致病力毒株的AIV鹅体分离株A/Goose/Guangdong/1/96（H5N1）的HA基因进行了克隆并测序。结果表明,这一在无胰酶条件下可在单层鸡胚成纤维细胞培养物上形成蚀斑的毒株在其HA裂解位点附近有连续6个碱性氨基酸的插入物,从而揭示了其高致病力的分子基础。进一步的序列比较发现这一毒株与1997年香港流感病毒A/Hongkong/156/97（HK/97）的HA基因核苷酸和氨基酸同源率分别高达98.0%和98.2%,且其6个糖基化位点、2个受体结合位点及裂解位点碱性氨基酸插入物的序列均完全一致,提示该毒株与HK/97具有相似的生物学特性。     

NDV单抗针对多肽抗原的鉴定

经对液氮保存的抗鸡新城疫病毒单抗杂交瘤细胞株进行复苏、再克隆,并用ELISA 和IIF筛选,得到24 株分泌力较强的细胞株。将这些细胞株再接种BALB/C小鼠,取其腹水进行预处理,测其ELISA 效价、IIF效价,并用Westernblotting 测定它们所针对的中国标准强毒株F48 E8 的多肽抗原表位。测得的结果均为针对血凝素-神经氨酸酶的单抗