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91.
从已构建的家蚕蛹期cDNA文库中筛选得到一条新的cDNA片断,经生物信息学分析发现其编码框具有脂质运载蛋白(lipocalin)保守结构域,命名为BmLip32基因,GenBank登录号为FJ602775。构建融合表达质粒pET-28a-BmLip32后转化大肠杆菌BL21并诱导表达,将纯化的His-BmLip32融合蛋白免疫新西兰大白兔成功制备多克隆抗体,效价大于1∶12 800。RT-PCR检测结果表明BmLip32在家蚕蛹期转录水平最高,在5龄幼虫头部中的转录水平明显高于其它组织。Western blotting分析结果显示BmLip32在5龄幼虫头部大量表达。免疫细胞化学实验显示BmLip32蛋白存在于家蚕Bm5细胞的细胞质中。推测BmLip32基因是家蚕神经系统发育相关的重要调控基因。 相似文献
92.
93.
用农杆菌介导法将外源基因导入植物是植物遗传转化的一种首选方法。为了获得较高的转化率,往往需要选择对转化目标植物敏感的农杆菌菌株。本实验利用冻融法将农杆菌LBA4404/pCG-Ⅱ中的目的片段转移到农杆菌EHA105中,通过PCR扩增、斑点杂交和测序,证明了农杆菌LBA4404/pCG-Ⅱ中的目的片段已成功转移到农杆菌EHA105中。利用该方法更换农杆菌菌株,可满足不同植物对不同农杆菌菌株的要求。 相似文献
94.
95.
Floriane L’Haridon Sébastien Aimé Sébastien Duplessis Claude Alabouvette Christian Steinberg Chantal Olivain 《Physiological and Molecular Plant Pathology》2011,76(1):9-19
Pathogenic isolates of Fusarium oxysporum applied on a non-host plant species, as soil-borne non-pathogenic isolates, are able to protect this plant against pathogenic strains inducing wilts. Several modes of action contribute to the biocontrol activity of these protective strains; however the genetic basis of the biocontrol mechanisms is far from being understood. The aim of this study was to identify genes involved in biocontrol activity of F. oxysporum using an original model made of Fom24, a strain protective on tomato and its mutant rev157 which has lost its protective capacity. A Rapid Subtractive Hybridization (RaSH) approach was chosen to identify genes up-regulated in the protective or in the non-protective interaction when germinated conidia of either Fom24 or rev157 are confronted to tomato cell cultures. A total of 86 up-regulated sequences were generated, 42 and 44 from the protective and the non-protective interaction respectively. Homology searches led to identification of both plant and fungal genes that were grouped according to their putative functions. Among plant genes, those involved in plant response to stresses were the most abundant. Expression profiles of genes homolog to a basic endochitinase, a ferredoxine-NADP(H) reductase (FNR), an ATP synthase and the RPM1-interacting protein 4 (RIN4) were confirmed by Northern blotting. A large proportion of fungal sequences were encoding genes of unknown function; among other, those involved in response to oxidative stress and a gene putatively encoding an enolase are the most promising to further study their potential role in the protective interaction between F. oxysporum and tomato. 相似文献
96.
瘦肉型与脂肪型猪血清Leptin的比较检测 总被引:3,自引:0,他引:3
为了研究我国脂肪型猪与引入的瘦肉型猪ob基因的蛋白表达差异,用Western杂交比较检测了内江猪、八眉猪、长白猪和杜洛克猪的血清Leptin水平。结果发现,脂肪型猪体内存在Leptin抵抗现象,血清Leptin水平比瘦肉型猪高3.23倍;同时发现一个大小约为33ku的蛋白与Leptin有一定的结构同源性,该蛋白也可能是Leptin的二聚体;另外,脂肪型猪ob基因的表达高于瘦肉型猪,二者肥胖程度和瘦肉率性状的差异可能还存在与ob基因表达有关的机制。 相似文献
97.
研究目的为制备E.wenyoni特异性诊断抗原及研制高效附红细胞体疫苗提供基础进行试验;方法从自然感染温氏附红细胞体(E.wenyoni)的牛血液中纯化附红细胞体后,采用SDS-PAGE和免疫印迹技术分析E.wenyoni抗原蛋白组分;结果SDS-PAGE结果显示,E.wenyoni全蛋白分子量范围为24kD ̄150kD,主要的9种蛋白质分子量分别为141.34kD,107.27kD,86.03kD,68.05kD,56.21kD,44.30kD,32.99kD,28.89kD,24.59kD;免疫印迹筛选出3特异性蛋白质,分子量分别为147.31kD,49.03kD,35.72kD;结论E.wenyoni主要由九种类抗原蛋白组成,3种特异性蛋白质,可作为E.weny-oni特异性诊断抗原及附红细胞体疫苗的保护性抗原。 相似文献
98.
培养11株卵巢癌细胞系,收获细胞,对其进行胞质、胞核蛋白质提取,Western-blotting观察核转录因子(NFkB)家族蛋白及其抑制物的表达;采用免疫组化方法检测卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中NFkB蛋白的表达。结果表明:111个卵巢癌细胞系P50、P65和IkB-α胞质表达阳性率分别为63.6%、45.5%、81.9%,胞核表达阳性率分别为63.6%、54.5%、18.2%。2在卵巢良性上皮性肿瘤、卵巢交界性上皮性肿瘤和卵巢癌中NFkB的阳性表达率分别为33.3%、37.5%和65.0%;3在卵巢癌组织,P65核染色阳性与分化程度、淋巴结转移、临床分期及肿瘤大小明显相关(P<0.05)。NFkB与卵巢癌细胞的发生、发展有关,NFkB可望成为判断卵巢癌预后新的标志物。 相似文献
99.
棉铃虫和粘虫不同组织的氨肽酶活性及与Bt毒蛋白结合特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用棉铃虫和粘虫制备不同组织匀浆液,分别进行了蛋白质含量和氨肽酶N活性测定,不同组织样品与毒蛋白点杂交测试,中肠可溶性蛋白与Bt毒蛋白的Western印迹。结果表明:棉铃虫和粘虫肠部组织酶活性都非常高,并且肠部组织样品和Bt毒蛋白都有点杂交结合;但只有棉铃虫中肠刷状缘膜小泡(BBMV)和Bt毒蛋白有Western印迹,而粘虫中肠BBMV和Bt毒蛋白没有Western印迹。 相似文献
100.
【目的】探究透明质酸合成酶2(hyaluronate synthase 2,HAS2)和前列腺素内过氧化物合酶2(prostaglandin-endoperoxide synthase 2,PTGS2)在牦牛不同时期卵巢中的定位与表达情况,为进一步提高耗牛生育能力提供理论依据。【方法】采集临床健康牦牛不同时期(卵泡期、黄体期、妊娠期)的卵巢作为试验样品,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting方法检测牦牛不同时期卵巢中HAS2、PTGS2基因水平和蛋白水平的表达量,采用免疫组化(IHC)法检测HAS2和PTGS2在牦牛不同时期卵巢中的分布情况。【结果】HAS2基因在耗牛黄体期卵巢的表达量显著高于卵泡期和妊娠期(P0.05),在卵泡期卵巢的表达量显著高于妊娠期(P0.05);PTGS2基因在黄体期卵巢的表达量显著高于其他2个时期(P0.05),在卵泡期卵巢的表达量显著高于妊娠期(P0.05)。HAS2蛋白在耗牛3个时期卵巢中均有表达,其中在黄体期卵巢的表达量显著高于其他2个时期(P0.05),且妊娠期卵巢的表达量显著高于卵泡期(P0.05);PTGS2蛋白在黄体期卵巢的表达量显著高于其他2个时期(P0.05),且卵泡期卵巢的表达量显著高于妊娠期(P0.05)。IHC试验表明,HAS2和PTGS2蛋白在耗牛卵巢黄体细胞中表达量最高,在卵泡颗粒层和卵丘细胞中也有表达。【结论】HAS2和PTGS2在牦牛不同时期卵巢中的表达具有显著差异性,推测HAS2和PTGS2可能参与牦牛生殖生理过程的调控。 相似文献