Effects of Donor Cells Treated with Egg Extracts on the Development Competence of Cloned Embryos

Japanese Balck cattle fetal fibroblasts (JBCFF) were induced with Xenopus leavis egg extracts and somatic cell nuclear transfer (SCNT) was carried out with the reprogrammed JBCFF as donor cells in order to investigate their effects on SCNT efficiency.Three samples of egg extracts were acquired from different Xenopus laevis.The protein contents and kinds in extracts were evaluated with BCA Protein Quantification Kit and SDS-PAGE.Concentration of Digitonin to permeabilize JBCFF was optimized and assessed with PI staining.Reprogrammed cells treated with egg extract were used as donor in SCNT.Additionally the reconstructed embryos were activated with ionomycin+6-DMAP and A23187+6-DMAP to compare their effects on the development competence.The protein contents of extracts samples were 56.2255,64.6570 and 71.2158 μg/mL,respectively,the each extract had the same composition about 40-55 and 70-100 ku.The optimal concentration of Digitonin was 7 μg/mL and the permeabilization rate was 55.44%.After extracts treatment and continuous culture for 6-7 d,JBCFF formed well-defined colony structures.No significant composition difference was found in rates of fusion (92.83% vs 96.04%),cleavage (89.64% vs 89.78%) and blastocyst formation (24.06% vs 23.12%) of cloned embryos when the colony cells and JBCFF without extracts treatment were used as donor cells (P>0.05).Similarly,the two activation methods had no significant effect on the developmental competence of cloned embryos (cleavage rate 92.16% vs 92.28%,blastocyst rate 23.21% vs 24.18%).Conclusively,Xenopus leavis,egg extracts could induce JBCFF reprogramming to a low differentiated state.However donor cells with reprogramming partially could not improve the development of cloned embryos and its mechanism requires further research.     

豆科绿肥对四川丘陵区橘园间作效应的初步研究

为明确豆科绿肥对四川丘陵区橘园产量、品质、产值及土壤肥力的影响,2011-2013年在四川省西充县进行了试验研究。结果表明：（1）橘园间作豆科作物柑橘产量比对照提高3.3%-5.7%、但增产不显著;（2）凡涉及间作大豆的模式,经济产值极显著提高、比对照增加14.3%-16.2%;（3）凡间种豆科绿肥的模式,柑橘品质和土壤养分都有明显改善,柑橘总糖提高13.1%-15.5%、可溶性固形物提高17.4%-20.2%、Vc 提高13.6%-16.3%、可滴定酸降低10.3%-11.8%,土壤有机质增加13.2%-15.9%、全氮增加6.3%-8.7%、全磷增加8.0%-10.6%、速效钾增加6.2%-8.7%。橘园间作豆科绿肥和间作大豆-绿肥的综合效应良好,可选择应用。     

大叶斑鸠菊药效学初探

目的：初探大叶斑鸠菊的药效。方法：将大叶斑鸠菊制成浓度为1 g生药/mL的提取液,通过抑菌试验、利尿试验及对鸡肾肿的治疗试验,考察其药效。结果：大叶斑鸠菊提取液对大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌有一定抑制作用,最小抑菌浓度均为0.25 g/mL,对金黄色葡萄球菌无抑制效果;有一定利尿作用;饲喂0.4、0.5、0.6 g/mL不同剂量大叶斑鸠菊提取液,2次/d,鸡肾肿明显减轻,鸡的存活率提高,分别为42.86%、71.43%和85.71%。结论：大叶斑鸠菊具有一定抑菌作用、利尿作用,对鸡肾肿有较好的治疗效果。     

添加葡萄籽等植物提取物对湘云金鲫生长性能及鱼体成分的影响

选用1344尾平均体重为105 g的健康湘云金鲫鱼种。随机分为4个处理,每个处理2个重复。Ⅰ组投喂基础饲料,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在基础饲料中分别添加4 m g/kg的黄酶素及10、20 g/kg葡萄籽等植物提取物。30 d后测定湘云金鲫的生长性能和鱼体成分。结果显示:Ⅲ组与Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅳ组比较,增重率分别提高53.77%、45.43%、20.16%(P<0.05),饵料系数分别降低33.06%、31.02%、16.44%(P<0.05);鱼体蛋白质含量显著提高(P>0.05),体脂肪含量无显著变化(P>0.05)。因此,葡萄籽等植物提取物作为饲料添加剂能显著提高湘云金鲫的生长性能、降低饵料系数、改善鱼体品质,本试验条件下,其适宜添加量为10 g/kg。     

“青大1号”紫花苜蓿叶蛋白提取条件优化

为了开发新的食用蛋白质资源,本试验以“青大1号”紫花苜蓿新品系青干草为原料,采用酸化加热法配合加盐法提取叶蛋白.单因素试验设计,分别考察料水比、加盐量、絮凝时间、pH、预浸时间、絮凝温度6个因素对粗蛋白质提取率的影响,并以单因素试验结果为依据,采用四因素（料水比、加盐量、絮凝时间、pH）三水平L9（34）正交试验设计进行提取工艺优化.试验结果表明：影响粗蛋白质提取率的因素,从大到小依次为料液比、絮凝时间、pH、加盐量.当絮凝温度为70℃、料液比为1∶10、加盐量1％、絮凝时间5min、pH为4时是叶蛋白提取的最优提取条件.     

柑橘褐斑病菌对不同抗性柑橘品种防御酶活性的影响

以柑橘褐斑病高抗品种Lw8,中抗品种L2,高感品种Lw14为实验材料,通过孢子喷雾法使柑橘褐斑病菌感染柑橘叶片,研究接菌0d、1d、2d、3d、6d、8d、10d时,柑橘叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、几丁质酶(CHT)酶和β-1,3葡聚糖酶(GLU)含量及活性变化规律与品种抗病性的关系。结果表明,接种前,两个抗病品种Lw8、L2中的POD、SOD、PAL、PPO 、GLU、CHT活性显著高于高感品种Lw14,CAT活性则与高感品种Lw14相近;接种后,3个不同抗性品种中SOD、POD、CAT、PAL、PPO 、GLU、CHT 7种防御酶活性较对照明显提高,但不同品种增加幅度不一致,除CAT外,其余6种防御酶活性均表现为抗病品种Lw8、L2增幅显著高于高感品种Lw14,且两个抗病品种一般在接菌3d内6种防御酶活性迅速升高并达到峰值;而高感品种Lw14防御酶(除CAT外)活性或增幅较小或较两个抗病品种滞后。本研究初步探讨了不同抗性品种接种褐斑病菌后7种防御酶的活性动态变化与柑橘品种抗病性关系,为进一步研究其抗病机理奠定基础。     

不同柑桔品种裂果及其成因研究

摘要：目的：柑桔裂果是生产中常见的一种生理性病害,严重影响果实的商品价值,因此弄清不同柑桔品种裂果的差异及成因对提高柑桔品质、减少产量损失尤为重要。材料与方法：本研究对纽荷尔脐橙、朋娜脐橙、白柳脐橙、清家脐橙、塔罗科血橙、兴津温州蜜柑、清见桔橙、不知火桔橙、485-28、32-1（其中485-28、32-1为柑研所新品系）10个品种进行裂果数目调查,并与气象资料、树体叶片营养状况和果实品质进行相关性分析。结果与分析：结果表明,不同品种间裂果率差异极大,清见未见裂果,而 485-28 的累计裂果率达到 78.72%。甜橙类品种裂果率与果皮厚度呈显著负相关。雨量分布不均是导致果实裂果的原因之一。研究发现柑桔叶片钾含量与裂果率呈显著负相关,结果枝与营养枝的钙含量与果实裂果率相关性不明显,但二者间的差值与裂果率呈显著负相关,这可能与 Ca的调运能力有关,具体原因有待进一步研究。结论：因此,生产上应选择裂果率较低的品种,合理灌溉,适当增施钾和钙肥,以降低果实裂果率。     

五个典型柑桔品种的落花落果规律调查

以成年纽荷尔脐橙、兴津温州蜜柑、沙田柚、尤力克柠檬和圆金柑为材料,探索其花果脱落规律。结果表明,最终坐果率与总花量（含花蕾）显著负相关（P < 0.01）;平均单株花果脱落总数量为兴津温州蜜柑 > 纽荷尔脐橙 > 沙田柚 > 圆金柑 > 尤力克柠檬;平均单株花果脱落总干重为兴津温州蜜柑 > 纽荷尔脐橙 > 沙田柚 > 尤力克柠檬 > 圆金柑;纽荷尔脐橙、兴津温州蜜柑和沙田柚第一次生理落果数量大于第二次生理落果,尤力克柠檬和圆金柑第二次生理落果数量大于第一次生理落果。因此,纽荷尔脐橙、兴津温州蜜柑和沙田柚应重点防止第一次生理落果,尤力克柠檬和圆金柑应重点防止第二次生理落果。     

两种纳米农药及其原药对亚洲柑橘木虱的毒力比较

亚洲柑橘木虱Diaphorina citri Kuwayama是黄龙病的传播媒介,快速、高效地防治媒介昆虫是黄龙病综合防治最重要的技术措施。纳米农药不但能够提高药效、降低化学农药用量,而且提高使用安全性和生物利用度。为了明确纳米农药对亚洲柑橘木虱的防治效果,本实验选用纳米阿维菌素水悬浮剂、纳米阿维.吡虫啉水悬浮剂及其对应原药进行毒力测定,并比较同质量浓度下的杀虫效果,结果表明：1、两种纳米农药的毒力均高于对应原药,其中纳米阿维.吡虫啉水悬浮剂的毒力最强,其处理后第三天LC₅₀为0.0054mg/L,LC₉₅为2.1019mg/L;2、处理后48h、72h相比于24h,纳米阿维.吡虫啉在同质量浓度,死亡率的上升幅度极大,1.25-20 mg/L在72h时导致的死亡率达93%-100%,与200 mg/L无显著差异,而原药随时间推移死亡率虽有所上升,但幅度较小;3、纳米阿维菌素及其原药在处理后3-4d才开始出现死亡,虽然起初纳米阿维菌素防效不及原药,但在随后3d提效速度较快,并在防效上也超过原药;4、阿维.吡虫啉与阿维菌素相比,无论是纳米农药还是原药,其发挥药效较快,而且杀虫效果较好。     

提取液及固-液分离方法对固态非淀粉多糖酶类活性的影响

本试验旨在探讨固态酶制剂评估中酶的适宜提取液及固-液分离方法。采用4×3双因素完全随机设计,其中提取液分别为去离子水、乙酸-乙酸钠缓冲液(0.1 mol/L,p H 5.50)、磷酸盐缓冲液(0.05 mol/L,p H 6.00)和0.9%Na Cl溶液;溶液提取后的固-液分离方法分别为不分离、3 000 r/min离心3 min和中速滤纸过滤。每个处理5个重复,每个重复设2个平行,测定各个处理下酶的活性,并考察提取液的类型对酶制剂产品(α-半乳糖苷酶除外)溶解离心后溶液中溶质及蛋白质含量的影响。结果表明,磷酸盐缓冲液溶解木聚糖酶后活性最高(P0.05);乙酸-乙酸钠缓冲液、磷酸盐缓冲液及0.9%Na Cl溶液溶解β-葡聚糖酶后活性相当(P0.05),且均显著地高于去离子水(P0.05);去离子水溶解β-甘露聚糖酶后活性最高,其次为乙酸-乙酸钠缓冲液,两者都显著地高于磷酸盐缓冲液和0.9%Na Cl溶液(P0.05)。提取液类型对α-半乳糖苷酶活性无显著影响(P0.05)。酶制剂溶解后的固-液分离方法对木聚糖酶的测定活性无显著性影响(P0.05);提取液离心或过滤后β-葡聚糖酶活性最高(P0.05);提取液离心后β-甘露聚糖酶活性最高(P0.05);而提取液不分离时α-半乳糖苷酶的活性最高(P0.05)。提取液的种类和酶制剂溶解后的固-液分离方法对4种非淀粉多糖酶的测定活性有极显著的交互作用(P0.01)。乙酸-乙酸钠缓冲液对木聚糖酶制剂的溶解度最大(P0.05),去离子水和0.9%Na Cl溶液均对β-葡聚糖酶及β-甘露聚糖酶制剂的溶解度最大(P0.05)。然而,乙酸-乙酸钠缓冲液溶解木聚糖酶、β-葡聚糖酶、β-甘露聚糖酶后提取液中蛋白质的含量均最低(P0.05)。上述结果表明,乙酸-乙酸钠缓冲液溶解4种固态酶制剂可以最有效地将酶蛋白提取出来,α-半乳糖苷酶提取后不宜固液分离,而其他3种酶的提取液适宜进行离心分离。