Targeted Knock-in of a Fluorescent Protein Gene into the Chicken Vasa Homolog Locus of Chicken Primordial Germ Cells using CRIS-PITCh Method

In chickens, primordial germ cells (PGCs) are effective targets for advanced genome editing, including gene knock-in. Although a long-term culture system has been established for chicken PGCs, it is necessary to select a gene-editing tool that is efficient and precise for editing the PGC genome while maintaining its ability to contribute to the reproductive system. Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated protein 9 (Cas9) and CRISPR-mediated precise integration into the target chromosome (CRIS-PITCh) methods are superior as the donor vector is easier to construct, has high genome editing efficiency, and does not select target cells, compared to the homologous recombination method, which has been conventionally used to generate knock-in chickens. In this study, we engineered knock-in chicken PGCs by integrating a fluorescent protein gene cassette as a fusion protein into the chicken vasa homolog (CVH) locus of chicken PGCs using the CRIS-PITCh method. The knock-in PGCs expressed the fluorescent protein in vitro and in vivo, facilitating the tracking of PGCs. Furthermore, we characterized the efficiency of engineering double knock-in cell lines. Knock-in cell clones were obtained by limiting dilution, and the efficiency of engineering double knock-in cell lines was confirmed by genotyping. We found that 82% of the analyzed clones were successfully knocked-in into both alleles. We suggest that the production of model chicken from the knock-in PGCs can contribute to various studies, such as the elucidation of the fate of germ cells and sex determination in chicken.     

壳聚糖饲用微生物制剂对湘黄鸡免疫指标和肠道菌群的影响

在不用药物、不接种疫苗的条件下,于饮水中添加0（CK）,0．5％,1．0％和1．5％的以壳聚糖为培养底物研制的壳聚糖饲用微生物制剂饲喂湘黄鸡,探讨其对湘黄鸡免疫指标和肠道菌群的影响效果．结果表明,试验组脾脏指数有上升趋势（Jp〈0．25）,法氏囊指数和胸腺指数显著提高（p〈0．05）;试验组血液中IgG含量呈上升趋势（P〈0．25）,T3,T4和IgA含量也显著提高（P〈0．05或（p〈0．01）;试验组盲肠中大肠杆菌显著减少,而乳酸杆菌显著增加（P〈0．01）．同时在日增重和育成率上,试验组提高率达9．31％（p〈0．01）和7．01％（p〈O．05）,表明该制剂通过促进免疫器官发育,增强T3,T4,IgA,IgG分泌和改善肠道微生态环境,从而提高试鸡的抗病力和生长性能．     

文昌鸡神经肽Y基因多态性与开产性状的关系

[目的]检测文昌鸡神经肽Y基因（NPY）的多态性及其与开产性状的关系,为高产文昌鸡的育种提供资料。[方法]通过PCR-RFLP方法检测文昌鸡NPY基因Dra I位点上的多态性,分析其基因型、群体的遗传稳定性以及该位点多态性与开产日龄、开产体重和开产蛋重的关系。[结果]文昌鸡在NPY基因Dra I位点上有3种基因型（AA、AB、BB）;基因型的分布符合Hardy-Weinberg定律;不同基因型间的开产日龄、开产蛋重差异不显著（P〉0.05）,开产体重差异极显著（P〈0.01）。[结论]文昌鸡NPY,基因Dra I位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,其基因多态影响开产体重。     

云南屏边大围山微型鸡遗传多样性*

 云南屏边大围山微型鸡是我国具有独特遗传特性的、属于亚热带热带型早熟地方家禽品种。研究采用了33个家鸡特异性的微卫星标记对该鸡种自然群体中30个个体进行了多态性电泳检测,目的在于阐明其群体遗传变异和遗传结构状况。研究结果显示：33个微卫星座位共检测到65个等位基因,每个座位的等位基因数在1～3个之间,这些等位基因的频率大小在0.0333～1.000之间,平均每个座位的等位基因数为1.9697个,有效等位基因数在100～263个之间, 平均有效等位基因数为1.6846。群体平均杂合度（H）和群体平均多态信息含量（PIC）为0.1737和0.3279。结果表明,大围山微型鸡群体平均杂合度和群体平均多态信息含量较低,纯合度较高,未受到其它外来血液的混杂,是一个封闭的原始群体,具有较高的遗传一致性     

文昌鸡蛋品质性状与微卫星标记的关联分析

对120只55周龄文昌鸡进行了蛋品质的测定,测定的8个性状为:蛋重、蛋壳重、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈氏单位、蛋形指数、蛋黄重、蛋黄颜色。通过统计软件,对各蛋品质性状进行了相关分析,并通过选用20对微卫星标记,分析蛋品质性状的遗传参数,筛选出了与哈氏单位、蛋重、蛋壳强度有关的分子遗传标记。结果表明:①蛋品质大多数性状间相关性不显著;②文昌鸡群体内遗传差异较大,保留着丰富的遗传多样性;③位于2号染色体的标记ADL0176、MCW0239和4号染色体的标记MCW0240与55周龄哈氏单位呈显著相关;位于4号染色体的标记LEI0119与55周龄蛋重相关;位于Z染色体的标记MCW0246和LEI0229与55周龄蛋壳强度呈显著相关。本研究结果为文昌鸡的蛋品质的间接选择提供理论依据,同时也为哈氏单位、蛋壳强度、蛋重的QTL定位和标记辅助选择提供理论依据。     

不同杀菌方式对烧鸡品质的影响

[目的]为进一步确定对烧鸡品质影响最小的杀菌方式提供依据。[方法]采用微波杀菌、高温杀菌和沸水杀菌3种方式处理烧鸡,在感官质量、品质方面对杀菌效果进行比较,研究不同杀菌方式对烧鸡品质的影响。[结果]3种杀菌方式处理的烧鸡蛋白质含量总体呈下降趋势,其中微波处理的下降幅度最小;水分含量总体变化不大,但有较明显的波动,其中微波处理的水分含量最低;脂肪含量变化无规律性。不同杀菌方式对贮藏期间烧鸡的感官指标影响显著(P<0.05),其中微波杀菌的效果最好,高温杀菌次之,沸水杀菌最差。[结论]3种杀菌方式对烧鸡的水分含量、感官指标影响显著(P<0.05),而对蛋白质和脂肪含量影响不显著(P>0.05)。     

酵母培养物对肉仔鸡屠宰性能及胴体品质的影响

主要研究在玉米豆粕基础日粮中添加酵母培养物(YC)对肉仔鸡屠宰性能及胴体品质的影响。将960只1日龄肉仔鸡随机等分为4组,其中试验3组,对照1组,试验组分别添加2.5 g/kg,5 g/kg,7.5 g/kg的YC,试验期为1~42 d。结果表明:①试验各组肉仔鸡的胸肌率、腹脂率、半净膛率和全净膛率与对照组相比差异不显著(P>0.05),但添加2.5 g/kg、7.5 g/kg YC的试验组可显著提高肉仔鸡的腿肌率(P<0.05);②在肉鸡日粮中添加YC显著降低了胸肌、腿肌的剪切力(P<0.05);滴水率有下降趋势(P>0.05);pH值(45 min)亦有降低。研究证明:在日粮中添加一定量的YC能降低肉仔鸡胴体肌肉的剪切力及滴水损失,提高肉的嫩度及持水能力,达到改善肉鸡的屠宰性能和肌肉品质的目的。     

DRD1及DRD2基因多态性与鸡冠高和体重的相关性

研究鸡DRD1及DRD2基因与冠高和体重的关系。在DRD1和DRD2基因上共选取20个多态位点,对586只宁都三黄鸡的基因型进行检测,分析各位点与77、84及91日龄冠高和体重性状的相关性。结果表明:位于DRD2基因5′侧翼区的位点A-6543G与91日龄体重显著相关(P<0.05),位点C-6539T与91日龄冠高显著相关(P<0.05);DRD1基因编码区上6个多态位点与不同日龄的鸡冠高和体重无显著相关(P>0.05),但由C+765T、C+1011T与G+1065A这3个位点组成的单倍型块与77日龄冠高呈显著的相关性(P<0.05)。研究结果提示:DRD1基因的单倍型块可作为77日龄冠高的辅助选择的有效分子标记;而DRD2基因上A-6543G可作为91日龄体重的有效分子标记,位点C-6539T可为91日龄冠高标记辅助选择提供参考。     

致鸡肝炎大肠杆菌与鸡舍空气致病性大肠杆菌生物学特性比较分析

研究了河北某地区致鸡肝炎大肠杆菌(Escherichia coli)和鸡舍空气致病性大肠杆菌的血清型和耐药性差异。根据细菌分离培养特性、形态学、生化试验、动物试验及玻板凝集试验结果,从病鸡肝脏中分离出了致病性大肠杆菌38株,其O型优势血清型与同地区鸡舍空气分离出的大肠杆菌血清型相似。药敏试验结果显示,O型致鸡肝炎大肠杆菌与已分离出的同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的耐药特征也具有相似性。这说明致鸡肝炎大肠杆菌与同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的某些生物学特性是相同的,大肠杆菌引起的鸡肝炎病与存在于空气中的致病性大肠杆菌有一定的关系。     

鸡Z染色体基因表达的密码子偏性

从NCBI数据库(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/mapview/map)下载鸡Z染色体上全部基因完整的cDNA,最终共有626个基因的CDS序列纳入统计分析.使用CodonW(1.4.2)进行密码子偏性分析,确定了CGG、AGC、UGC等26个密码子为Z染色体基因表达的"最优"密码子.对应分析表明,影响鸡Z染色体基因表达的密码子偏性的主要因素分别为GC3s、基因的表达丰度、GC含量、CDS长度及氨基酸的疏水性.鸡Z染色体基因表达的密码子用法受到了核苷酸组成偏好的显著影响,这种核苷酸组成偏好很可能是突变偏畸、固定偏畸及基因转换导致的.对于鸡这种群体有效规模较大的群体,密码子的偏性更有可能是核苷酸组成偏好及选择等因素综合作用的结果.